药典生物样品定量分析方法验证指导原则

1、精心整理生物样品定量剖析方法考证指导原则一、范围正确测定生物基质（如全血、血清、血浆、尿）中的药物浓度，对于药物和制剂研发特别重要。这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性，或依据毒动学、药动学和生物等效性试验的结果做出重点性决定。所以，一定完好地考证和记录应用的生物剖析方法，以获取靠谱的结果。本指导原则供给生物剖析方法考证的要求，也波及非临床或临床试验样品实质剖析的基本要求，以及何时能够使用部分考证或交错考证，来代替完好考证。本指导原则二和三主要针对色谱剖析方法，四针对配体联合剖析方法。生物样品定量剖析方法考证和试验样品剖析应切合本指导原则的技术要求。应当在相应的生物样品剖析中恪守GLP原则

2、或GCP原则。二、生物剖析方法考证（一）剖析方法的完好考证剖析方法考证的主要目的是，证明特定方法对于测定在某种生物基质中剖析物浓度的靠谱性。别的，方法考证应采纳与试验样品同样的抗凝剂。一般应付每个新剖析方法和新剖析物进行完好考证。当难于获取同样的基质时，能够采纳适合基质代替，但要说明原由。一个生物剖析方法的主要特色包含：选择性、定量下限、响应函数和校订范围（标准曲线性能）、正确度、精细度、基质效应、剖析物在生物基质以及溶液中储藏和办理全过程中的稳固性。有时可能需要测定多个剖析物。这可能波及两种不一样的药物，也可能波及一个母体药物及其代谢物，或一个药物的对映体或异构体。在这些状况下，考证和剖析的

3、原则合用于所有波及的剖析物。比较标准物质在方法考证中，含有剖析物比较标准物质的溶液将被加入到空白生物基质中。使用适合的内标。别的，色谱方法往常应当从可追忆的根源获取比较标准物质。应当科学论证比较标准物质的合用性。剖析证书应当确认比较标准物质的纯度，并供给储藏条件、无效日期和批号。对于内标，只需能证明其合用性即可，比如显示该物质自己或其有关的任何杂质不产生扰乱。当在生物剖析方法中使用质谱检测时，介绍尽可能使用稳固同位素标志的内标。它们一定拥有足够高的同位素纯度，而且不发生同位素互换反响，以防止结果的偏差。选择性该剖析方法应当能够划分目标剖析物和内标与基质的内源性组分或样品中其余组分。应当使用起码

4、个受试者的适合的空白基质来证明选择性（动物空白基质能够不一样批次混淆），它们被分别剖析并评论扰乱。当扰乱组分的响应低于剖析物定量下限响应的20%，并低于内标响应的5%时，往常即能够接受。精心整理应当观察药物代谢物、经样品预办理生成的分解产物以及可能的同服药物惹起扰乱的程度。在适合状况下，也应当评论代谢物在剖析过程中答复转变为母体剖析物的可能性。残留应当在方法成立中观察残留并使之最小。残留可能不影响正确度和精细度。应经过在注射高浓度样品或校订标样后，注射空白样品来预计残留。高浓度样品以后在空白样品中的残留应不超出定量下限的20%，而且不超出内标的5%。假如残留不行防止，应试虑特别举措，在方法考证

5、时查验并在试验样品剖析时应用这些举措，以保证不影响正确度和精细度。这可能包含在高浓度样品后注射空白样品，而后剖析下一个试验样品。定量下限定量下限是能够被靠谱定量的样品中剖析物的最低浓度，拥有可接受的正确度和精细度。定量下限是标准曲线的最低点，应合用于预期的浓度和试验目的。标准曲线应当在指定的浓度范围内评论仪器对剖析物的响应，获取标准曲线。经过加入已知浓度的剖析物（和内标）到空白基质中，制备各浓度的校订标样，其基质应当与目标试验样品基质同样。方法考证中研究的每种剖析物和每一剖析批，都应当有一条标准曲线。在进行剖析方法考证以前，最好应当认识预期的浓度范围。标准曲线范围应当尽量覆盖预期浓度范围，由定

