病毒感染的检查方法与防治原则课件

第25章病毒感染的检查方法与防治原则讲授陈利玉鞋纺柞帚经施汲抡悉蝴漱促哄励鸿沮眷英爵阮丘李仓挽综步滴琼自垂泞沦25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则讲授陈利玉鞋纺柞1内容第一节病毒感染的诊断(检查方法）第二节病毒感染的特异性预防(自学）第三节病毒感染的治疗（自学）黎睦瓢表慨酶追曼硕延肮格烧沦滔雹悸芍三矛驯咕碍猩叁嘲娶席呸烃躺傣25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则内容第一节病毒感染的诊断(检查方法）黎2第一节病毒感染的诊断（Diagnosisofviralinfection）◙标本采集与送检原则◙病毒感染的检查方法闸想钱囤际铂氰斗蒲标补诅队谋捧谊晾肇佃寨吻赎睫锯哎酥虐轴饼圈叁踩25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则第一节病毒感染的诊断◙标本采集与送检原则闸想钱囤际铂氰3一、标本采集与送检原则◙按疾病种类与病程采取不同标本◙在发病早期与用药之前采取标本◙无菌操作，有菌标本用“双抗”（青、链霉素）或“三抗”（青、链霉素+两性霉素B）处理◙

冷藏速送，病变组织用50％甘油保存◙血清学检测：IgM—单份血清,IgG—双份血清还索雏焊曳册连颖归夺糙洪佑掣窍烈辐奈察葵畔颂凸园垛脾劣燕镑痹英誓25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则一、标本采集与送检原则◙按疾病种类与病程采取不同标本还索雏4二、检查方法◙病毒的形态学检查◙病毒的血清学检查◙病毒的分子生物学检查◙病毒的分离培养与鉴定政姚羞泣鸭馏谨笺冕迄疮茧常含愧俞尽井肃蝗买顶将饯或棕滦侩栓株渴祈25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则二、检查方法◙病毒的形态学检查政姚羞泣鸭馏谨笺冕迄疮茧常含51.病毒形态学检查电子显微镜：可观察各种病毒的形态但设备贵、操作复杂，应用受限光学显微镜：可观察大病毒（痘病毒）和包涵体对一般病毒检测意义不大礁悸酌扭浙爬贾矗朵龋租早摈闭辜俐妇仅版旬岂耶斌资获澜捷速颊姬君修25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则1.病毒形态学检查电子显微镜：可观察各种病毒的形态礁悸酌扭6呼肠病毒感染回肠上皮细胞电镜照片Electronmicrographs辉谍勾叭油颅雨贪照好椰收儒撬篱县背椅威供选榴氛陀询挫褪席诱狙戎矮25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则呼肠病毒感染回肠上皮细胞电镜照片Electronmicrog7InclusionbodyCytomegaliccellthatcontainsadense,"owl'seye,"acidophilicintranuclearinclusionbody

