校内课题53项含中鲁医院总-药学院

立、同目管强的，特设计《山东省高校中抗协同创新中心项目可行性（申报书》格式和填写要求一、请严格按照表中要求填写各项。二、项目可行性可以由一家单位组织，也可以由多家单位联合组织，牵头单位为项目组织实施的责任单位。每个项目只能有一家责任三、项目可行性由项目责任单位编写，并报中抗协同创新中心管理汇总；四、项目可行性中第一次出现外文名词时，要写清全称和缩五、组织机构代码是指项目责任单位组织机构代码证上的标识代码，它是由组织机构代码所赋予的唯一法人标识代码。六、编写应客观、填报报告材料，尊重他人知识，遵守国家有关知识。在项目可行性中他人研究成果时，必须以脚注或其他方式注明出处，目的应是介绍、评论与自己的研相关的成果或说明与自己的研究相关的技术问题。对于、篡改科学数据，他人著作、或者剽窃他人科研成果等科研不端行为，一经查七、此表为项目可行性的基本信息，请务必填写正确一、项目基本信三抗谱及其药效物质基础筛责任单位1958项目组长女联合单位123项目8经费80（万元0二、项目 为变法开展其体内外抗谱研究，将药理活性追踪法同系统分离方法和HPLC-NMR-MS(n)二、项目立项的必要性分析2.1 人类健康，在20世纪50年代，随着抗生素的问世， 对抗生素等化学药物不敏感，医用外源性干扰素、白细胞介素-2等能在一定程度上抑制，但费用昂贵，且大量使用尚有一定不良反应。由于具有很处[2]。人类迫切需要安全有效的药物来预防和治疗性疾病。创新药物的重要来源[3]。随着筛选和分离技术的提高，从中药中寻找具有抗活性的成分已经成为开发抗药物的重要途径之一。长期以来，国内中药活性物质基础筛选主要是借鉴国外对天然产物活性成分研究的思路，总结起来大体有两种：一种是将中药中的化学成分进行提取、分离后作用于药理模型进行药效活性检验；另一种是应用一定的药理模型对中药进行药效成分的追踪提取、分离[4-6]。多年来这样的研究方法阐明了一些中药的药效物质基础，对中药的质量控制起到了一定的作用。但是，随着研究的进一步深入，越来越多的国内外学者发现许多中药或植物药粗提物有效，但随着逐步分离纯化，有效部位的活性越来越7为解决上述问题，目前常采用药理活性与系统分离相结合的方法，针对中药提取物的初步分离部位或组分进行药理活性初筛，确定其活性后，再有针对性地进行系统分离[8。 、MR及MS三者联用技术的出现，将分离、鉴定连为一体，三 藤tatignahemlanumDilstGlg.的块根或全草。味微苦，性平，具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能，可治小儿高热惊厥、痢疾、支气管炎、 、咽喉炎、肝炎及 性脑膜炎等10。三叶青主要分布于长江流域一带，是我国特有的植物11]。化学成分研究表明，三 的主要化学成分有黄酮类、甾体类化合物、还原糖、淀粉和氨基酸等。黄酮类物质是中最具有应用价值的有效成分，如蒲公英萜酮、崖爬藤苷、异崖爬藤苷、 中还含有β2谷甾醇、麦角甾醇等 现代研究表明，外感发热多为呼吸道所致。广西、福建、浙江等地区长期的民间用药经验表明，三粉末吞服或煎服对外感发热有显著疗效，现代临床也证明了该作用[24,25]。民间长期应用的基础表明，三不失为一种极具市场潜力的抗新药的来源。本课题依据“山东省高等学校中抗协同创新中心研发项目指南”，以我国独有植物——三为研究对象，以民间长期将其粉末或水煎剂用于外感发热疗效显著为切入点，采用病变法开展抗谱研究，将药理活性追踪法同系统分离HPLC-NMR-MS(n)联用技术相结合，对三抗的药效物质基础进行系统筛选，以期明确三的抗谱，并得2～3个活性成分作为抗新药研究候选化合物，为将其开发为抗的中药新药奠定基础。郭姗姗. 吸附对宿主细胞膜的影响及中药的干预作用[D]. 包木胜.新型CpGODN的大规模筛选及其抗 作用的研究[D].吉林大学,2005:1-105.[3]JQiu.Traditionalmedicine:acultureinthebalance[J].Nature,2007,448:126-128.LiHJ,JiangY,LiP.Chemistry,bioactivityandgeographiccharacterofsteroidalalkaloidsfromtheLiliaceaefamily[J].NatProdRep,2006,23(2):735-752.LinBQ,JiH,LiP,etal.InhibitorsofacetylcholineesteraseinvitroscreeningofsteroidalsfromFritillariaespecies[J].PlantaMed,2006,72(5):814-818.LiSP,LiP,DongTT,etal.DeterminationofnucleosidesinnaturalCordycepssinensisandculturedCordycepsmyceliabycapillaryelectrophoresis[J].Electrophoresis,2001,22(1):144-150.,李松林,毕志明,等.