6、量下限和定量上限（校订标样的最高浓度）来决定。该范围应当足够描绘剖析物的药动学。应当使用起码6个校订浓度水平，不包含空白样品（不含剖析物和内标的办理过的基质样品）和零浓度样品（含内标的办理过的基质）。每个校订标样能够被多次办理和剖析。应当使用简单且足够描绘仪器对剖析物浓度响应的关系式。空白和零浓度样品结果不该参加计算标准曲线参数。应当提交标准曲线参数，测定校订标样后回算得出的浓度应一并提交。在方法考证中，起码应当评论3条标准曲线。校订标样回算的浓度一般应当在标示值的15%以内，定量下限处应当在20%内。起码75%校订标样，含最少6个有效浓度，应知足上述标准。假如某个校订标样结果不切合这些标准，

7、应当拒绝这一标样，不含这一标样的标准曲线应被从头评论，包含回归剖析。最好使用新鲜配制的样品成立标准曲线，但假如有稳固性数据支持，也能够使用早先配制并储藏的校订标样。正确度剖析方法的正确度描绘该方法测得值与剖析物标示浓度的靠近程度，表示为：（测得值/真切值）xl00%。应采纳加入已知量剖析物的样品来评估正确度，即质控样品。质控样品的配制应当与校订标样分开进行，使用另行配制的贮备液。应当依据标准曲线剖析质控样品，将获取的浓度与标示浓度对照。正确度应报告为标示值的百分比。应经过单调剖析批（批内正确度）和不一样剖析批（批间正确度）获取质控样品值来评论正确度。精心整理为评论一个剖析批中不一样时间的任何趋

8、向，一个剖析批预期的样品数。介绍以质控样品剖析批来证明正确度，其样品数许多于批内正确度为了考证批内正确度，应取一个剖析批的定量下限及低、中、高浓度质控样品，每个浓度起码用5个样品。浓度水平覆盖标准曲线范围：定量下限，在不高于定量下限浓度3倍的低浓度质控样品，标准曲线范围中部邻近的中浓度质控样品，以及标准曲线范围上限约75%处的高浓度质控样品。正确度均值一般应在质控样品标示值的15%以内，定量下限正确度应在标示值的土20%范围内。批间正确度经过起码3个剖析批，且起码两天进行，每批用定量下限以及低、中、高浓度质控样品，每个浓度起码5个测定值来评论。正确度均值一般应在质控样品标示值的15%范围内，对

9、于定量下限，应在标示值的20%范围内。报告的正确度和精细度的考证数据应当包含所有获取的测定结果，可是已经记录显然失误的状况除外。精细度剖析方法的精细度描绘剖析物重复测定的靠近程度，定义为丈量值的相对标准差（变异系数）。应使用与证明正确度同样剖析批样品的结果，获取在同一批内和不一样批间定量下限以及低、中、高浓度质控样品的精细度。对于考证批内精细度，起码需要一个剖析批的4个浓度，即定量下限以及低、中、高浓度，每个浓度起码5个样品。对于质控样品，批内变异系数一般不得超出15%，定量下限的变异系数不得超出20%。对于考证批间精细度，起码需要3个剖析批（起码2天）的定量下限以及低、中、高浓度，每个浓度起

10、码5个样品。对于质控样品，批间变异系数一般不得超出15%，定量下限的变异系数不得超出20%。稀释靠谱性样品稀释不该影响正确度和精细度。应当经过向基质中加入剖析物至高于定量上限浓度，并用空白基质稀释该样品（每个稀释因子起码5个测定值），来证明稀释的靠谱性。正确度和精细度应在15%以内，稀释的靠谱性应当覆盖试验样品所用的稀释倍数。能够经过部分方法考证来评论稀释靠谱性。假如能够证明其余基质不影响精细度和正确度，也能够接受其使用。基质效应当采纳质谱方法时，应当观察基质效应。使用起码6批来自不一样供体的空白基质，不该使用归并的基质。假如基质难以获取，则使用少于6批基质，但应当说明原由。对于每批基质，应当

11、经过计算基质存在下的峰面积（由空白基质提取后加入剖析物和内标测得），与不含基质的相应峰面积（剖析物和内标的纯溶液）比值，计算每一剖析物和内标的基质因子。进精心整理一步经过剖析物的基质因子除以内标的基质因子，计算经内标归一化的基质因子。从6批基质计算的内标归一化的基质因子的变异系数不得大于15%。该测定应分别在低浓度和高浓度下进行。假如不可以合用上述方式，比如采纳在线样品预办理的状况，则应当经过剖析起码6批基质，分别加入高浓度和低浓度（定量下限浓度3倍以内以及靠近定量上限），来获取批间响应的变异。其考证报告应包含剖析物和内标的峰面积，以及每同样品的计算浓度。这些浓度计算值的整体变异系数不得大于1

