《基因工程的原理和技术》随堂测试

PAGE10第二节基因工程的原理和技术1有关目的基因的获取和基因文库的理解，不正确的是（）A目的基因可以从自然界中分离，也可以人工合成B目的基因主要指编码蛋白质的结构基因C基因文库就是基因组文库文库只含有某种生物的一部分基因技术所需条件的是（）①单链的核苷酸序列引物②目的基因所在的DNA片段③脱氧核苷酸④核糖核苷酸⑤DNA连接酶⑥DNA聚合酶⑦DNA限制酶A①②③⑤ B①②③⑥C①②③⑤⑦ D①②④⑤⑦3在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是（）A用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体分子导入烟草原生质体D用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞4下图为某种质粒表达载体的简图，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，amHⅠ在内的多种酶的酶切位点。

据图回答：（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有_____________、______________________、________________________三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行________________。（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是______________；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是________________。（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是________，其合成的产物是________________。（4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是________________________。5目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是（）①检测受体细胞是否有目的基因②检测受体细胞是否有致病基因③检测目的基因是否转录mRNA④检测目的基因是否翻译蛋白质A①②③ B②③④C①③④ D①②④6下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，amHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用______________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是________（填字母代号）。A启动子 C复制原点 （3）过程①可采用的操作方法是________（填字母代号）。A农杆菌转化 B大肠杆菌转化C显微注射 D细胞融合（4）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用________（填字母代号）技术。A核酸分子杂交 B基因序列分析C抗原—抗体杂交 7如图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程，请据图作答：

（1）图中基因工程的基本过程可以概括为“四步曲”：________________；________________；________________；________________。（2）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程为什么____________________________________________________________________。（3）过程②必需的酶是____________酶，过程③必需的酶是______________酶。（4）若A中共有a个碱基对，其中鸟嘌呤有b个，则③④⑤过程连续进行4次，至少需提供胸腺嘧啶________个。（5）在利用A、B获得C的过程中，必须用____________切割A和B，使它们产生________________，再加入________________才可形成C。（6）为使过程⑧更易进行，可用__________（药剂）处理D。

参考答案[目的基因可从自然界生物体内直接获取，也可人工合成；目的基因主要指编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子；基因文库分基因组文库和部分基因文库，前者指拥有一种生物的全部基因，后者仅拥有一种生物的一部分基因，如cDNA文库。][RNA（4）EcoRⅠ和BamHⅠ解析（1）在基因表达载体的构建过程中用同种限制酶来切割目的基因和质粒，使之产生相同的黏性末端，以利于DNA片段的连接。将切割后的目的基因和质粒，用DNA连接酶进行连接，它们之间随机连接，可有三种产物：目的基因—载体连接物、载体—载体连接物和目的基因—目的基因连接物。获得DNA连接产物以后，必须通过筛选才能获得所需的基因表达载体，导入宿主细胞后才能表达获得基因产物。（2）从图中可以看出，目的基因的插入位点在抗四环素基因上，可推知：目的基因—载体连接物的抗四环素基因被破坏，丧失了抗四环素的能力，但保留了抗青霉素的能力；载体—载体连接物既保留了抗四环素的能力也保留了抗青霉素的能力；目的基因—目的基因连接物既无抗青霉素基因也无抗四环素基因，不具备抗性。（3）目的基因表达过程中，RNA聚合酶首先与启动子结合，指导目的基因转录产生mRNA，mRNA再指导蛋白质的合成。（4）从图中可看出抗四环素基因上有两个不同的切割位点，所以在实际操作过程中，为避免切割后的末端任意连接，可用EcoRⅠ和BamHⅠ同时对目的基因和质粒进行切割，使同一切割产物的黏性末端不同。[目的基因的检测包括：检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是用DNA探针，使DNA探针与基因组DNA杂交；检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是用基因探针与mRNA杂交；最后检测目的基因是否翻译了蛋白质，方法是进行抗原—抗体杂交。]6（1）HindⅢ和BamHⅠ氨苄青霉素（2）A（3）C（4）C解析（1）由图示可知：需用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因，因酶切后tetR四环素抗性基因结构被破坏而amRNA（3）反转录解旋（4）15（a－b）（5）同一种限制酶相同的黏性末端DNA连接酶（6）CaCl2解析（1）基因工程的操作程序是获取目的基因、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。（2）图中①过程是从细胞中获取相应的mRNA，由于基因的选择性表达，人的皮肤细胞中的胰岛素基因不表达、不转录，因此不能形成胰岛素mRNA。（3）从mRNA→DNA是反转录的过程，需要反转录酶。过程③DNA分子的扩增需用解旋酶将双链DNA分解为单链。（4）一个DNA分子中的鸟嘌呤（b个）和胸腺嘧啶之和占碱基总数（2a个）的一半，所以一个DNA分子片段中胸腺嘧啶数为（a－b）个。连续复制4次，共产生DNA分子24＝16个，由于半保留复制