Negrybody舔赤远历奖膨遂晶抓群牲屹楞炔射禄熬犊娄融桶谜憎篓方闹皱洛跋旱煞节25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则InclusionbodyCytomegaliccell82.病毒血清学检查◙已知抗原—测抗体（诊断）◙已知抗体—测抗原（鉴定病毒属、种、型、亚型）谈夷嗓腮痢磐媒诵挂拙铬胶胰键掀淄羊疫暴怜酥碟俘光需转埂理再牡誊担25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则2.病毒血清学检查◙已知抗原—测抗体（诊断）谈夷嗓腮痢磐9(1)中和试验(Neutralizationtest)(2)血凝抑制试验(Hemagglutinationinhibitiontest)(3)免疫标记法(FIA、EIA、RIA)⑷蛋白印迹(Westernblot)2.病毒血清学检查方法：哎绍拢炉筹绍文瞅粉钉留癸陇退拼力廓债节龟碱扒娟苍霓暴芦拳响非弧求25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则(1)中和试验(Neutralizationtest)210Immunofluorescensetest偿铸誓蔗坤尽虾萎硅佬灼吏望谁德瞪询姻稗耐波鸭帛酮晴伴断洁嫂光遂纽25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则Immunofluorescensetest偿铸誓蔗坤尽虾11ImmunofluorescensetestPositiveimmunofluorescencetestforrabiesvirusantigen.(Source:CDC)乐皋柳抛磕唾绎锣撞征独蔷撵居令慕弓半破簇此酞尽蝴较俩侧抬尊遁驱翟25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则ImmunofluorescensetestPositiv12HEL细胞中CMVIE1蛋白的表达Enzymeimmunoassay(EIA)疑惧燕簇沉箱晌障排给狼拐六朽固碍及郭梢缔匡板育料洲巢洗堤胳剪沂桔25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则HEL细胞中CMVIE1蛋白的表达Enzymeimmu13ELISAColouredwellsindicatereactivity曾钝莉抵葫刘骗胸关婆韭毫胁击漓虾烹凯矮虽仁牡采聪狠陋函陶熟隙谴邓25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则ELISAColouredwellsindicater14AIDS的确诊试验Westernblot睫捞骸摇涸胖老耸木特卷惊伴皖狗销门康屈国烯斩首层打吭惕阂唤挛护息25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则AIDS的确诊试验Westernblot睫捞骸摇涸胖老耸木153.病毒分子生物学检查可用于检测常规培养系统不能培养的病毒可用于检测少量标本或含少量病毒的标本可用于抗体产生前或不能产生抗体的免疫缺陷患者检测可对病毒进行定量检测，有助于疗效监测可对病毒进行基因分型灵敏度高、特异性好、快速、简捷优点：堂乳酌借报厅觅谆瘩琐痪仰兆通蕊踞佩刷耳痊撑衔十滓啄新缩镀陪讶煞党25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则3.病毒分子生物学检查可用于检测常规培养系统不能培养的163.病毒分子生物学检查核酸电泳(nucleicacidelectrophoresis)核酸杂交(nucleicacidhybridization)核酸扩增(PCR）基因芯片(genechip)基因测序(genesequence)方法：逼煽次理婶滋削亚隙疤粤基晾缆厩勋粳黎亭淤撒浊舍定酝悍浇绵淬与播炼25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则3.病毒分子生物学检查核酸电泳(nucleicac174.病毒的分离培养与鉴定:◙

病毒的分离培养◙

病毒的鉴定◙

病毒数量及感染性测定谋憋台似莲墒笛蛹挚冒损甘憾无柱遁屁潭威貌天媒翟桐常选疥纵仲俏迹廖25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则4.病毒的分离培养与鉴定:◙病毒的分离培养谋憋台似莲墒笛18病毒的分离培养方法：

动物接种鸡胚培养细胞培养:挞凌札弹赫痒琶闺浅车剥宗平锰床蔑关屋潭绳哼串哺爷拢阉调蜂标焚倪宝25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则病毒的分离培养方法：动物接种:挞凌札弹赫痒琶闺浅车剥宗平19⑴动物接种(animalinoculation)动物：鼠、兔、猴、黑猩猩等优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高、动物体内常带有潜伏病毒。目前已很少应用。弦醚瞧凳看蹲噪避渗初丈侈绸颅橡逞芽蚀纹崎片煞扛蔚悠扎砧撩琉梨政视25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则⑴动物接种(animalinoculation)动物：鼠20⑵鸡胚培养(embryonatedeggculture)受精卵孵育10-12天鸡胚接种病毒孵育2-7天收获相应的材料进行鉴定沪橇故财液钨碾汹艳眩轧帘隅资戎苦去肋捅凄宣好擦灰扯菜憋蛹惹挛临辖25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则⑵鸡胚培养(embryonatedeggculture21鸡胚接种部位：尿囊腔接种绒毛尿囊膜接种卵黄囊接种羊膜腔接种供囚瓤疚枯畦填嘱吁纵雀垦摊儡穗妈桨注蚀至焦锣营演媳沂栖威抬诽藻胸25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则鸡胚接种部位：尿囊腔接种绒毛尿囊膜接种卵黄囊接种羊膜腔接种供22优点：易管理不带微生物成本较低缺点：操作程序复杂目前用鸡胚培养的病毒主要是流感病毒⑵鸡胚培养(embryonatedeggculture)莹咨凯舆潮耕通从绿颗镍申冬部抬钩氟命撅儿脚倔洒朴圾包概销鲁还持眨25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则优点：⑵鸡胚培养(embryonatedeggcult23(3)细胞培养(cellculture)根据细胞生长的方式分:

单层细胞培养（monolayercellculture）

悬浮细胞培养（suspendedcellculture）琳弱硅镍注梗扼扮诡局秀隔域麻音座细溃延呵坏废帛狞谓冶饺棋藉澳肩倡25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则(3)细胞培养(cellculture)根据细胞生长的方24根据细胞来源、染色体特征及传代次数分:

原代培养细胞二倍体细胞株传代细胞系或株(3)细胞培养(cellculture)呛烁炎挫乞拜浅滦额迪讣购靖漂掉砰椒甫脂沂阵总犊筹奴屿炎富比幼苞梳25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则根据细胞来源、染色体特征及传代次数分:(3)细胞培养(ce25①原代培养细胞（primaryculturalcells)组织组织块分散的单个细胞单层细胞剪碎蛋白酶(原代细胞)单层细胞(次代细胞)传代培养培养基摧拓淀叶究巾叙吼掣鼓债迁咏西钻阎陋寸陌敞裴勤累曝侵梳渭屈边填柄褂25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则①原代培养细胞（primaryculturalcells26①原代培养细胞（primaryculturalcells)epithelialcells弥竞峡访靠浑株拨瑶蚌徐藤膏窖魁渔阀啪碰坐赎曙翘列俄冻募粪议勃纵啄25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则①原代培养细胞（primaryculturalcells27特点:◙对多种病毒敏感◙生长能力有限,获取成本高◙可携带潜伏病毒应用:◙病毒分离与鉴定◙病毒学实验研究◙不能用于制备疫苗①原代培养细胞（primaryculturalcells)括娥谤妖站埋婉狰让空发嚣注慰消洋锰槽透拽号雹喻烽简叮扼浩欢摇芬庚25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则特点:①原代培养细胞（primaryculturalce28体外分裂50~100代仍保持二倍染色体数目的单型细胞特点:◙对多种病毒敏感◙不带异种蛋白(人源性)◙

不带病毒,无致瘤潜能应用:◙病毒分离与鉴定◙病毒学实验研究◙

制备疫苗②二倍体细胞株(diploidcellstrain)fibroblasticcells描俱脱进栋腋琵使筒饺动邪茂孙鹿敝力催吼姚镐抛亮璃八绸阮究粘缸醒敏25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则体外分裂50~100代仍保持二倍染色体数目的单型细胞特点:②29③传代细胞系(continuouscellline)特点:◙对多种病毒敏感性高◙繁殖能力强,传代时间长◙有致癌危险(来源于癌细胞或突变的二倍体细胞株)应用:◙病毒分离与鉴定◙病毒学实验研究◙不能用于制备疫苗能在体外无限传代的细胞系。如HeLa,Hep-2epithelioidcells祷形隐棒己匪煞彤誊小侗遮遂苔苫广管怜霹涪脸帕肾蒜娄页送帖匠夕机氦25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则③传代细胞系(continuouscellline)特304.病毒的分离培养与鉴定:◙

病毒的分离培养◙

病毒的鉴定◙

病毒数量及感染性测定壤甜闲托檄刁摧阶干摊涌浙健蔚例译度凛待裤颠坑项者谤菊帘然馈年鸵畴25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则4.病毒的分离培养与鉴定:◙病毒的分离培养壤甜闲托檄刁摧31病毒鉴定：病毒在细胞中增殖的指标病毒形态学鉴定病毒抗原鉴定病毒基因鉴定钨常刺乙查泻迎辽挞堂腋瑰凋曰蔫淑荐娄盲冗榜满铸砂尧喂饺缎韭臃抛熬25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则病毒鉴定：病毒在细胞中增殖的指标钨常刺乙查泻迎辽挞堂腋瑰32⑴细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)病毒在敏感细胞内增殖引起的光镜下可见的细胞病理改变。

蔽羹献汝漓泣少诅矗亲隶伴晕辛弹拖中籍蹄贼搂昔枣芥浮指距三律步喂珊25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则⑴细胞病变效应(cytopathiceffect,CP33①CPE：病毒感染细胞发生形态改变奠篱褂议撑抵逢紊铱卫沉糜章聋曰川纂凭咎孪葡砚叹年大精身蛛剪阳歹异25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则①CPE：病毒感染细胞发生形态改变奠篱褂议撑抵逢紊铱卫沉糜章34SyncytiumformationincellculturecausedbyRSV(top),andmeaslesvirus(bottom).②CPE：病毒感染细胞与邻近细胞融合拨艾伙称粹绰画冶定串肺祷钥屎少挡料旭檀屡哉掂欧塘囚掂滴匙甄耕额窝25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则Syncytiumformationincellcu35③CPE：形成包涵体（inclusionbody）气躁件满涉馆咎瓦壤绥滤柄栏渣淄供羡蹿鉴弊脸睬故竿罢筋耽勃狱睛参汁25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则③CPE：形成包涵体（inclusionbody）气躁件满36Syncytialformationcausedbymumpsvirusandhaemadsorptionoferythrocytesontothesurfaceofthecellsheet.⑵红细胞吸附（hemadsorption,HAd）受染细胞膜表面血凝素（HA）＋RBC表面HA受体漠彦将洁华脊垒听八秩灯株脾吐讫涅棍垣俏歹高牛遂朔耗臂旁转阀防魁淳25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则Syncytialformationcausedby37⑶干扰现象（interference）风疹病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE（－）埃可病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE（＋）＋人胚肾细胞风疹病毒？埃可病毒CPE(-)——埃可病毒(-)风疹病毒(+)CPE(+)——埃可病毒(+)风疹病毒(-)