12、5%。除正常基质外，还应关注其余样品的基质效应，比如溶血的或高血脂的血浆样品等。稳固性一定在剖析方法的每一步骤保证稳固性，用于检查稳固性的条件，比如样品基质、抗凝剂、容器械料、储藏和剖析条件，都应当与实质试验样品的条件相像。用文件报导的数据证明稳固性是不够的。采纳低和高浓度质控样品（空白基质加入剖析物至定量下限浓度3倍以内以及靠近定量上限），在预办理后以及在所评论的条件储藏后立刻剖析。由新鲜制备的校订标样获取标准曲线，依据标准曲线剖析质控样品，将测得浓度与标示浓度对比较，每一浓度的均值与标示浓度的偏差应在15%范围内。应经过适合稀释，考虑到检测器的线性和测定范围，查验贮备液和工作溶液的稳固性。

13、稳固性检查应观察不一样储藏条件，时间尺度应不小于试验样品储藏的时间。往常应当进行以下稳固性观察：剖析物和内标的贮备液和工作溶液的稳固性；从冰箱储藏条件到室温或样品办理温度，基质中剖析物的冷冻和消融稳固性；基质中剖析物在冰箱储藏的长久稳固性；别的，假如合用，也应当进行以下观察：办理过的样品在室温下或在试验过程储藏条件下的稳固性；办理过的样品在自动进样器温度下的稳固性。在多个剖析物试验中，特别是对于生物等效性试验，应当关注每个剖析物在含所有剖析物基质中的稳固性。应特别关注受试者采血时，以及在储藏前预办理的基质中剖析物的稳固性，以保证由剖析方法获取的浓度反应受试者采样时刻的剖析物浓度。可能需要依据剖

14、析物的构造，按详细状况证明其稳固性。（二）部分考证在对已被考证的剖析方法进行小幅改变状况下，依据改变的实质内容，可能需要部分方法考证。可能的改变包含：生物剖析方法转移到另一个实验室，改变仪器、校订浓度范围、样品体积，其余基质或物种，改变抗凝剂、样品办理步骤、储藏条件等。应报告所有的改变，并对从头考证或部分考证的范围说明原由。（三）交错考证精心整理应用不一样方法从一项或多项试验获取数据，或许应用同一方法从不一样试验地址获取数据时，需要相互比较这些数据时，需要进行剖析方法的交错考证。假如可能，应在试验样品被剖析以行进行交错考证，同一系列质控样品或试验样品应被两种剖析方法测定。对于质控样品，不一样方

15、法获取的均匀正确度应在15%范围内，假如放宽，应当说明原由。对于试验样品，起码67%样品测得的两组数值差别应在二者均值的20%范围内。三、试验样品剖析在剖析方法考证后，能够进行试验样品或受试者样品剖析。需要在试验样品剖析开始前证明生物剖析方法的效能。应依据已考证的剖析方法办理试验样品以及质控样品和校订标样，以保证剖析批被接受。（一）剖析批一个剖析批包含空白样品和零浓度样品，包含起码6个浓度水平的校订标样，起码3个浓度水平质控样品（低、中、高浓度两重样品，或起码试验样品总数的5%，二者中取数目更多者），以及被剖析的试验样品。所有样品（校订标样、质控和试验样品）应依据它们将被剖析的次序，在同同样品

16、批中被办理和提取。一个剖析批包含的样品在同一时间办理，即没有时间间隔，由同一剖析者接踵办理，使用同样的试剂，保持一致的条件。质控样品应当分别到整个批中，以此保证整个剖析批的正确度和精细度。对于生物等效性试验，建议一名受试者的所有样品在同一剖析批中剖析，以减少结果的变异。（二）剖析批的接受标准应在剖析试验计划或标准操作规程中，规定接受或拒绝一个剖析批的标准。在整个剖析批包含多个部分批次的状况，应当针对整个剖析批，也应当针对剖析批中每一部分批次样品定义接受标准。应当使用以下接受标准：校订标样测定回算浓度一般应在标示值的15%范围内，定量下限应在20%范围内。许多于6个校订标样，起码75%标样应切合

