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文档简介

1、实验六微生物的显微直接计数 1. 了解血球计数板的计数原理，掌握 血球计数板的计数方法。2. 观察酵母菌的形态，学习区分酵母 菌死活细胞的方法。一、目的要求（一）血球计数板计数原理 血球计数板是一块特制的载玻片，有四条竖槽和一条横槽。横槽两边的平台上各有一个有九个大方格的方格网，中间大方格为计数室：边长为，深为0.1mm，容积为0.1mm3(10-4ml)。计数室有两种规格：一是分为16个中方格，每中方格中有25个小方格；另一种是分为25个中方格，每中方格有16个小方格。两种都共有400个小方格。二、基本原理 4-2计数板结构血球计数板高度0.1mm计菌器高度0.02mm每一个大方格边长为 1

2、mm，则每一大方格的面积为1mm2 ，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3 。其计算方法如下： 1 16 25 的计数板计算公式 细胞数/mL=(100 小格内的细胞数/ 100) 400 1000 稀释倍数 2 25 16 的计数板计算公式 细胞数/mL=(80 小格内的细胞数 /80) 400 1000 稀释倍数 （二）区分酵母菌死活细胞基本原理 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型是无色。 用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成无色的还原型。具有还原能力的酵母

3、活细胞是无色的或淡蓝色，而死细胞或代谢作用的衰老细胞则呈蓝色。 1. 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别(1)在载玻片上加半滴美蓝染液，在染液上 滴一滴菌液。取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下盖在菌液上。(2)将标本片放3分钟后，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。四、操作步骤 （1）稀释 将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。 （ 2）镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后用电吹风吹干后 才能进行计数。 2. 酵母菌液的计数（3）加样品 在血球计数板上盖上盖玻片, 用滴管将摇匀的酵母菌液由盖玻片边的小槽滴一小滴,菌液会自动进入计数室，静置5分钟。出芽菌计数压线菌计数五、实验报告各个中格中菌数AB菌数 /mL二室平均值12345第一室第二室注：A 表示五个中方格中的总菌数； B 表示菌液稀释倍数。1. 将结果记录于下表中。2. 酵母菌死活细胞的比例？1、用此法计数的结

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