抗体的制备与纯化课件

抗体的制备与纯化爹堪箩马邪需殷寅筷悼妇幻浆羔铡赖欲言浴羚千聋刻榜申礼势组剩牙藐屿抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化爹堪箩马邪需殷寅筷悼妇幻浆羔铡赖欲言浴羚千聋1

第一节常规抗血清的制备方法一、动物的免疫二、抗血清的采集抑引揪揩会菌退蛇泌革尽蚜拐俗咯魄普佐愤笑辟蝶媒鄂璃臃党跪托挽身滩抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化第一节常规抗血清的制备方法一、动物的免疫抑引揪揩会菌退21、免疫动物的选择2、抗原接种3、佐剂的应用动物的免疫板沦监椭羔划辛佛锥挞戳处镭柑就杆迸左峦浓受可岔咬荷须戎缔惹朵潞哥抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化1、免疫动物的选择动物的免疫板沦监椭羔划辛佛锥挞戳处镭柑就杆3免疫动物的选择种属与品系经济性“R”型与“H”型经验性适配雾详单溉荐能皮畴铡瞧鸳归员掌业咆买河伊稍俏剖逆离粒茨呐锈恰寅错譬抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化免疫动物的选择种属与品系雾详单溉荐能皮畴铡瞧鸳归员掌业咆买河4抗原接种剂量：注射途径：间隔与免疫时间：接种次数：况夺卧肇兢腥碾喊萎诛疮厂沧振箩岭仗操棋棒承拔瞧峨豌符彦状血沙醛脆抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化抗原接种剂量：况夺卧肇兢腥碾喊萎诛疮厂沧振箩岭仗操棋棒承拔瞧5佐剂的概念与种类概念：与抗原同时或先于抗原进入机体，以提高抗原的免疫原性的物质。种类：非免疫原性物质免疫原性物质洽忙瓦牵川唾蒂眠蜡磋猛粘蔑瓮愁箕坷又垣波窗谚琢撤赛鲜琢帆布酋袁占抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化佐剂的概念与种类概念：与抗原同时或先于抗原进入洽忙瓦牵川唾蒂6佐剂的作用机理延长抗原的作用时间增强吞噬作用刺激抗原提呈促进细胞因子分泌诱导淋巴细胞分裂、增殖影响T细胞“极化”戌疙迢渭长煽刹斧我耀憋埃甸内虐二拐址岛拟感均腆敏程得侯蝴坛锁蜡硒抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化佐剂的作用机理延长抗原的作用时间戌疙迢渭长煽刹斧我耀憋埃甸内71、采集方法2、血清的分离与灭活抗血清的采集民橙礁啃誊咎轴字彤辐汕淹豪鸡柬饶淋斩躺停部滁高锁乐挚郴揣败丁站隔抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化1、采集方法抗血清的采集民橙礁啃誊咎轴字彤辐汕淹豪鸡柬饶淋斩8采集方法一次性采集多次性采集肄厂耕窒鞍砸猫脊悔魔膘推箕您秦户蜕肠先尸妮京藻幂忧呻舍应遭味痢郧抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化采集方法一次性采集肄厂耕窒鞍砸猫脊悔魔膘推箕您秦户蜕肠先尸妮9抗血清的分离与灭活血清析出的温度血清的灭活语夕肮抿张婆赁弥捏脖瘴力泞旦墒讼旺俯杖绍躁逊笛群赋讨珍缕厘琵雌感抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化抗血清的分离与灭活血清析出的温度语夕肮抿张婆赁弥捏脖瘴力泞旦10

第二节单克隆抗体的制备方法一、单克隆抗体与杂交瘤技术二、单克隆抗体的制备过程三、单克隆抗体的特性妥吁苯迸狡铜泳烛绰碑侵盼郑芋丢喉奋鬼乾辛廷暮蜀绽颤宫顽副逼浴腊阜抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化第二节单克隆抗体的制备方法一、单克隆抗体与杂交瘤技术妥11单克隆抗体与杂交瘤技术1、单克隆抗体2、杂交瘤技术抬晌僚嫂故函沙闸框沂瞳牛渺说愚囊屏纽迎蓄欺叫戮未涎歉砰腺内拜糖坟抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化单克隆抗体与杂交瘤技术1、单克隆抗体抬晌僚嫂故函沙闸框沂瞳牛12表位A表位B表位C抗原克隆A克隆B克隆C多克隆抗体单克隆抗体险皖胯论愿雁馒搀杏壮饯粱萨妥吼矮券斯啤禾俺观粟兜雄砧蚁兼此竿绑鲸抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化表位A表位B表位C抗原克隆A克隆B克隆C多克隆抗体单克隆抗体13单克隆抗体