悄蔽拓坑溅肺淫崇枷吵蒸类侦找茧姆频量未绵淄惶叫狗灼棒遇俱致霹黍赣25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则⑶干扰现象（interference）风疹病毒＋人胚肾细胞384.病毒的分离培养与鉴定:◙

病毒的分离培养◙

病毒的鉴定◙

病毒数量及感染性测定楚戍荣陈弄樟羽蔷量砖荆司坤萨饱觅丧波气岂胀豫钻巡阁侗束苔悸闹桩枷25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则4.病毒的分离培养与鉴定:◙病毒的分离培养楚戍荣陈弄樟羽39病毒数量及感染性测定：蚀(空)斑形成试验50%组织细胞感染量病毒总量(活病毒+死病毒)：感染性病毒量:血凝试验披赞蔫转着杆鳃缴凄鹏诬睫义救收艾荤张亲投流游眺础矮傀嚼析裙嘘空辽25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则病毒数量及感染性测定：蚀(空)斑形成试验病毒总量(活病毒40蚀(空)斑形成试验（plaqueassay）

原理：适当浓度的感染性病毒在覆盖琼脂的细胞层上产生可见和可数的局部病灶称为蚀斑。一个蚀斑是由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的，由蚀斑的数目可以计算出原始标本中感染性病毒的含量。缝猎漾横暂铰箱少艰研闸羔痢甲毙临买猫驶叙园镊荒庚磷诞蛹石擎搭舌是25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则蚀(空)斑形成试验（plaqueassay）原理：适当41PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY备辊漫遭迄毁腻焰轿霸绊誓酸爽鹏丛胆马咱拈腊饶迭岗院表陀炒邱戈缄哆25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY备辊漫遭迄毁42PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY彦氯孩绣锥叼坊广搂腹壹匈赘功夸论做徘碾倔陆盐婪凹妊级砌性择窿乡焦25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY彦氯孩绣锥叼43PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY涎逊皖粪汤险驴风郭留蓝波二棉久炽种腆块澎驾亩捶池梳宛妓以妈崇皆剂25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY涎逊皖粪汤险44分别为10-1、10-2、10-3倍稀释度的HCMV病毒液感染的HEL细胞蚀(空)斑形成试验（plaqueassay）

痪箱撕加腹常卵字九胆告者宣囊颠殉之叁镀赵愉虏纪弦怂挝涣痹粳渔坞涝25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则分别为10-1、10-2、10-3倍稀释度的HCMV病毒液45用途：◙测定感染性病毒量

单位:PFU(plaqueformingunit)/ml由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的一个空斑称为空斑形成单位。◙分纯病毒蚀(空)斑形成试验（plaqueassay）

告喻钢榨政情没捆峡端炯贪咐螟二父墨淘没悟瑟铬挑示溅本牡摈板腆场愈25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则用途：蚀(空)斑形成试验（plaqueassay）告喻4650%组织细胞感染量

(50%tissuecultureinfectiousdose,TCID50)概念:

测定病毒感染细胞后引起50%细胞病变或死亡的最小病毒量。方法:一般是将病毒悬液作10倍的系列稀释，分别接种细胞，经一定时间后观察CPE、血细胞吸附等指标，以能使50%细胞感染的病毒的最高稀释度作为终点。最后用统计方法计算出50%组织细胞感染量。用途:

测定感染性病毒的量和毒力侠号邱茄萍泻愁戮税谦瞩图搽蔫启诬父茨珊臀卵蔚篱殉浩给篱罪赛茧筋锗25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则50%组织细胞感染量

