饲料中氨基酸的测定实验报告

装装订线课程名称：饲料学指导老师：成绩：实验名称：饲料中氨基酸的测定实验类型：一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析（必填）七、讨论、心得实验目的和要求学习了解饲料中氨基酸的测定方法；学会使用全自动氨基酸分析仪；学习了解离子交换柱分离氨基酸原理；学习茚三酮显色法测定氨基酸含量的原理。实验内容和原理酸水解法是使饲料蛋白在110℃、c（HCl）=6mol/L盐酸作用下，水解成单一氨基酸，再经离子交换色谱法分离并以茚三酮做柱后衍生测定。水解中，色氨酸全部破坏，不能测量。胱氨酸和蛋氨酸部分氧化，不能测准。氧化水解法是将饲料蛋白中的含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸等)用过甲酸氧化，然后进行酸解，再经离子交换色谱分离、测定。水解中色氨酸破坏，不能测定。酪氨酸在以偏重亚硫酸钠做氧化终止剂时，被氧化，不能测准。酪氨酸、苯丙氨酸和组氨酸则在以氢溴酸作终止剂时被氧化，不能测准。主要仪器设备全自动氨基酸分析仪；旋转蒸发器；酒精喷灯；真空泵。操作方法和实验步骤试剂配置：6MHCl：50mL浓HCl中加入150mL去离子水；0.01MHCl：50uL浓HCl中加入60mL去离子水。样品前处理准确称取7.5-25mg试样于水解瓶中→加5mL6MHCl→氮气抽真空并封口→放置于110℃恒温干燥箱水解22h→冷却开管→定容至50mL→无机滤膜过滤→取2mL滤液→氮气吹干→用0.01MHCl溶解定容样品分析配置标样：取1mL氨基酸混合标样（17种），用0.01MHCl定容至25mL，得到浓度为0.1umol/mL的进样浓度；分别将标准样品和前处理好的样品用全自动氨基酸分析仪进行上机测定。经过衍生反应后的有色物对570nm，440nm光的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸的浓度（或含量）之间的关系符合耳定理，可与标准氨基酸比较作定性和定量测定。实验数据记录和处理分别用式(1)和式(2)，计算氨基酸在试样中的质量百分比：W1（％）=A1/m×10-6×D×100W2（％）=A2/m×（1-F）×10-6×D×100式中：W1:用未脱脂试样测定的某氨基酸的含量，%;W2:用脱脂试样测定的色氨基酸的含量，%;A1:每毫升上机水解液中氨基酸的含量,ng;A2:每毫升上机液中色氨酸的含量,ngm:试样质量,mgD:试样稀释倍数;F:样品中的脂肪含量，%。以两个平行试样测定结果的算术平均值报告结果，保留两位小数。考虑到上机测定的等待时间等因素，无实验数据结果。讨论、心得试验中发现氮气吹干过程中耗时很高，这主要是由于所选用的试管过长，致使挥发的水蒸气重新冷凝回流至管内，导致耗时很长；酸、碱水解法适于含动、植物蛋白的单一饲料、配合饲料、浓缩饲料和预混料中氨基酸总量的测定，酸提取法适于配合饲料、预混料和浓缩饲料中添加氨基酸，主要是赖氨酸、蛋氨酸含量的测定，也可用于苏氨酸等其他添加(游离)氨基酸含量的测定。试验中需要采取氮气抽空和封口的操作，在使用酒精喷灯进行封口操作时应小心，以免操作时玻璃管断裂致使操作失败。如果封口不完全，会造成在后续酸水解时氨基酸的损失，导致实验的不精确。色氨酸与其他氨基酸