01核酸提取技术相关实验-dna

DNAiso DNA100制品说本制品是一种简单、快速的组DNA（enomicDNA）提取试剂，可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞中提取基因组DNA。样品在DNisoRaget中能够充分被裂解，在加入乙醇后，会出现白色絮状的组DNA沉淀，收集并洗涤沉淀即可得到组DNA。DNisoReagt具有很强的广谱性，可以适用于各种样品的 组DNA。提取过程、快，个操作可以30分钟内完成。本制品采用的是传统的缠绕法提取DNA，所获得的 组DNA纯度高完。的 DNA可以直接用于PCRSouthrn杂交、构建 组DNA文库以及RAPD、AFLP、FLP分析等各种分子生物学实验。制品内DNAiso 100 *DNAisoReagent中含有强变性剂，应避免与皮肤、衣物等接触若不接触到眼睛或皮肤时，请立即到医院进行处理【本试剂之外所需准备试剂无水乙醇和75%乙醇8mMNaOH。低浓度NaOH溶液在空气中很容易被CO2中和，NaOH一般配制成2～4M的液，使用时再稀释，其保存时间不超过6个月，而8mMNaOH的保存Chloroform（植物DNA提取时用）操作注若要提取出完整度较高的组DNA，应尽量减少由于外力剪切作用对组DNA造成的损伤，在提取过程中应使用前端开口较大的移液枪头（实验前用灭菌的剪刀将移液枪头前端剪掉2～3mm）。提取过程中要操作，避免剧烈振荡或使用振荡器。实验操各种组织材料的DNAiso使用量及裂解方法如下实验材DNAiso使用裂解方贴壁培10ml/10cm2培养移液枪轻轻吹悬浮培1.0ml/1～3×107移液枪轻轻吹动物组1.0ml/25～50mg组匀浆器匀浆或氮研少量动物软1.0ml/5～10mg移液枪轻轻吹1.0ml/1～3×108先用溶菌酶裂解胞壁，再加DNAiso吹打裂解革兰氏1.0ml/1×109细移液枪轻轻吹实验样品的研磨和匀浆A贴壁培养细胞①倒出培养液，用1×PBS一次②每10cm2生长的培养细胞中加入1ml的DNAisoReagent，水

养皿使细胞裂解，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落（对于）。③将含有细胞的裂解液转移至离心管中，。④室温静置5分钟悬浮培养细胞（或革兰氏菌①将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8,000×g离心2分钟，弃上清②加入1ml（1×107个悬浮培养细胞或1×109个革兰氏菌细胞的使用量）的DNAisoReagent。③用移液枪反复吹打直至裂解液中无明显沉淀④室温静置5分钟动物组①将动物组织放入匀浆器中，每25～50mg组织中加入1mlDNAisoReagent。 使用匀浆器反复匀浆，直至没有明显块状组织沉淀于量少的一些软组织（5～10mg），例如脾脏、脑等可以④将裂解液转移至离心管中植物材料（或革兰氏阳性菌①将植物材料（或革兰氏阳性菌）称重后，放入研钵中加入液氮速冻，用研杵将植物材料（或革兰氏阳性菌）研磨成粉末状。②加入适量的DNiso将粉末状样品完，室温静置，直至样品完全融化，再用研杵继续研磨至裂解液呈透明状。③将裂解液转移至离心管中除杂质①离心组织裂解液经10,00×g4℃或室温离心10分钟，将上清转移至新的离心管中。此步骤可以除去裂解液中大部分的组织碎片、和多糖类成份。（对于大量的动物组织、植物材料以及其他纤维或A含量较多的材料，使用此操作，其他材料可酌情省略。）②本步骤选择使用（仅在提取植物材料时使用，可以除去大量素）颠倒混匀室温静置10分钟，1,000×g室温离心10分钟，将上层溶液转移至新的离心管中。组DNA的提取DNisoat12。反复颠倒混匀～3，N沉淀，DA缠绕出来转移至新的离心管中，或者将上清液轻轻倒出，将D002DN。组DNA沉淀的缓慢地沿离心管壁加入1ml75％的乙醇（切勿触及沉淀），轻轻上下颠倒洗涤离心管管壁，1,000×g4℃离心5分钟后弃去乙醇（为了更好地控制DNA中的盐离子含量，应尽量除净乙醇）。组DNA的溶解将除去乙醇后的组DNA沉淀在室温下干燥5～15（如果基因组DNA在空气中干燥时间过长，会很难溶解），缓慢加入适量的TEBffr（pH80）或灭菌水溶解 组DNA。一般从107～0的 A0l溶液溶解，浓度可以达到200～300n/l。从一些动物组织如肝脏、肌肉和植物中提取的组DNA通常会含有一些不溶的成份（多为多糖多酚类物质），可以通过 离心10分钟除去使用8mMNaOH促进DNA完全溶解当组DNA量较多时，在TEBr或灭菌水中不易完全溶解。此时可以使用8mMNaH来溶解 组DN。经8mMNaH溶解的组DA溶液因pH值较高，可能会影响长期 及后续PC反应等实验，需再使用HEPE溶液来调节H值。1ml mM的NaOH按下列比例添加HEPES溶液来调节pH值Final1M777157118108988