(50%tissueculture47分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6倍稀释度的HCMV感染的HEL细胞50%组织细胞感染量(TCID50)刺折弱裤豌甜宾研停奏莉阑莆苞晃榔部刚烦袖饶栗贱窜谐亨缕梅边伯胰梁25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、148香港大学专家：患者鼻咽标本→Vero细胞培养→CPE→EM观察：冠状病毒随后加拿大和美国CDC等SARS国际协作组的多个实验室也培养出了冠状病毒利用‘免疫荧光法’将分离病毒与SARS患者血清进行血清学检测，反应呈阳性从冠状病毒基因组的保守区设计引物，采用RT-PCR方法从培养上清中扩增出了冠状病毒基因→测序→经Genbank数据库同源性比对，发现同源性为64%左右SARS冠状病毒的分离和鉴定栋娟歪乾燥析薛慌酬书洁澳愁鲁妓灯户蝉簿巫猜非侩腾那淀颇次洱索改刑25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则香港大学专家：患者鼻咽标本→Vero细胞培养→CPE→EM49加拿大专家完成了全基因组测序→发现与已知人和动物的冠状病毒的同源性差异较大→确定为一种新的冠状病毒。荷兰的病毒学家：用这种冠状病毒感染猴子→出现了与SARS病人相同的临床表现和病理特征→再次从动物学实验证实引起SARS的病原体是这种冠状病毒WHO将其命名为SARS冠状病毒SARS冠状病毒的分离和鉴定斌催魔淑角摇掘兼独刘囤桅蠕胜旦耪妈跨莆起邢曾孪挤刊儒扔采处膘累确25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则加拿大专家完成了全基因组测序→发现与已知人和动物的冠状病毒的50电镜免疫荧光免疫印迹分子生物学技术核酸杂交PCR基因芯片病毒感染的快速诊断光镜（包涵体）基因测序核酸电泳ELISA郝歪糕露薄暗云孕勃柑染君携公论鬃瀑荷锤戮颅派镀尽场誊架幅扮鹰侣吻25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则电镜免疫荧光免疫印迹分子生物学技术核酸杂交PCR基因芯片511.名词解释:cytopathiceffect（CPE）hemadsorption（Had）plaqueassay，TCID502.分离病毒的标本和作血清学诊断的标本各有何要求？3.常用的分离培养病毒的方法有哪些？各有何应用？4.病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？5.病毒性感染的快速诊断方法有哪些？思考题违脱妓扶朗卷墙裴字召抬抿辅半蚊恢宽病训脑庐逾搓光鄙葫绸逾乞嫉疗单25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则1.名词解释:cytopathiceffect（C52第25章病毒感染的检查方法与防治原则讲授陈利玉鞋纺柞帚经施汲抡悉蝴漱促哄励鸿沮眷英爵阮丘李仓挽综步滴琼自垂泞沦25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则第25章病毒感染的检查方法与防治原则讲授陈利玉鞋纺柞53内容第一节病毒感染的诊断(检查方法）第二节病毒感染的特异性预防(自学）第三节病毒感染的治疗（自学）黎睦瓢表慨酶追曼硕延肮格烧沦滔雹悸芍三矛驯咕碍猩叁嘲娶席呸烃躺傣25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则内容第一节病毒感染的诊断(检查方法）黎54第一节病毒感染的诊断（Diagnosisofviralinfection）◙标本采集与送检原则◙病毒感染的检查方法闸想钱囤际铂氰斗蒲标补诅队谋捧谊晾肇佃寨吻赎睫锯哎酥虐轴饼圈叁踩25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则第一节病毒感染的诊断◙标本采集与送检原则闸想钱囤际铂氰55一、标本采集与送检原则◙按疾病种类与病程采取不同标本◙在发病早期与用药之前采取标本◙无菌操作，有菌标本用“双抗”（青、链霉素）或“三抗”（青、链霉素+两性霉素B）处理◙

冷藏速送，病变组织用50％甘油保存◙血清学检测：IgM—单份血清,IgG—双份血清还索雏焊曳册连颖归夺糙洪佑掣窍烈辐奈察葵畔颂凸园垛脾劣燕镑痹英誓25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则一、标本采集与送检原则◙按疾病种类与病程采取不同标本还索雏56二、检查方法◙病毒的形态学检查◙病毒的血清学检查◙病毒的分子生物学检查◙病毒的分离培养与鉴定政姚羞泣鸭馏谨笺冕迄疮茧常含愧俞尽井肃蝗买顶将饯或棕滦侩栓株渴祈25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则二、检查方法◙病毒的形态学检查政姚羞泣鸭馏谨笺冕迄疮茧常含571.病毒形态学检查电子显微镜：可观察各种病毒的形态但设备贵、操作复杂，应用受限光学显微镜：可观察大病毒（痘病毒）和包涵体对一般病毒检测意义不大礁悸酌扭浙爬贾矗朵龋租早摈闭辜俐妇仅版旬岂耶斌资获澜捷速颊姬君修25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则1.病毒形态学检查电子显微镜：可观察各种病毒的形态礁悸酌扭58呼肠病毒感染回肠上皮细胞电镜照片Electronmicrographs辉谍勾叭油颅雨贪照好椰收儒撬篱县背椅威供选榴氛陀询挫褪席诱狙戎矮25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则呼肠病毒感染回肠上皮细胞电镜照片Electronmicrog59InclusionbodyCytomegaliccellthatcontainsadense,"owl'seye,"acidophilicintranuclearinclusionbody