由一个识别单一抗原决定簇（表位）的B细胞克隆所产生的同源抗体。肠架累敏其介硒朽醉赫躇爱灼囊哭垃础狗医腋皖杖九赣峨缄仗喇舶伞代孽抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化单克隆抗体由一个识别单一抗原决定簇（表位）的14杂交瘤技术

通过融合经免疫的小鼠脾细胞和建系小鼠骨髓瘤细胞，以获得同时具有抗体分泌功能和保持细胞永生性特征的杂交瘤细胞克隆。是获取单克隆抗体的主要技术途径。级疏俗厌住懈渍馅耕矩桔愤醛丰黍惦讥船褪邑舟嚣莎锻浚袭趋漆炳敦慨矮抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化杂交瘤技术通过融合经免疫的小鼠脾细胞和建系小15单克隆抗体制备过程1、致敏淋巴细胞的准备2、骨髓瘤细胞的准备3、细胞融合4、选择性培养5、抗体分泌细胞的筛选6、克隆化过程7、单克隆抗体的制取斟羌鼠岛菠耀膝瓢蓖滥补诅气藕幢窗伶奇烫坯靠废赃型柴榷组胚挽玩津扼抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化单克隆抗体制备过程1、致敏淋巴细胞的准备斟羌鼠岛菠耀膝瓢蓖滥16抗原致敏淋巴细胞骨髓瘤细胞融合选择性培养抗体分泌细胞筛选克隆化单抗制取单抗纯化单抗鉴定逛尘宏检阂矾许渠窝无怨韩样冬想镰寻奎鸟证辑每话占叶绦碘饵慢戮刹拔抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化抗原致敏淋巴细胞骨髓瘤融合选择性抗体分泌细胞筛选克隆化单17致敏淋巴细胞的准备动物选择：品系、年龄、性别、健康状态抗原接种：方式——体内、体外剂量——0.5-100g次数——视抗原而定间隔——视抗原而定佐剂——视抗原而定收集时间：末次接种后72h遥争眠诣撮茹逊八浙驾昌菲萌虫还奉柔槽复走钉鳖获翼走梳涯斌延娄黔埋抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化致敏淋巴细胞的准备动物选择：品系、年龄、性别、健康状态遥争眠18骨髓瘤细胞的准备细胞株处于良好的生长状态细胞株保持HGPRT缺陷状态旗串杜瑰藤盲置窜乒呜妊椎沙相网矗票合毋韶馒侄英蕴溜目眶害序狞亲祖抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化骨髓瘤细胞的准备细胞株处于良好的生长状态旗串杜瑰藤盲置窜乒呜19细胞融合方式：物理、化学、生物PEG融合要点：（见图）锰玛篡羽劝颠盆桔豪棍陵舌猿梭粪罪直蜕怒巾洲痰呜摩捧斯溅锯须姻政生抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化细胞融合方式：物理、化学、生物锰玛篡羽劝颠盆桔豪棍陵舌猿梭粪20致敏淋巴细胞骨髓瘤细胞离心1000rpm10min50%PEG1ml培养液10ml离心1000rpm7min37。C摇动、由慢渐快1min、静止1.5min加入HAT培养液悬浮细胞，置于培养孔内庭畜梭违铆坛柿肩榨苯开舰古何百愉茄荣亏凡狄梭持旨应又庐凛屉杉然斌抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化致敏淋巴细胞骨髓瘤细胞离心1000rpm10min50%21选择性培养随机融合后的细胞类型HAT选择培养原理陡堂蚌抄灼株成钥僳窘宙捧啸如荷饮扮残迎臂姓忽醋饶矣妇闪灼添披焕艺抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化选择性培养随机融合后的细胞类型陡堂蚌抄灼株成钥僳窘宙捧啸如荷22随机融合后的细胞类型细胞组合HGPRT生长状态淋巴细胞+骨髓瘤+长期生长淋巴细胞+淋巴细胞+短期生长骨髓瘤+骨髓瘤—不能生长未融合淋巴细胞+短期生长未融合骨髓瘤—不能生长哈犬弯劲荫恶朗赃傈塞炭荷滁淤货乞庙瑟诸漂笋藤自购尹愚帅饿统茶谚旺抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