17、这些标准。假如校订标样中有一个不切合标准，则应当拒绝这个标样，从头计算不含该标样的标准曲线，并进行回归剖析。质控样品的正确度值应当在标示值的15%范围内。起码67%质控样品，且每一浓度水平起码50%样品应切合这一标准。在不知足这些标准的状况下，应当拒绝该剖析批，相应的试验样品应当从头提取和剖析。在同时测定几个剖析物的状况下，对每个剖析物都要有一条标准曲线。假如一个剖析批对于一个剖析物能够接受，而对于另一个剖析物不可以接受，则接受的剖析物数据能够被使用，但应当从头提取和剖析样品，测定被拒绝的剖析物。假如使用多重校订标样，此中仅一个定量下限或定量上限标样不合格，则校订范围不变。所有接受的剖析批，每

18、个浓度质控样品的均匀正确度和精细度应当列表，并在剖析报告中给出。假如总均匀正确度和精细度超出15%，则需要进行额外的观察，说明该偏差的原由。在生物等效性试验状况下，这可能致使数据被拒绝。（三）校订范围精心整理假如在试验样品剖析开始前，已知或预期试验样品中的剖析物浓度范围窄，则介绍缩窄标准曲线范围，调整质控样品浓度，或许适合加入质控样品新的浓度，以充分反应试验样品的浓度。假如看起来好多试验样品的剖析物浓度高于定量上限，在可能的状况下，应当延长标准曲线的范围，加入额外浓度的质控样品或改变其浓度。起码2个质控样品浓度应当落在试验样品的浓度范围内。假如标准曲线范围被改变，则生物剖析方法应被从头考证（部

19、分考证），以确认响应函数并保证正确度和精细度。（四）试验样品的从头剖析和报告值选择应当在试验计划或标准操作规程中早先确立从头剖析试验样品的原由以及选择报告值的标准。在试验报告中应当供给从头剖析的样品数目以及占样品总数的比率。从头剖析试验样品可能鉴于以下原由：因为校订标样或质控样品的正确度或精细度不切合接受标准，致使一个剖析批被拒绝；内标的响应与校订标样和质控样品的内标响应差别显着；进样不妥或仪器功能异样；测得的浓度高于定量上限，或低于该剖析批的定量下限，且该批的最低浓度标样从标准曲线中被拒绝，致使比其余剖析批的定量下限高；在给药前样品或宽慰剂样品中测得可定量的剖析物；色谱不好。对于生物等效性试

20、验，往常不可以接受因为药动学原由从头剖析试验样品。在因为给药前样品阳性结果或许因为药动学原由进行从头剖析的状况下，应当供给从头剖析样品的身份、初始值、从头剖析的原由、从头剖析获取值、最后接受值以及接受原由。在仪器故障的状况下，假如已经在方法考证时证了然从头进样的重现性和进样器内稳固性，则能够将已经办理的样品从头进样。但对于拒绝的剖析批，则需要从头办理样品。（五）色谱积分应在标准操作规程中描绘色谱的积分以及从头积分。任何对该标准操作规程的偏离都应在剖析报告中议论。实验室应当记录色谱积分参数，在从头积分的状况下，记录原始和最后的积分数据，并在要求时提交。（六）用于评论方法重现性的试验样品再剖析在方

21、法考证中使用校订标样和质控样品可能没法模拟实质试验样品。比如，蛋白联合、已知和未知代谢物的答复转变、样品均一性或同服药物惹起的差别，可能影响这些样品在办理和储藏过程中剖析物的正确度和精细度。所以，介绍经过在不一样天后，在此外一个剖析批中从头剖析试验样品，来评论实质样品测定的正确度。查验的范围由剖析物和试验样品决定，并应当鉴于对剖析方法和剖析物的深人理解。建议获取cmax邻近和除去相样品的结果，一般应当从头剖析10%样品，假如样品总数超出1000，则高出部分从头剖析5%样品。精心整理对于起码67%的重复测试，原始剖析测得的浓度和从头剖析测得的浓度之间的差别应在二者均值的20%范围内。试验样品再剖