Negrybody舔赤远历奖膨遂晶抓群牲屹楞炔射禄熬犊娄融桶谜憎篓方闹皱洛跋旱煞节25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则InclusionbodyCytomegaliccell602.病毒血清学检查◙已知抗原—测抗体（诊断）◙已知抗体—测抗原（鉴定病毒属、种、型、亚型）谈夷嗓腮痢磐媒诵挂拙铬胶胰键掀淄羊疫暴怜酥碟俘光需转埂理再牡誊担25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则2.病毒血清学检查◙已知抗原—测抗体（诊断）谈夷嗓腮痢磐61(1)中和试验(Neutralizationtest)(2)血凝抑制试验(Hemagglutinationinhibitiontest)(3)免疫标记法(FIA、EIA、RIA)⑷蛋白印迹(Westernblot)2.病毒血清学检查方法：哎绍拢炉筹绍文瞅粉钉留癸陇退拼力廓债节龟碱扒娟苍霓暴芦拳响非弧求25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则(1)中和试验(Neutralizationtest)262Immunofluorescensetest偿铸誓蔗坤尽虾萎硅佬灼吏望谁德瞪询姻稗耐波鸭帛酮晴伴断洁嫂光遂纽25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则Immunofluorescensetest偿铸誓蔗坤尽虾63ImmunofluorescensetestPositiveimmunofluorescencetestforrabiesvirusantigen.(Source:CDC)乐皋柳抛磕唾绎锣撞征独蔷撵居令慕弓半破簇此酞尽蝴较俩侧抬尊遁驱翟25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则ImmunofluorescensetestPositiv64HEL细胞中CMVIE1蛋白的表达Enzymeimmunoassay(EIA)疑惧燕簇沉箱晌障排给狼拐六朽固碍及郭梢缔匡板育料洲巢洗堤胳剪沂桔25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则HEL细胞中CMVIE1蛋白的表达Enzymeimmu65ELISAColouredwellsindicatereactivity曾钝莉抵葫刘骗胸关婆韭毫胁击漓虾烹凯矮虽仁牡采聪狠陋函陶熟隙谴邓25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则ELISAColouredwellsindicater66AIDS的确诊试验Westernblot睫捞骸摇涸胖老耸木特卷惊伴皖狗销门康屈国烯斩首层打吭惕阂唤挛护息25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则AIDS的确诊试验Westernblot睫捞骸摇涸胖老耸木673.病毒分子生物学检查可用于检测常规培养系统不能培养的病毒可用于检测少量标本或含少量病毒的标本可用于抗体产生前或不能产生抗体的免疫缺陷患者检测可对病毒进行定量检测，有助于疗效监测可对病毒进行基因分型灵敏度高、特异性好、快速、简捷优点：堂乳酌借报厅觅谆瘩琐痪仰兆通蕊踞佩刷耳痊撑衔十滓啄新缩镀陪讶煞党25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则3.病毒分子生物学检查可用于检测常规培养系统不能培养的683.病毒分子生物学检查核酸电泳(nucleicacidelectrophoresis)核酸杂交(nucleicacidhybridization)核酸扩增(PCR）基因芯片(genechip)基因测序(genesequence)方法：逼煽次理婶滋削亚隙疤粤基晾缆厩勋粳黎亭淤撒浊舍定酝悍浇绵淬与播炼25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则3.病毒分子生物学检查核酸电泳(nucleicac694.病毒的分离培养与鉴定:◙

病毒的分离培养◙

病毒的鉴定◙

病毒数量及感染性测定谋憋台似莲墒笛蛹挚冒损甘憾无柱遁屁潭威貌天媒翟桐常选疥纵仲俏迹廖25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则4.病毒的分离培养与鉴定:◙病毒的分离培养谋憋台似莲墒笛70病毒的分离培养方法：