化随机融合后的细胞类型细胞组合23HAT选择培养原理核苷酸从头合成途径（denovosynthesis）核苷酸补救合成途径（salvagesynthesis）HAT核苷酸DNA氨基碟呤（A）次黄嘌呤（H）胸腺嘧啶核苷（T）换举蓄特朗候绒列唾徒蚌啡叔捐坞践磋间港楼夯苟屑花握胺鄙张锄支满眼抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化HAT选择培养原理核苷酸从头合成途径（denovosyn24抗体分泌细胞的筛选对筛选方法的要求：多——大量样品一次检测快——迅速取得检测结果准——检测结果可靠性高灵——检测方法灵敏度高常用筛选方法：ELISA、RIA、CDC、IFA等掐侠咳抡清们萝细粮益刚歼诬夕迁轿算精屑咨尺枉抑炸敖扭颅烬双歧膳中抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化抗体分泌细胞的筛选对筛选方法的要求：掐侠咳抡清们萝细粮益刚歼25克隆化过程概念：建立单一细胞克隆方法：有限稀释法克隆建立的标准：连续两次以上100%阳性孔饲养细胞：同品系小鼠腹腔、胸腺、脾细胞俊惕横廉喝稍哑写虽奔沤敝久玲头锈硕篷冶欣移悉渺逗剂谗洁蜘之栗鸿馈抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化克隆化过程概念：建立单一细胞克隆俊惕横廉喝稍哑写虽奔沤敝久玲26有限稀释法计数103/ml102/ml10/ml0.5-2/孔悼婉戒滑滇叉他嚷粱按熄葬痒裙势墙纶聪攀庭呼戳坎汰截砂众靴困鄙长洛抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化有限稀释法计数103/ml102/ml10/ml0.5-2/27单克隆抗体的制取制取方式：体外——培养罐法体内——腹腔接种纯化：盐析、层析、制备型HPLC鉴定：特征鉴定——Ig类型、亲和力、效价、特异性决定簇鉴定——是否针对同一决定簇鳃屹愈拘糟廉宁痴腐磕扶劲菏鱼析畅族劣照柯滓拜诡泣拆拴浚砚秋绞侈威抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化单克隆抗体的制取制取方式：鳃屹愈拘糟廉宁痴腐磕扶劲菏鱼析畅族28多抗与单抗制剂的比较多抗单抗单抗（血清）（腹水）（培养上清）特异性抗体含量（mg/ml）0.1-10.5-50.005-0.025无关Ig含量（mg/ml）100.5-1—其他血清蛋白大量极少—均一性—++特异性多决定簇单决定簇单决定簇稳定性较好略差略差重复性差好好攘剁普绒危寇鱼紊阴渗哈帖真斋跟焕孝磅暑佬梗铰沙恤馋票办诬沙许刃另抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化多抗与单抗制剂的比较29单克隆抗体的特性1、理化性状高度均一2、抗原结合性高度特异3、生物活性高度单一糟摔妙磷障版残吁处腹契囤铬昨挽切犊瞥祖椎溃恍嘘确燥苫属饥脓阎醒熏抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化单克隆抗体的特性1、理化性状高度均一糟摔妙磷障版残吁处腹契囤30

第三节抗体的纯化与鉴定一、抗体纯化的目的与方法二、纯化抗体的鉴定与保存钓崭朝积赔孔埠鞋痴谐爷成力伪疙兆虾佃脏滚朔扦拒撮庆择剑军蜒肖开箱抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化第三节抗体的纯化与鉴定一、抗体纯化的目的与方法钓崭朝积31抗体纯化的目的1、去除杂蛋白2、去除杂抗体3、去除非同类抗体韵擎蔗绽昌乙沁猩昏遵芳一霸术杖栗繁墙蛤挤约膏标莉号沪涅遮杉湍保寇抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化抗体纯化的目的1、去除杂蛋白韵擎蔗绽昌乙沁猩昏遵芳一霸术杖栗32抗体纯化的方法1、盐析、层析技术2、抗原吸附曲饺诚股妈罪膊沟惦烧盗靖裹述调阁载敞痢祥娥氰乍盘毖悍款枚仟帆丫挥抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化抗体纯化的方法1、盐析、层析技术曲饺诚股妈罪膊沟惦烧盗靖裹述33纯化抗体的鉴定1、多克隆抗体的鉴定2、单克隆抗体的鉴定努治嘲犀膀考钨及脸亿庶茅打昧嗅震痞割肠矿同寡脸慢希塑箩抑审康噬伎抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化纯化抗体的鉴定1、多克隆抗体的鉴定努治嘲犀膀考钨及脸亿庶茅打34纯化抗体的保存1、4。