一般情况下组织或细胞中所能提取的DNA组织材起始样品组DNA肝100300～400肾100300～400脑100200～300心100200～300HL60培养细1×1050～70植物叶120～200E.coli1×1030～40有关DNA20nm、320nm、30m、280m下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度、盐浓度和蛋白质等有机物的吸光度值。O/OD80（R）体现了DNA中的蛋白质等有机物的污染程度，质量较好的DNA的R值应在1～20之间，当<18时，溶液中的蛋白质等有机物的污染比较明显；当R>22时，说明DNA已经被水解成了单核苷酸在对核酸进行吸光度检测时，需要注意稀释液应使用 Buffer如何计算DNA的浓度DNA浓度＝（OD260－OD320）×稀释倍数 μg/μl组DNA提取量较低怎么办①向组织材料中加入DNAisoReagent后，请充分研磨、匀浆【组DNA提取操作流程简图

使其充解适量的组织材料或培养细适量的组织材料或培养细室温静置5分钟10,000×g4℃离心10分上清转移至新的离心管1/2体积的无水乙醇颠倒混匀，直至出现白色絮状沉将DNA缠绕出来，转移至新的离心 上清，留沉淀，干燥5～15秒溶 组③增加DNAisoReagent的添加量提取的组DNA不溶怎么办 75%乙醇沉淀后不要干燥时间过长或加热干燥 组DNA在dH2O或TEBuffer中不易完全溶解，8mMNaOH溶解③当 组DNA的量过大时不易溶解，可以加长溶解时间或DNA应使用TEBuffer稀释后再进行吸光度值的测定，低离子强度或低pH值会使OD280值升高。③DNA未充分溶解提取的组DNA降解，为什么①使用的组织材料不够新鲜。提取组DNA的组织材料应采用新鲜的组织材料，或将新鲜的组织材料用液氮迅速冷冻后置于80℃保存。②操作剧烈造成组DNA断裂，破坏了组DNA的完整提取的组DNA中含有RNA污染，为什么①组织材料或细胞裂解后未使用离心法除去RNA②提取出 组DNA量较少时，采用离心法而未使用缠使用本试剂提取不同组织材料的组DNA，1%arse凝胶电泳结果如下。

法收 组DNA沉淀，容易带来RNA污染③如果提取 组DNA中含有RNA时，可以对提取DNA进行LiCl沉淀，以除去RNA污染，或者注 注 TAKARABIOINC ，请联络 ，或 wwwtakara-biocom。 所有商标均属于各自商标所有者 。某些商标并未在全部行政 本文件由宝日医生物技术 翻译制作 版本文件请参 61小鼠肝 组DNA2HL60细3大豆叶 组DNA 61小鼠肝 组DNA2HL60细3大豆叶 组DNA4烟草叶 组DNA6：大肠杆菌Mλ-Hind