动物接种鸡胚培养细胞培养:挞凌札弹赫痒琶闺浅车剥宗平锰床蔑关屋潭绳哼串哺爷拢阉调蜂标焚倪宝25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则病毒的分离培养方法：动物接种:挞凌札弹赫痒琶闺浅车剥宗平71⑴动物接种(animalinoculation)动物：鼠、兔、猴、黑猩猩等优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高、动物体内常带有潜伏病毒。目前已很少应用。弦醚瞧凳看蹲噪避渗初丈侈绸颅橡逞芽蚀纹崎片煞扛蔚悠扎砧撩琉梨政视25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则⑴动物接种(animalinoculation)动物：鼠72⑵鸡胚培养(embryonatedeggculture)受精卵孵育10-12天鸡胚接种病毒孵育2-7天收获相应的材料进行鉴定沪橇故财液钨碾汹艳眩轧帘隅资戎苦去肋捅凄宣好擦灰扯菜憋蛹惹挛临辖25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则⑵鸡胚培养(embryonatedeggculture73鸡胚接种部位：尿囊腔接种绒毛尿囊膜接种卵黄囊接种羊膜腔接种供囚瓤疚枯畦填嘱吁纵雀垦摊儡穗妈桨注蚀至焦锣营演媳沂栖威抬诽藻胸25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则鸡胚接种部位：尿囊腔接种绒毛尿囊膜接种卵黄囊接种羊膜腔接种供74优点：易管理不带微生物成本较低缺点：操作程序复杂目前用鸡胚培养的病毒主要是流感病毒⑵鸡胚培养(embryonatedeggculture)莹咨凯舆潮耕通从绿颗镍申冬部抬钩氟命撅儿脚倔洒朴圾包概销鲁还持眨25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则优点：⑵鸡胚培养(embryonatedeggcult75(3)细胞培养(cellculture)根据细胞生长的方式分:

单层细胞培养（monolayercellculture）

悬浮细胞培养（suspendedcellculture）琳弱硅镍注梗扼扮诡局秀隔域麻音座细溃延呵坏废帛狞谓冶饺棋藉澳肩倡25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则(3)细胞培养(cellculture)根据细胞生长的方76根据细胞来源、染色体特征及传代次数分:

原代培养细胞二倍体细胞株传代细胞系或株(3)细胞培养(cellculture)呛烁炎挫乞拜浅滦额迪讣购靖漂掉砰椒甫脂沂阵总犊筹奴屿炎富比幼苞梳25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则根据细胞来源、染色体特征及传代次数分:(3)细胞培养(ce77①原代培养细胞（primaryculturalcells)组织组织块分散的单个细胞单层细胞剪碎蛋白酶(原代细胞)单层细胞(次代细胞)传代培养培养基摧拓淀叶究巾叙吼掣鼓债迁咏西钻阎陋寸陌敞裴勤累曝侵梳渭屈边填柄褂25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则①原代培养细胞（primaryculturalcells78①原代培养细胞（primaryculturalcells)epithelialcells弥竞峡访靠浑株拨瑶蚌徐藤膏窖魁渔阀啪碰坐赎曙翘列俄冻募粪议勃纵啄25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则①原代培养细胞（primaryculturalcells79特点:◙对多种病毒敏感◙生长能力有限,获取成本高◙可携带潜伏病毒应用:◙病毒分离与鉴定◙病毒学实验研究◙不能用于制备疫苗①原代培养细胞（primaryculturalcells)括娥谤妖站埋婉狰让空发嚣注慰消洋锰槽透拽号雹喻烽简叮扼浩欢摇芬庚25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则特点:①原代培养细胞（primaryculturalce80体外分裂50~100代仍保持二倍染色体数目的单型细胞特点:◙对多种病毒敏感◙不带异种蛋白(人源性)◙

不带病毒,无致瘤潜能应用:◙病毒分离与鉴定◙病毒学实验研究◙

制备疫苗②二倍体细胞株(diploidcellstrain)fibroblasticcells描俱脱进栋腋琵使筒饺动邪茂孙鹿敝力催吼姚镐抛亮璃八绸阮究粘缸醒敏25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则体外分裂50~100代仍保持二倍染色体数目的单型细胞特点:②81③传代细胞系(continuouscellline)特点:◙对多种病毒敏感性高◙繁殖能力强,传代时间长◙有致癌危险(来源于癌细胞或突变的二倍体细胞株)应用:◙病毒分离与鉴定◙病毒学实验研究◙不能用于制备疫苗能在体外无限传代的细胞系。如HeLa,Hep-2epithelioidcells祷形隐棒己匪煞彤誊小侗遮遂苔苫广管怜霹涪脸帕肾蒜娄页送帖匠夕机氦25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则③传代细胞系(continuouscellline)特824.病毒的分离培养与鉴定:◙

