分子生物学基础技术缩减版_第1页
分子生物学基础技术缩减版_第2页
分子生物学基础技术缩减版_第3页
分子生物学基础技术缩减版_第4页
分子生物学基础技术缩减版_第5页
免费预览已结束，剩余22页可下载查看

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

如何充分混匀冷冻细胞团块能否集中提取RNA振荡强度界面层取舍与产率和纯度RNA提取操作细节容易出问题环节同mRNA反转录为cDNA1.

引物、用途2.

模板：3.

dNTP4.

反转录酶选择：总RNA样）PCR获得目的片段非定向片段定向

片段引物中引入酶切位点设计原则提问：需要考虑几方面的因素？向一如果目的片段中含有不能避开的酶切位点怎么办？通过

操作对目的片段/载体进行改造目的片段进行改造要考虑：P2X7AGAGTAATC

TACOverlap

PCR法获得重组质粒构建W(M)P2X7表达重组质粒目的片段进行定点突变GAGATTGAAATCGAGATCGAGATAde构建W(M)P2X7单表达重组质粒Overlap

PCR法获得去BglⅡ位点的P2X7片段GAG

GAAP2X7目的片段进行定点突变PCR产物鉴定提问：PCR产物需要鉴定吗？成做到何种程度？如何选择内切酶？酶切鉴定后是否足够？PCR产物纯化提问：PCR产物能直接酶切连接吗？为何？模版、体如何纯化？提问：PCR后测OD估算产物的量可以吗？为何？PCR产物切胶纯化提问：电泳、切胶、回收注意事项电泳：切胶：回收：分子量大吸附能力强

太大或者太小的片段研究变异性质利用PCR方法获得变异片段到引物中。将目的序列Overlap

PCR。****去除中间较大片段或连接两个无关片段针对氨基酸进行定点突变二.目的片段与载体的连接质粒提问：质粒？有无办法提高质粒产量？提质粒提出两种是怎么回事？•质粒和质粒的停质粒不相容性与质粒特点不同。不质粒的提取提问：碱变性法的基本原理特DNA提问：溶液1、2、3起什么作用？操作关键降提问：如何确定质粒分子量？T载体提问：T载体是什么样的载体？提问：T载体能直接在细菌中吗？如何提问：用途？限制？提问：连接效率？目的片段与载体的连接载体与片段的连接提问：通常连接反应需要多少载体及片段？的载（提问：连接条件？提问：粘性末端连接策略？切后提问：平末端连接策略？三.

细菌转化提问：常用于克隆的菌株有哪些？特点？高缺乳提问：什么情况下会出现菌落？为什么？提问：转化过程中16小时无菌落，继续培养到30小时后出现小菌落怎么办？往不长提问：α互补？U提问：挑选什么样的克隆？提问：重组质粒需要进行哪些鉴定？特点：快；缺点：可能有假阳性。电质粒上所包含的酶切位点进行单酶切或双酶切；目的片段上所含的酶切位点进行单酶切；采用质粒上及目的片段上的酶切位点进行双酶切鉴定外源蛋白的表达策略优缺点？关注点？•优缺点？•关注点？优点：操作容易、周期短、产量高。缺点：

无糖基化、

活性（容易形成包含体）去掉

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论