广西巴马壮族长寿老人p16基因甲基化

广西巴马壮族长寿老人p16基因甲基化【摘要】目的讨论p16基因甲基化与人类长寿的关系。方法应用甲基化特异性PR〔SP〕技术对巴马156例〔年龄90～105岁，平均93.2岁，长寿组〕安康壮族长寿老人和142例安康壮族成年人〔年龄20～72岁，平均34.8岁，对照组〕的p16基因甲基化状况进展分析。结果长寿组p16基因甲基化率(20%)明显低于对照组〔39%)(P0.05〕。结论p16基因甲基化与人类长寿有着较为亲密的联络。【关键词】p16；长寿；甲基化人的寿命与环境因素和遗传因素均有很大的关系，其中恶性肿瘤是老年人易患的直接关系到寿限的疾病之一，而肿瘤的发生与机体的抑癌基因关系亲密。p16基因是一种重要的抑癌基因，在细胞周期过程中扮演着非常重要的角色，p16基因缺失或突变已被证实是许多肿瘤发生的原因之一〔1〕。近年研究说明p16基因与细胞衰老有着严密的联络。本文旨在讨论安康巴马壮族长寿老人p16基因甲基化程度，进一步提醒其与长寿的关系。1对象与方法1.1对象长寿组〔LG〕156例，年龄90～105岁〔12名≥100岁〕，平均年龄93.2岁，男46例，女110例。对照组〔G〕142例均为安康成年人，年龄20～72岁，平均年龄34.8岁，男57例，女85例。研究对象均为居住在巴马县〔主要是甲篆、凤凰、西山等乡镇〕和东兰县〔主要是城关、长乐、武篆、三石等乡镇〕的壮族人，据家谱均可逆查8代以上。LG老人均为巴马县长寿研究所和东兰县老干局老龄办建档并长期随访的对象。G为同一地理区域内无血缘关系、随机抽样的成年人，生活习惯及劳动条件与LG组均根本一样。每个实验对象采静脉血2l，加AD抗凝，用经典的苯酚/氯仿抽提法提取白细胞DNA〔2〕。用TE溶液溶解DNA样本置4℃待用。1.2主要试剂1.3实验方法按照Heran等〔4〕描绘的甲基化特异性PR〔ethylatinspeifiPR,SP)方法,并参考文献〔5〕进展p16基因甲基化的检测,其原理是DNA双链变性解链后在亚硫酸氢钠作用下碱基转化成U,但对于已发生甲基化的那么无此改变,据此设计两对不同引物进展PR扩增即可检测出此差异。步骤如下：①DNA修饰。取50μl(2μg)经TE溶液溶解DNA样品,参加新配的3l/LNaH5.5μl，42℃水浴30in。参加新配的10l/L氢醌30μl和3.9l/L亚硫酸氢钠(Siga公司)510μl,加少许石蜡避光55℃水浴16h。②DNA纯化。采用izardDNA纯化系统(Prega),将去针头的注射器针管固定于纯化柱上,将上述DNA与1l纯化树脂混匀后转移至注射针管,加活塞轻推,同法用2l80%异丙醇洗涤1次，14000r/in离心纯化柱2in。加50μl预热灭菌双蒸水于纯化柱(65℃),室温放置1in,13000r/in离心2in,弃纯化柱。参加5μl新备的3l/LNaH，42℃水浴15in,参加乙酸铵(终浓度3l/L)、1μl糖原(10g/L)和三倍体积的无水乙醇，-20℃过夜。14000r/in4℃离心20in，70%乙醇洗涤,加50μl双蒸水溶解备用。1.3.1PR反响体系为25μl，每个反响体系分别参加上述两对引物；PR反响条件为：94℃预变性4in→94℃变性1in→59.8℃退火1in→72℃延伸1in，进展33个循环反响。1.3.2电泳基因扩增后以8μlPR反响产物在2%琼脂糖凝胶上电泳，电流45A，电压100V，电泳载样缓冲液为1×TBE缓冲液，电泳后，在紫外光透射仪上观察，摄片并记录结果。甲基化引物扩增有150bp条带说明该基因发生了甲基化，非甲基化引物扩增有151bp条带那么说明该基因未发生甲基化。1.4统计学处理长寿组和对照组的各基因频率比拟分析用χ2检验，用SPSS软件包进展分析。转贴于论文联盟.ll.2结果LG组p16基因甲基化率明显低于G组〔P0.05〕。对男女分别比拟后，LG组p16基因甲基化率亦明显低于G组〔P0.05〕，见表1。表1p16基因甲基化分布的长寿组与对照组比拟〔n(略)〕3讨论广西巴马县是著名的世界第五长寿之乡，国内很多学者对该地区的长寿人群进展了大量的研究〔9〕，但是关于遗传因素方面的研究很少。本研究说明，长寿组p16基因甲基化比对照组低；对男女分别比拟后，长寿组p16基因甲基化比对照组低。而两组中女性p16基因甲基化均比男性高，说明不同性别人群p16基因甲基化程度是不一样的，研究衠明，长寿与性别之间存在相关关系，人类长寿显示明显的母系遗传倾向〔10〕。虽然女性的长寿与其生理特点、社会生活习惯及生活环境等有很亲密的关系，但是，不可否认的是遗传因素在其中也起了很重要的作用。本研究结果提示p16基因甲基化和不同性别的长寿人群有一定关系，可能正是由于长寿老人p16基因甲基化率低，使得p16基因失活少，从而减少患癌症等影响寿命的疾病的时机。由于遗传因素在体内的作用极其复杂，因此，要想弄清楚其在长寿中的详细作用机制并非一朝一夕的事，仍然需要作更进一步的研究。p