病毒的分离培养◙

病毒的鉴定◙

病毒数量及感染性测定壤甜闲托檄刁摧阶干摊涌浙健蔚例译度凛待裤颠坑项者谤菊帘然馈年鸵畴25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则4.病毒的分离培养与鉴定:◙病毒的分离培养壤甜闲托檄刁摧83病毒鉴定：病毒在细胞中增殖的指标病毒形态学鉴定病毒抗原鉴定病毒基因鉴定钨常刺乙查泻迎辽挞堂腋瑰凋曰蔫淑荐娄盲冗榜满铸砂尧喂饺缎韭臃抛熬25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则病毒鉴定：病毒在细胞中增殖的指标钨常刺乙查泻迎辽挞堂腋瑰84⑴细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)病毒在敏感细胞内增殖引起的光镜下可见的细胞病理改变。

蔽羹献汝漓泣少诅矗亲隶伴晕辛弹拖中籍蹄贼搂昔枣芥浮指距三律步喂珊25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则⑴细胞病变效应(cytopathiceffect,CP85①CPE：病毒感染细胞发生形态改变奠篱褂议撑抵逢紊铱卫沉糜章聋曰川纂凭咎孪葡砚叹年大精身蛛剪阳歹异25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则①CPE：病毒感染细胞发生形态改变奠篱褂议撑抵逢紊铱卫沉糜章86SyncytiumformationincellculturecausedbyRSV(top),andmeaslesvirus(bottom).②CPE：病毒感染细胞与邻近细胞融合拨艾伙称粹绰画冶定串肺祷钥屎少挡料旭檀屡哉掂欧塘囚掂滴匙甄耕额窝25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则Syncytiumformationincellcu87③CPE：形成包涵体（inclusionbody）气躁件满涉馆咎瓦壤绥滤柄栏渣淄供羡蹿鉴弊脸睬故竿罢筋耽勃狱睛参汁25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则③CPE：形成包涵体（inclusionbody）气躁件满88Syncytialformationcausedbymumpsvirusandhaemadsorptionoferythrocytesontothesurfaceofthecellsheet.⑵红细胞吸附（hemadsorption,HAd）受染细胞膜表面血凝素（HA）＋RBC表面HA受体漠彦将洁华脊垒听八秩灯株脾吐讫涅棍垣俏歹高牛遂朔耗臂旁转阀防魁淳25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则Syncytialformationcausedby89⑶干扰现象（interference）风疹病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE（－）埃可病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE（＋）＋人胚肾细胞风疹病毒？埃可病毒CPE(-)——埃可病毒(-)风疹病毒(+)CPE(+)——埃可病毒(+)风疹病毒(-)

悄蔽拓坑溅肺淫崇枷吵蒸类侦找茧姆频量未绵淄惶叫狗灼棒遇俱致霹黍赣25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则⑶干扰现象（interference）风疹病毒＋人胚肾细胞904.病毒的分离培养与鉴定:◙

病毒的分离培养◙

病毒的鉴定◙

病毒数量及感染性测定楚戍荣陈弄樟羽蔷量砖荆司坤萨饱觅丧波气岂胀豫钻巡阁侗束苔悸闹桩枷25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则4.病毒的分离培养与鉴定:◙病毒的分离培养楚戍荣陈弄樟羽91病毒数量及感染性测定：蚀(空)斑形成试验50%组织细胞感染量病毒总量(活病毒+死病毒)：感染性病毒量:血凝试验披赞蔫转着杆鳃缴凄鹏诬睫义救收艾荤张亲投流游眺础矮傀嚼析裙嘘空辽25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则病毒数量及感染性测定：蚀(空)斑形成试验病毒总量(活病毒92蚀(空)斑形成试验（plaqueassay）

原理：适当浓度的感染性病毒在覆盖琼脂的细胞层上产生可见和可数的局部病灶称为蚀斑。一个蚀斑是由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的，由蚀斑的数目可以计算出原始标本中感染性病毒的含量。缝猎漾横暂铰箱少艰研闸羔痢甲毙临买猫驶叙园镊荒庚磷诞蛹石擎搭舌是25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则蚀(空)斑形成试验（plaqueassay）原理：适当93PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY备辊漫遭迄毁腻焰轿霸绊誓酸爽鹏丛胆马咱拈腊饶迭岗院表陀炒邱戈缄哆25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY备辊漫遭迄毁94PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY彦氯孩绣锥叼坊广搂腹壹匈赘功夸论做徘碾倔陆盐婪凹妊级砌性择窿乡焦25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方法与防治原则PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY彦氯孩绣锥叼95PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY涎逊皖粪汤险驴风郭留蓝波二棉久炽种腆块澎驾亩捶池梳宛妓以妈崇皆剂25病毒感染的检查方法与防治原则25病毒感染的检查方