沙门氏菌检验标准操作规程

沙门氏菌检验标准操作规程沙门氏菌检验标准操作规程沙门氏菌检验标准操作规程资料仅供参考文件编号：2022年4月沙门氏菌检验标准操作规程版本号：A修改号：1页次：1.0审核：批准:发布日期：目的PURPOSE规范888物料、产品的沙门氏菌检验操作，确保检验结果的可靠性。范围SCOPE适用于888物料、产品的沙门氏菌检验工作。责任RESPONSIBILITY微生物检验员严格执行本规程，品质部负责人监督执行。程序PROCEDURE定义和原理沙门氏菌广泛存在于动物的肠道和内脏，以及被粪便污染的水和土壤中，是细菌性食物中毒的主要病因。本方法利用沙门氏菌呈辛酸酯酶阳性，而氧化酶和脂肪酶均呈阴性的特性，对物料、产品进行沙门氏菌检验。材料和设备紫外灯：波长366nm，功率不小于6W。放大镜：3至4倍。毛细滴管。LX-B35L压力蒸汽灭菌锅。无菌的培养皿。无菌的接种环。培养基和试剂SCDLP液体培养基：按《化妆品卫生规范》（2007版）或使用商品培养基干粉配制。四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：按—2010附录配制或使用商品试剂。SS琼脂培养基（含1%蔗糖）：牛肉浸膏(或牛肉粉)，蛋白胨，乳糖，蔗糖，胆盐，柠檬酸钠，硫代硫酸钠，柠檬酸铁，煌绿，中性红，琼脂，蒸馏水1000mL。制订者PreparedBy:888审核者ReviewedBy:888批准者ApprovedBy:CC:88HE琼脂培养基：按—2010附录或使用商品培养基干粉配制。玉米油维多利亚蓝琼脂培养基：灭菌后的基础培养基冷却至50℃左右，边摇边加入玉米油乳化液。倾注平皿，制成平板。基础培养基及玉米油乳化液配方如下：a）基础培养基：蛋白胨5g，酵母浸粉3g，氯化钠5g，琼脂13g，水900mL，。将各成分加入水中，加热溶解。调节，116℃15min高压灭菌。b）玉米油乳化液：玉米油100mL，%维多利亚蓝水溶液100mL，%琼脂溶液80mL，吐温801mL。玉米油加维多利亚蓝水溶液混合，边振动边在沸水中加热溶化。然后，放入分液漏斗中，弃去蓝色水部分，再将着色的脂肪用水洗1-2次。将着色脂肪20mL加入810mL琼脂溶液中，再加1mL吐温80，116℃15min高压灭菌。冷却后用超声波乳化。MUCAP试剂：取MUCAP100mg，加纤维溶解剂溶解，再加TritonX-100，贮存于4℃冰箱。使用时用的L醋酸盐缓冲液稀释10倍。氧化酶试纸：将甲液与乙液等量混合。取定性滤纸，浸透混合液后，于70-80℃烘箱烘干，剪成大小适当的纸条，密封于塑料袋或瓶中，贮存于4℃冰箱备用。甲液：1%α-萘酚乙醇液；乙液：1%二甲基对苯二胺草酸盐水溶液。检验步骤增菌和前增菌取样品按SOP-QM-B017制备1：10稀释的检液。取10mL加到90mLSCDLP液体培养基中，置培养箱36℃±1℃培养18h～24h。移取10mL，转接种于100mL四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液内，42℃±1℃培养18h～24h。分离培养分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个SS琼脂平板（含1%蔗糖）和一个HE琼脂平板。SS琼脂平板于36℃±1℃培养24～30h，HE平板于36℃±1℃培养40～48h。沙门氏菌菌落特征：a）在SS琼脂平板上：无色半透明，菌落中心带黑色的菌落；或者菌落为粉红色，中心带黑色，但有时不明显。b）在HE平板上：无色半透明，菌落中心带黑色或几乎全黑色；或者菌落呈粉红色，中心带黑色。试验从培养的分离培养基或显色培养基上挑选疑似沙门氏菌的菌落，尽量选较大、分离较好的单个菌落，用中性笔做好标记并编号。用毛细滴管吸取MUCAP试剂，加一滴于编号的菌落上(覆盖整个菌落)。将一个平板的被检可疑菌落全部都滴加试剂后，将平板置于366nm紫外灯下检视10至15分钟。发蓝色荧光的为MUCAP试验阳性，将阳性菌落编号记录下来。氧化酶试验用接种环挑取MUCAP阳性菌落，涂于氧化酶试纸上，观察涂菌点是否变蓝色。在10min内变蓝色为氧化酶试验阳性，不变色为阴性。脂肪酶试验将SS琼脂或HE琼脂上，MUCAP阳性且氧化酶试验阴性的菌落，用接种环挑取划线接种至玉米油维多利亚蓝琼脂培养基平板于36℃±1℃培养40～48h。观察长出的菌落，脂肪酶阳性菌菌落呈蓝色；阴性菌菌落则呈无色或粉红色。（注：氧化酶试验和脂肪酶试验顺序可以交换，或同时进行。）记录和检验结果报告在检验原始记录上详细记录观察结果。菌落的MUCAP试验阳性，且氧化酶试验与脂肪酶试验均为阴性，判定为沙门氏菌，报告沙门氏菌阳性。其它情况均报告阴性。检验出阳性结果的培养基平板要保存至少1个月。相关文件RELEVANTDOCUMENT编码Code名称Name8888888微生物检验样品制备标准操作规程附件ATTACHMENT编码Code名称Name版次VersionNo