22、析显示偏差结果的状况下，应当进行观察，采纳足够的步骤优化剖析方法。起码在以下情况下，应当进行试验样品的再剖析：毒动学试验，每个物种一次所有重点性的生物等效性试验初次用于人体的药物试验初次用于患者的药物试验初次用于肝或肾功能不全患者的药物试验对于动物试验，可能仅需要在初期重点性试验中进行实质样品的再剖析，比如波及给药剂量和测得浓度关系的试验。四、配体联合剖析配体联合剖析主要用于大分子药物。前述的考证原则以及对试验样品剖析的考虑一般也合用。可是因为大分子固有的特色和构造复杂性，使其难以被提取，所以经常在无早先分别的状况下测定剖析物。别的，方法的检测终点其实不直接来自剖析物的响应，而来自与其余联合试

23、剂产生的间接信号。配体联合剖析中，每个校订标样、质控样品以及待测样品一般都采纳复孔剖析。如无特别说明，本节以双孔剖析为原则。（）方法考证前的考量标准品选择生物大分子拥有不均一性，此中成分的效价与免疫反响可能存在差别。所以应付标准品进行充分表征。应尽量使用纯度最高的标准品。用于配制校订标样和质控样品的标准品应尽量与临床和非临床试验使用的受试品批号同样。标准品批号更改时，应尽量对其进行表征和生物剖析评论，以保证方法性能不变。基质选择一般不介绍使用经碳吸附、免疫吸附等方法提取过的基质，或透析血清、蛋白缓冲液等代替实质样品基质成立剖析方法。但在某些状况下，复杂生物基质中可能存在高浓度与剖析物构造有关的

24、内源性物质，其高度扰乱致使根本没法测定剖析物。在无其余可选定量策略的前提下，可同意使用代替基质成立剖析方法。但应付使用代替基质成立方法的必需性加以证明。可采纳代替基质成立标准曲线，但质控样品一定用实质样品基质配制，应经过计算正确度来证明基质效应的除去。最低需求稀释度确实定剖析方法成立与考证过程中，可能需要对基质进行必需的稀释，以降低其产生的高背景信号。在此状况下，应观察最低需求稀释度。它是指剖析方法中为提升信噪比、减少基质扰乱、优化正确度与精心整理精细度而一定使用缓冲液对生物样品进行稀释的最小倍数。应使用与试验样品同样的基质来配制加药样品来确立最低需求稀释度。试剂方法的重点试剂，如联合蛋白、适

25、配子、抗体或偶联抗体、酶等，对剖析结果会产生直接影响，因此须保证质量。假如在方法考证或样品剖析过程中，重点试剂批次发生改变，须确认方法性能不所以改变，进而保证不一样批次结果的一致性。不论是重点试剂，仍是缓冲液、稀释液、酸化剂等非重点试剂，都应付保持其稳固性的保障条件进行记录，以保证方法性能长久不变。（二）方法考证完好考证（1）标准曲线与定量范围标准曲线反应了剖析物浓度与仪器响应值之间的关系。在配体联合剖析方法中，标准曲线的响应函数是间接测得的，一般呈非线性，常为S型曲线。应使用起码6个有效校订标样浓度成立标准曲线。校订标样应在预期定量范围对数坐标上近似等距离散布。除校订标样外，可使用锚定点协助

26、曲线拟合。考证过程中，须起码对6个独立的剖析批进行测定，结果以列表形式报告，以确立标准曲线回归模型整体的稳重性。拟合时，一条标曲同意清除因为明确或不明原由产生失误的浓度点。清除后应起码有75%的校订标样回算浓度在标示值的20%（定量下限与定量上限在25%）范围内。定量下限与定量上限之间的浓度范围为标准曲线的定量范围。锚定点校订样品是处于定量范围以外的标样点，用于协助拟合配体联合剖析的非线性回归标准曲线，因其在定量范围以外，可不依据上述接受标准。（2）特异性特异性是指在样品中存在有关扰乱物质的状况下，剖析方法能够正确、专一地测定剖析物的能力。构造有关物质或预期合用药物应不影响方法对剖析物的测定。

27、如在方法成立与考证阶段没法获取构造有关物质，特异性评论可在最先方法考证达成后增补进行。应采纳不曾裸露于剖析物的基质配制高浓度与低浓度质控样品，加入递加浓度的有关扰乱物质或预期合用药物进行特异性观察。未加入剖析物的基质也应同时被丈量。要求起码80%以上的质控样品正确度在20%范围内（假如在定量下限水平，则在25%范围内），且未加入剖析物的基质的丈量值应低于定量下限。（3）选择性方法的选择性是指基质中存在非有关物质的状况下，正确测定剖析物的能力。因为生物大分子样品一般不经提取，基质中存在的非有关物质可能会扰乱剖析物的测定。应经过向起码10个不一样根源的基质加入定量下限和定量上限水平的剖析物来观察选