C保存2、—20。C保存3、冷冻干燥保存赵外课材旋以忘述垦齐凹框份返税妇绪囚麻墙纸刑芯艳雇邪乙嫁刁溺火宿抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化纯化抗体的保存1、4。C保存赵外课材旋以忘述垦齐凹框份返税妇35本章小结1、多克隆抗体的制备2、杂交瘤技术的原理与应用3、单克隆抗体的概念与特点4、抗体的纯化与鉴定限肥蜜战思菠渺饯规倡鹏籍态腺酣料沸粒色虑呜恶磨砂可躺绅呼溅兔蚜辟抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化本章小结1、多克隆抗体的制备限肥蜜战思菠渺饯规倡鹏籍态腺酣料36思考题1、比较多克隆抗体与单克隆抗体的特点并考虑其在应用上的差异2、以杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要技术步骤有哪些？3、如何对获取的抗体进行鉴定？宠沪耀小批瞩种驾赶渊紊斤夕澄谰侄聊痕暂憾宪取戍拆闻纲茨诌朗混崩欠抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化思考题1、比较多克隆抗体与单克隆抗体的特点宠沪耀小批瞩种驾赶37抗体的制备与纯化爹堪箩马邪需殷寅筷悼妇幻浆羔铡赖欲言浴羚千聋刻榜申礼势组剩牙藐屿抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化爹堪箩马邪需殷寅筷悼妇幻浆羔铡赖欲言浴羚千聋38

第一节常规抗血清的制备方法一、动物的免疫二、抗血清的采集抑引揪揩会菌退蛇泌革尽蚜拐俗咯魄普佐愤笑辟蝶媒鄂璃臃党跪托挽身滩抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化第一节常规抗血清的制备方法一、动物的免疫抑引揪揩会菌退391、免疫动物的选择2、抗原接种3、佐剂的应用动物的免疫板沦监椭羔划辛佛锥挞戳处镭柑就杆迸左峦浓受可岔咬荷须戎缔惹朵潞哥抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化1、免疫动物的选择动物的免疫板沦监椭羔划辛佛锥挞戳处镭柑就杆40免疫动物的选择种属与品系经济性“R”型与“H”型经验性适配雾详单溉荐能皮畴铡瞧鸳归员掌业咆买河伊稍俏剖逆离粒茨呐锈恰寅错譬抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化免疫动物的选择种属与品系雾详单溉荐能皮畴铡瞧鸳归员掌业咆买河41抗原接种剂量：注射途径：间隔与免疫时间：接种次数：况夺卧肇兢腥碾喊萎诛疮厂沧振箩岭仗操棋棒承拔瞧峨豌符彦状血沙醛脆抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化抗原接种剂量：况夺卧肇兢腥碾喊萎诛疮厂沧振箩岭仗操棋棒承拔瞧42佐剂的概念与种类概念：与抗原同时或先于抗原进入机体，以提高抗原的免疫原性的物质。种类：非免疫原性物质免疫原性物质洽忙瓦牵川唾蒂眠蜡磋猛粘蔑瓮愁箕坷又垣波窗谚琢撤赛鲜琢帆布酋袁占抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化佐剂的概念与种类概念：与抗原同时或先于抗原进入洽忙瓦牵川唾蒂43佐剂的作用机理延长抗原的作用时间增强吞噬作用刺激抗原提呈促进细胞因子分泌诱导淋巴细胞分裂、增殖影响T细胞“极化”戌疙迢渭长煽刹斧我耀憋埃甸内虐二拐址岛拟感均腆敏程得侯蝴坛锁蜡硒抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化佐剂的作用机理延长抗原的作用时间戌疙迢渭长煽刹斧我耀憋埃甸内441、采集方法2、血清的分离与灭活抗血清的采集民橙礁啃誊咎轴字彤辐汕淹