中药复杂体系药效物质基础研究方法学的建立及其应用[C].中医药学 集:526-527.屠鹏飞,史社坡,姜勇 中药物质基础研究思路与方法[J].中草药,2012,43:209- 红.NMR技术在天然产物活性物质发现及其药理学研究中的应用[J].药学学报,2013,48(9):1383−1389. 大学学报 23(3):44-杨王伟,叶俊英,周莹莹,等.中药资源三 应用基础研究进展[J].现代农业科技,杨大坚,刘红亚 ,等.破石珠化学成分研究[J].中国中药杂志,1998,23(7):李瑛琦,陆文超,于治国. 的化学成分研究[J].中草药,2003,34(11):982-霍听,杨迈嘉,刘文炜,等.三 块根乙醚提取物成分研究[J].药物分析杂志,陈丽芸. 化学成分及抗肿瘤活性研究[D].中国福州:福建 大学,2014:1- ,黄挺,等.三 黄酮对H-22荷瘤小鼠瘤体的抑制作用及其机理研究[J]. 大学学报,2008,32(6):732-734.钟良瑞,林霜,陈伟芳,等.三 提取物对人肺癌H1299细胞凋亡的影响及机制研究[J].中国中西医结合杂志,2014,34(11):1354-1358. .三 脂溶性提取物对A375细胞增殖及黑色素 的影响[J].时珍国医国药,2012,23(4):962-963.杨学楼,罗经,孙松柏,等.中药三 中医杂志,1989,11(4):40.[20]杨雄志,巫军. 提取物 大学学报,2009,,毛庆秋,魏佳平.三 提取物抗炎、镇痛及解热作用的实验研究[J].中国新药杂志,2005,14(7):861.吴安安,倪荷芳. 大学学报,2007,吕江明,李春艳,贾薇,等. 水提物抑制小鼠痛经作用[J].广 ,2011,42(4):徐有水. 石膏汤治疗小儿外感发热72例[J].实用 杂志,2006, 刘为熙. 饮治疗小儿外感高热80例[J].中国民间疗法,1997(6):31-三、项目内容和研究方研究目标和考核指标研究目标①完成 的药效物质基础，得到2～3个活性成分作为抗 考核指标 研究内容、研究方案研究内容 体内外 谱研运用MTT法，以流 （HPIVs、呼吸道合（RSV、疱疹（HSV1、肠道（EV71B3型（COXB3）等为对象进行三体外抗谱研究。采用滴鼻小鼠体内接种、RSV和EV71等，以小鼠一般体征、体 药效物质基础研以研究出的三敏感进行体外药理活性追踪，将三超声提取液浓缩后，采用系统溶剂分离方法不同极性药效部位，并结合HPLC-NMR-MS(n)联用技术对药效物质基础进行追踪分离和鉴别，明确三抗的药效物质基础。研究方案 体内外 谱研① 体外 谱研 细胞的复苏及培养 细胞冻存管从液氮罐取出，立即投入37℃~42℃水中融化，在超净工作台内将冻存管中液体移入离心管中，1000r/min，5min离心后37℃、5%CO23次后的细胞 接种于己经长成单层的MDCK细胞上，加入1640营养液后置37℃、5%CO2 用1640营养液做10倍比系列稀释不同浓度，纵向重复4孔，依次接种于己长成单层的MDCK细胞的96孔板中，同时设未接种病 充分洗漆，加脱色液100ul，室温脱色l0min，用酶标仪在540mn波长测定OD值。根据Reed-Muench公式计算 细胞存活率（%）=OD值/正常细胞OD值×100%TCID5o=Antilg(Ig高于50%CPE百分 药物对细胞毒性测定：将三164010依次接种于己经长成单层的MDCK96孔板中，并设4个复孔及空白细胞对540mn波ODReed-Muench公式计算药物半数浓度(TC50)，并确定最小无TC50=[Antilog(log高于50%CPE百分 三抗实验：三16401050ul9650ul液，同时设利巴韦林阳性对照组、抗颗粒对照组、对照组及空白细胞对照组，每组4个复孔。5%CO290%以上的病变时，EC50=[Antilog(log高于50%CPE百分率 TI=半数毒性浓度(TC50)/半数有效浓度(EC50)数据处理：用统 SPSS17.0进行数据统计② 体内 谱研 组10只乙醚度醉后，将 、抗 颗对照、三 大、中、小剂量组中小鼠以 液滴鼻 ，空白对照组以等量生理盐水滴鼻。 接两小时后始灌胃， 一次连续给药1周每天观察鼠一般体重化和 ，后给禁水12小时，于无菌环境下小涤23次后用吸水吸，称重，计肺指数和指数抑制公式如下。同时将胰腺、肺、心脏进行病理学、组织学检查，综合判断药物疗效。