脂肪鉴定脂类细胞化学实验报告

脂类细胞化学（苏丹Ⅲ染色法）1.实验目的：用苏丹Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色，察看细胞颜色，掌握苏丹Ⅲ染液的染色方法。2.实验用品：（1）仪器及器械：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管（2）实验药品：蒸馏水、甲醛钙溶液、70%乙醇水溶液、苏丹Ⅲ染液（3）实验资料：小鼠实验原理：（1）由脂肪酸和醇作用生成的酯及其衍生物统称为脂类，这是一类一般不溶于水而溶于脂溶性溶剂的化合物。脂类是机体内的一类有机大分子物质，它包含范围很广，大概上能够分为类脂和油脂两大类。类脂包含磷脂(phospholipids)，糖脂(glycolipid)和胆固醇及其酯(cholesterolandcholesterolester)三类。而油脂能够分为常温下常温液态的油和常温下固态的脂肪两类。这几种脂类化学构造有很大差别，生理功能各不相同。其共同物理性质是不溶于水而溶于有机溶剂，在水中可互相齐集形成内部疏水的齐集体。（2）在固定细胞时，往常使用脂溶性固定液。但是，判定的资料是脂肪时，脂溶性的固定液会溶解脂肪，以致把切片放到显微镜下察看时，察看不到被染色的脂肪，只好看到脂肪细胞中有很大的空洞。最好的固定资料是甲醛类的固定液。如医学上保留尸体采纳的是福尔马林，即40%的甲醛水溶液，本次实验采纳的则是甲醛钙溶液。3）光学显微镜的切片多是白腊切片。在熔接白腊时，需要用到脂溶性溶剂，而脂溶性溶剂会溶解细胞中的脂肪，所以本次实验不行采纳白腊切片。可是锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等有机溶剂，能够采纳白腊切片。4）制作切片有多种方法，如冰冻切片、明胶包埋冰冻切片、本次实验采纳的是操作简单的铺片法。5）脂类染色的原理是，染料溶于脂类显色。选择溶剂时应注意，溶剂一定既溶解的染料，又不溶解掉脂类。实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。剪开腹腔，用镊子提起小肠，使盖玻片紧贴于肠系膜。用剪子将连同盖玻片和其上粘的肠系膜剪下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上，固定15分钟,（2）吸蒸馏水滴于载玻片、载玻片之间冲刷，用滴管不停汲取液体以去除固定液。（3）用70%的乙醇水溶液取代蒸馏水重复上一步骤，进行冲刷。（4）用苏丹Ⅲ染液染色30mins。（5）染色结束时，用吸水纸吸去剩余染液。擦净盖玻片周边及表面，用显微镜察看。实验结果：脂肪细胞被苏丹Ⅲ染液染成橘红色。细胞四周有溢出的脂肪粒，呈圆形，橘红色。10*4显微镜下察看：10*10显微镜下察看：10*40显微镜下察看：剖析与议论（1）结果剖析：脂肪细胞中含有大批脂肪，脂肪被苏丹Ⅲ染液染成橘红色，因而使整个细胞体现橘红色。某些脂肪细胞破碎，而使脂肪溢出，呈橘红色的圆球状。（2）注意事项①在用盖玻片贴肠系膜：因为小鼠的肠系膜很小，因此应当提早减小盖玻片的尺寸。能够用剪刀剪或用手掰小，并尽量使最后的盖玻片呈正方形。②肠系膜的选择：肠系膜是一层包裹在小肠外的很细的薄膜，这层膜的大多数地方是没有脂肪细胞的。可是，肠系膜血管的四周有一些起保护作用的脂肪细胞。所以，选材时应注意选择含有血管的肠系膜。可是有一些血管四周的脂肪细胞特别厚，肉眼可见呈白色。这样的地方是没法察看的，所以选材时还要注意材料的透明度。③染色：染色过程为30mins，在这一过程中，染猜中的水分很有可能蒸发，所以在染色过程中应时时向载玻片中滴加染料。④察看：在把物镜由10倍转为40倍时，应试虑到物镜变长，可能会使镜面蹭到小鼠的小肠。在察看时可先将小肠切除，只察看肠系膜。⑤察看：察看时假如血管呈红色，是因为放血时没有放洁净，下次实验应当注意（3）作业：糖类的判定Molisch反响（α-萘酚反响）：此方法是判定糖类最常用的颜色反响。它的原理是：糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物能够与α-萘酚作用，形成红紫色复合物。因为在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环，所以又称紫环反响。α-萘酚也可用麝香草酚或其余的苯酚化合物取代，麝香草酚溶液比较稳固，其敏捷度与α-萘酚相同。除了糖类以外，各样糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都能够体现近似的阳性反响。所以，阴性反响证明没有糖类物质的存在；而阳性反响只好说明有糖类存在的可能。此反响不可以鉴识多聚糖如淀粉，纤维素等。Benedict反响：班氏试剂是斐林试剂的改进（也是含有Cu2+的碱性溶液），能使拥有自由醛基或酮基的糖类氧化，其自己则变为砖红色或黄色的Cu2O，可用来测定复原糖的存在。它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂，其碱性比斐林试剂弱，敏捷度高，扰乱要素少，因此在实质应用中有更多的长处。Bial反响（甲基间苯二酚反响）：戊糖与浓盐酸加热形成糠醛，在有Fe3+存在的条件下，它与甲基间苯二酚（地衣酚）缩合，形成深蓝色的积淀物（此积淀物溶于正丁醇）。己糖也能发生反响，产生灰绿色甚至棕色的积淀物。Molisch

反响（α

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萘酚反响）：

此方法是判定糖类最常用的颜色反响。它的原理是：糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物能够与α-萘酚作用，形成红紫色复合物。因为在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环，所以又称紫环反响。α-萘酚也可用麝香草酚或其余的苯酚化合物取代，麝香草酚溶液比较稳固，其敏捷度与α-萘酚相同。除了糖类以外，各样糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都能够体现近似的阳性反响。所以，阴性反响证明没有糖类物质的存在；而阳性反响只好说明有糖类存在的可能。Seliwanoff反响：相同的原理，将糖与浓酸作用后再与间苯二酚反响，假如酮糖就显鲜红色，假如醛糖就显淡红色，由此可鉴识酮糖和醛糖。蒽酮反响：糖类经浓酸水解，脱水生成的糠醛及其衍生物与蒽酮（10-酮-9，10-二氢蒽）反响生成蓝绿色复合物。Barfoedtest：查验单糖的一种试验。将5ml的Barfoed试剂煮沸，在保持其沸腾状况下迟缓地加入待检物。单糖复原比混淆物，形成红色积淀物；而双糖虽亦能复原，但反响甚慢，可与前者差别。脂肪的