28、择性，也应同时丈量未加入剖析物的基质。选择性观察要求起码80%以上的样品正确度在20%范围内（假如在定量下限水平，则在25%范围内），且未加入剖析物的基质的丈量值应低于定量下限。假如扰乱拥有浓度依靠性，则须测定发生精心整理扰乱的最低浓度。在此状况下，可能需要在方法考证以前调整定量下限。依据项目需要，可能需要针对病人集体基质或特别基质（如溶血基质或高血脂基质）观察选择性。（4）精细度与正确度应选择起码5个浓度的质控样品进行正确度、精细度以及方法总偏差观察。包含定量下限浓度、低浓度质控（定量下限浓度的3倍以内）、中浓度质控（标准曲线中段）、高浓度质控（定量上限浓度75%以上）以及定量上限浓度质控。

29、低、中、高浓度质控标示值不得与校订标样浓度标示值同样，质控样品应经过冷冻，并与试验样品采纳同样的方法进行办理。不建议采纳新鲜配制的质控样品进行精细度与正确度观察。批间观察应在多日内进行起码6个独立的剖析批测定。每批内应包含起码3套质控样品（每套含起码5个浓度的质控样品）。对于批内和批间正确度，各浓度质控样品的均匀浓度应在标示值的20%（定量下限和定量上限为25%）范围内。批内和批间精细度均不该超出20%（定量下限和定量上限为25%）。别的，方法总偏差（即相对偏差绝对值与变异系数之和）不该超出30%（定量下限和定量上限为40%）。（5）稀释线性在标准曲线定量范围不可以覆盖预期样品浓度的状况下，应

30、使用质控样品进行方法的稀释线性观察，即评论样品浓度超出剖析方法的定量上限时，用空白基质将样品浓度稀释至定量范围内后，方法能否正确测定。进行稀释实验的另一目的是观察方法能否存在“前带”或“钩状”效应，即高浓度剖析物惹起的信号克制。稀释线性观察中，稀释至定量范围内的每个QC样品经稀释度校订后的回算浓度应在标示值的20%范围内，且所有QC样品回算终浓度的精细度不超出20%。（6）平行性为发现可能存在的基质效应，或代谢物的亲和性差别，在可获取真切试验样品的状况下，应试虑对标准曲线和系列稀释的试验样品之间进行平行性观察。应选用高浓度试验样品（最好采纳高出定量上限的样品），用空白基质将其稀释到起码3个不一

31、样浓度后进行测定，系列稀释样品间的精细度不该超出30%。假如存在样品稀释非线性的状况（即非平行性），则应按早先的规定予以报告。假如在方法考证时期没法获取真切试验样品，则应在获取真切试验样品后赶快进行平行性观察。（7）样品稳固性应使用低、高浓度质控样品观察剖析物的稳固性。稳固性观察应包含室温或样品办理温度下的短期稳固性，以及冻融稳固性。别的，假如试验样品需要长久冻存，则应在可能冻存样品的每个温度下进行长久稳固性观察。每一浓度质控样品应有67%以上的样品浓度在标示值的20%范围内。（8）商品化试剂盒商品化试剂盒能够用来进行试验样品剖析，但使用前一定按本指导原则的要求对其进行考证。部分考证和交错考证在二、（二）和二、（三）中表达的对于考证的各项内容都合用于配体联合剖析。（三）试验样品剖析剖析批精心整理配体联合剖析中最常使用微孔板，一个微孔板往常为一个剖析批。每个微孔板应包含一套独立的标准曲线和质控样品，以校准板间差别。在使用某些平台时，单个样品载体的通量可能有限，此时同意一个剖析批包含多个载体。可在该剖析批的首个与末个载体各设置一套标准曲线，同时在每一载体上设置质控样品。所有样品均应复孔测定。试验样品剖析的接受标准对于每个剖析批，除锚定点外，标准曲线须有75%以上的校订标样（起码6个）回算浓度在标示值的20%（定量下限和定量上限为25%）范围内。每块板