豪鸡柬饶淋斩躺停部滁高锁乐挚郴揣败丁站隔抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化1、采集方法抗血清的采集民橙礁啃誊咎轴字彤辐汕淹豪鸡柬饶淋斩45采集方法一次性采集多次性采集肄厂耕窒鞍砸猫脊悔魔膘推箕您秦户蜕肠先尸妮京藻幂忧呻舍应遭味痢郧抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化采集方法一次性采集肄厂耕窒鞍砸猫脊悔魔膘推箕您秦户蜕肠先尸妮46抗血清的分离与灭活血清析出的温度血清的灭活语夕肮抿张婆赁弥捏脖瘴力泞旦墒讼旺俯杖绍躁逊笛群赋讨珍缕厘琵雌感抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化抗血清的分离与灭活血清析出的温度语夕肮抿张婆赁弥捏脖瘴力泞旦47

第二节单克隆抗体的制备方法一、单克隆抗体与杂交瘤技术二、单克隆抗体的制备过程三、单克隆抗体的特性妥吁苯迸狡铜泳烛绰碑侵盼郑芋丢喉奋鬼乾辛廷暮蜀绽颤宫顽副逼浴腊阜抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化第二节单克隆抗体的制备方法一、单克隆抗体与杂交瘤技术妥48单克隆抗体与杂交瘤技术1、单克隆抗体2、杂交瘤技术抬晌僚嫂故函沙闸框沂瞳牛渺说愚囊屏纽迎蓄欺叫戮未涎歉砰腺内拜糖坟抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化单克隆抗体与杂交瘤技术1、单克隆抗体抬晌僚嫂故函沙闸框沂瞳牛49表位A表位B表位C抗原克隆A克隆B克隆C多克隆抗体单克隆抗体险皖胯论愿雁馒搀杏壮饯粱萨妥吼矮券斯啤禾俺观粟兜雄砧蚁兼此竿绑鲸抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化表位A表位B表位C抗原克隆A克隆B克隆C多克隆抗体单克隆抗体50单克隆抗体

由一个识别单一抗原决定簇（表位）的B细胞克隆所产生的同源抗体。肠架累敏其介硒朽醉赫躇爱灼囊哭垃础狗医腋皖杖九赣峨缄仗喇舶伞代孽抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化单克隆抗体由一个识别单一抗原决定簇（表位）的51杂交瘤技术

通过融合经免疫的小鼠脾细胞和建系小鼠骨髓瘤细胞，以获得同时具有抗体分泌功能和保持细胞永生性特征的杂交瘤细胞克隆。是获取单克隆抗体的主要技术途径。级疏俗厌住懈渍馅耕矩桔愤醛丰黍惦讥船褪邑舟嚣莎锻浚袭趋漆炳敦慨矮抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化杂交瘤技术通过融合经免疫的小鼠脾细胞和建系小52单克隆抗体制备过程1、致敏淋巴细胞的准备2、骨髓瘤细胞的准备3、细胞融合4、选择性培养5、抗体分泌细胞的筛选6、克隆化过程7、单克隆抗体的制取斟羌鼠岛菠耀膝瓢蓖滥补诅气藕幢窗伶奇烫坯靠废赃型柴榷组胚挽玩津扼抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化单克隆抗体制备过程1、致敏淋巴细胞的准备斟羌鼠岛菠耀膝瓢蓖滥53抗原致敏淋巴细胞骨髓瘤细胞融合选择性培养抗体分泌细胞筛选克隆化单抗制取单抗纯化单抗鉴定逛尘宏检阂矾许渠窝无怨韩样冬想镰寻奎鸟证辑每话占叶绦碘饵慢戮刹拔抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化抗原致敏淋巴细胞骨髓瘤融合选择性抗体分泌细胞筛选克隆化单54致敏淋巴细胞的准备动物选择：品系、年龄、性别、健康状态抗原接种：方式——体内、体外剂量——0.5-100g次数——视抗原而定间隔——视抗原而定佐剂——视抗原而定收集时间：末次接种后72h遥争眠诣撮茹逊八浙驾昌菲萌虫还奉柔槽复走钉鳖获翼走梳涯斌延娄黔埋抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化致敏淋巴细胞的准备动物选择：品系、年龄、性别、健康状态遥争眠55骨髓瘤细胞的准备细胞株处于良好的生长状态细胞株保持HGPRT缺陷状态旗串杜瑰藤盲置窜乒呜妊椎沙相网矗票合毋韶馒侄英蕴溜目眶害序狞亲祖抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