体重变化（%）（当天体重/攻毒前体重）×100%肺指数（%）=小鼠肺重/体重 药效物质基础研根据谱研究结果，选择药物的敏感进行三抗活性物质基础研究，提取药效部位或组分进行配比研究，确定三抗活性部位（组分）的最① 有效部位活性确 有效组分或有效成分的分离鉴 SephadexLH-20等柱色谱、中低压色谱仪将初分组分进行纯化 ，得到目标 、OESY、TOCSY等）等现代波谱分析技术，以及X-射线单晶（XRD（ORD 有效组分或有效成分的配比研中、高三个水平，对其进行体外抗作用评价，确定抗有效成分或组分的最项目预期解决的关键问题 谱研究 年度计划与任务分解2015120158月：完成三体内外抗的筛选。20159201512：选择药物的敏感进行三抗活性物质基础研究，完成三抗药效物质基础的提取、初筛及成分的快速分析与检测，确 3.4相关1~2篇青体内外抗的筛选。化合物的定向分离与利1~2项，撰写结题报告13.4称（万元抗三上抗谱3三抗有效3四、项目技术路线、知 对策及市场分项目技术路线及其先进性和可行性分析（说明其主要技术创新点技术路线：先进 可以阐明其抗的药效物质基础，而且为相关中药新药的开发奠定基础。可行性分析①研究基础扎实：民间长期用药经验已经表明三良好的抗作用，为课题的顺利进行奠定临床基础。三部分抗活性实验已证明其具有抗、仙台（小鼠肺适应株、流感和滤泡性口炎的活性，为课题的顺利进行提②科研平台完善：课题将依托山东省高等学校中抗协同创新中心的药效物质提取纯化平台和抗活性筛选平台开展研究，研究条件成熟稳定，设备先进，知 和技术标准分析及对策（含国内、国际竞争力分析三属于我国特有植物，民间长期临床应用效果好，有一定的市场知名度。但其抗谱和药效物质基础不明确，限制了其进一步的推广使用，如能对其进行系统本项目及主要参加均长期从事中药新药及名优产品的二次开发研究，问题。因此，本项目的实施技术风险小、无知识纠纷。由引起的疾病多具有传染性强、高、流行面广及率高等特点，是人类至今尚不能有效控制的世界难题。抗药物存在研制滞后和抗化学药物匮乏且易产生耐药性、价格昂贵等问题，加之具有很高的变异性，并且能够逃逸免疫系统的监视，使得现有的药物越来越显示出不足之处。对三潜在的抗作用的深入挖掘将有助于新的抗中药新药的研究，开发潜力极大，具有较好的市五、基础条件和项目责任单位：山东 大学单位概 大学创建于1958年，设13个二级学院，4个 ，有2所直属附属医院，现全日制在校生1万余人。学校现有国家级重点学科3个，国家中 管理局重点研究室1个，中药学等“泰山 大学共承担厅局级以上科研课题627项，其中国家级项课题，3项国家“十一五”科技支撑计划牵头项目，12项“十一五”科技支撑计划课题，6项“重大新药创制”专项课题等。先后荣获省部级 57项，143 药研究领域获得2项国家科技进步二等奖和2项山“十一五”以来山东中大学主持的防治性疾病与抗中药新药1343项，获得国家级及省部级26项。联合单位承担的抗研究相关国家级课题达50余项。 责任单位山东中大合山东省医学等单位和新药研发、学研究等领域，开展项目研究。在中医学、中药学及阐释了中药抗的药性机制973统观察了常用抗药物中的寒性药物，如大黄、黄连、栀子、、知母等对个中药凝胶制剂(麝香痛痹巴布膏)的开发成功为标志，确立了山东中大学在中电泳在中药质量控制中的应用研究”、“紫外谱线组法鉴别中药”、“RAPD技术代表，形成一系列中药及复方研究的光谱及色谱图谱分析测试技术和数据处理3个博士后科研流动站（中医学、中药学和中西医结合，1个教育部（中经典理论）4个国家中管理局三级实验室（中药质量控制、中药制剂技术、微循环、细胞生物学）2个山东省（天然药物、中药制剂）3个山东省工程技术（中药制工程技术中心、中药规范化种植工程技术中心、经方工程技术中心）1个SPF实验动物中心，2个国家科研（科技部中药材厅，21亿元；4GMP、（人月1男62男63女44男65男66男67女8女研项目及主要骨干的情况(从事过的主要相关研究及所负责任和作用，相关研究和成果、发明专利和获奖情况，在国内外主要上 课题：李慧芬，女，博士，山东中大学，药学院，讲师。主持厅局6项，40，男，博士，山东中大学，药学院，讲师。2012年毕业于山东中大学药学院中药学专业，获得博士。2007.7-2009.12参与国家十一五支撑计划课题“动物中药材全蝎深加工关1项；2007.8-2007.12月，参与了张裕酒的开发研究；2008.3-2011.3月，参与了山东圣旺药业和山东中大学合作项目“甜菊糖共性关键术及其循环经济综合开发研究”，并获得山东省科技进步奖二等奖（4/9）；2011.1~2013.12参与国家重大新药创制专项课题治疗老年性痴呆创新中林永强，男，，山东省食品药品检验中药科，主家级课题22项；近五年国家期刊19篇；获得山东省孟红，山东省医学研究。女，1960年出生。从事学研究30年，研究员（三级岗）、本科室医学学科人、导师、山东省微生