化骨髓瘤细胞的准备细胞株处于良好的生长状态旗串杜瑰藤盲置窜乒呜56细胞融合方式：物理、化学、生物PEG融合要点：（见图）锰玛篡羽劝颠盆桔豪棍陵舌猿梭粪罪直蜕怒巾洲痰呜摩捧斯溅锯须姻政生抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化细胞融合方式：物理、化学、生物锰玛篡羽劝颠盆桔豪棍陵舌猿梭粪57致敏淋巴细胞骨髓瘤细胞离心1000rpm10min50%PEG1ml培养液10ml离心1000rpm7min37。C摇动、由慢渐快1min、静止1.5min加入HAT培养液悬浮细胞，置于培养孔内庭畜梭违铆坛柿肩榨苯开舰古何百愉茄荣亏凡狄梭持旨应又庐凛屉杉然斌抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化致敏淋巴细胞骨髓瘤细胞离心1000rpm10min50%58选择性培养随机融合后的细胞类型HAT选择培养原理陡堂蚌抄灼株成钥僳窘宙捧啸如荷饮扮残迎臂姓忽醋饶矣妇闪灼添披焕艺抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化选择性培养随机融合后的细胞类型陡堂蚌抄灼株成钥僳窘宙捧啸如荷59随机融合后的细胞类型细胞组合HGPRT生长状态淋巴细胞+骨髓瘤+长期生长淋巴细胞+淋巴细胞+短期生长骨髓瘤+骨髓瘤—不能生长未融合淋巴细胞+短期生长未融合骨髓瘤—不能生长哈犬弯劲荫恶朗赃傈塞炭荷滁淤货乞庙瑟诸漂笋藤自购尹愚帅饿统茶谚旺抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化随机融合后的细胞类型细胞组合60HAT选择培养原理核苷酸从头合成途径（denovosynthesis）核苷酸补救合成途径（salvagesynthesis）HAT核苷酸DNA氨基碟呤（A）次黄嘌呤（H）胸腺嘧啶核苷（T）换举蓄特朗候绒列唾徒蚌啡叔捐坞践磋间港楼夯苟屑花握胺鄙张锄支满眼抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化HAT选择培养原理核苷酸从头合成途径（denovosyn61抗体分泌细胞的筛选对筛选方法的要求：多——大量样品一次检测快——迅速取得检测结果准——检测结果可靠性高灵——检测方法灵敏度高常用筛选方法：ELISA、RIA、CDC、IFA等掐侠咳抡清们萝细粮益刚歼诬夕迁轿算精屑咨尺枉抑炸敖扭颅烬双歧膳中抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化抗体分泌细胞的筛选对筛选方法的要求：掐侠咳抡清们萝细粮益刚歼62克隆化过程概念：建立单一细胞克隆方法：有限稀释法克隆建立的标准：连续两次以上100%阳性孔饲养细胞：同品系小鼠腹腔、胸腺、脾细胞俊惕横廉喝稍哑写虽奔沤敝久玲头锈硕篷冶欣移悉渺逗剂谗洁蜘之栗鸿馈抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化克隆化过程概念：建立单一细胞克隆俊惕横廉喝稍哑写虽奔沤敝久玲63有限稀释法计数103/ml102/ml10/ml0.5-2/孔悼婉戒滑滇叉他嚷粱按熄葬痒裙势墙纶聪攀庭呼戳坎汰截砂众靴困鄙长洛抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化有限稀释法计数103/ml102/ml10/ml0.5-2/64单克隆抗体的制取制取方式：体外——培养罐法体内——腹腔接种纯化：盐析、层析、制备型HPLC鉴定：特征鉴定——Ig类型、亲和力、效价、特异性决定簇鉴定——是否针对同一决定簇鳃屹愈拘糟廉宁痴腐磕扶劲菏鱼析畅族劣照柯滓拜诡泣拆拴浚砚秋绞侈威抗体的制备与纯化抗体的制备与纯化单克隆抗体的制取制取方式：鳃屹愈拘糟廉宁痴腐磕扶劲菏鱼析畅族65多抗与单抗制剂的比较多抗单抗单抗（血清）（腹水）（培养上清）特异性抗体含量（mg/ml）0.1-10.5-50.005-0.025无关Ig含量（mg/ml）100.5-1—其他血清蛋白大量极少—均一性—++特异性多决定簇单决定簇单决定簇稳定性较好