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文档简介
关于猪链球菌病诊断第1页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五病原:1猪链球菌2型(Streptococcussuis2)2马链球菌兽疫亚种(Streptococcusequi
subspzooepidemicus),旧称兽疫链球菌3D、E、L、S群链球菌(Lancefield)兰氏血清学分群,链球菌分为20个血清群(A、B、C.....V,I、J除外)第2页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五一、病原分离1采样活猪:采样用灭菌棉拭子擦拭扁桃体病死猪:扁桃体、肺、肝、血液,有脑炎症状取脑组织,关节炎可取关节囊液第3页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五2分离培养(1)培养基:THB培养基、绵羊血或马血平板(2)培养条件:需氧兼性厌氧、37℃、pH7.2
猪链球菌2性营养要求比马链球菌兽疫亚种低,后者需加3-5%的犊牛血清第4页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五二、临床诊断
主要表现为败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎、心内膜炎、关节炎等。但不同链球菌病原引起的症状类似,故该诊断不能用于确诊。第5页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五关节炎症状第6页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五败血症第7页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五1染色镜检猪链球菌2型:革兰氏染色阳性、菌体呈圆形或椭圆形,直径小于2.0μm,一般呈短链或成双排列,革兰氏染色阳性,菌体表面能形成荚膜。
二、微生物学诊断第8页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五马链球菌兽疫亚种:
革兰氏阳性球菌,直径0.5~1um,液体培养基中呈长链,菌体表面能形成荚膜。营养要求较高,在5%犊牛血清生长良好。根据类M蛋白抗原性的差异,该菌至少有15个血清型。第9页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五马链球菌兽疫亚种猪链球菌2型菌(α溶血)第10页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五图2猪链球菌2型
(ZY05719)
第11页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五ATCC35246株第12页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五2培养特性猪链球菌2型:
菌落形态血平板上呈灰白色小菌落,粘稠,2型在绵羊血平板上呈α溶血,马血平板则呈β溶血。第13页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五马链球菌兽疫亚种:在血清肉汤培养基中培养该菌,开始时有轻度混浊,继而变清,于管底形成沉淀。于5%绵羊血琼脂(THA)培养基上培养24h,大部分菌株形成3~4mm的粘液样大菌落,产生明显的β溶血。小部分呈非粘液样菌落,大小约1mm左右。第14页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五3生化鉴定猪链球菌2型:
发酵乳糖、海藻糖、水扬苷,部分菌株发酵棉实糖、菊糖;不发酵甘露醇、山梨醇第15页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五马链球菌兽疫亚种:能水解精氨酸,发酵乳糖、水扬苷、山梨醇产酸。不能发酵菊糖、甘露醇、棉子糖和海藻糖。V-P试验阴性,不产生靛基质,不还原硝酸盐,不液化明胶。第16页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五三、免疫学诊断1玻板凝集实验用于猪链球菌2型快速定型,但要求抗体效价高;马链球菌兽疫亚种只能用于定群
2乳胶凝集实验敏感性较高,结果容易判断,但有非特异性第17页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五3免疫荧光猪链球菌2型:用MRP特异抗体可用于菌体表面其分布的观察,但需用激光共聚焦显微镜。马链球菌兽疫亚种:用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察第18页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像
MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像第19页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五
SS2多抗介导FITC标记的SS2的激光共聚焦图像
第20页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五ELISA
常用链球菌多克隆抗体包被,以MRP或类M蛋白的单克隆抗体夹心,敏感性高,特异性较强。第21页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五四、分子诊断1多酶电泳法:原理:不同型猪链球菌,胞内酶分子的氨基酸有差异,因而电荷有差异,在电场中,其迁移率有差异。用于不同型链球菌的分析第22页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五2限制性酶切图谱分析
原理:不同种或亚种链球菌基因不同,因而用限制性内切酶酶切后,其电泳图谱不同。用于分离株变异分析,亦可用于不同种或型的鉴定第23页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五随机扩增多态DNA分析(RAPD)用多对随机引物进行PCR扩增,可得到不同的产物,且产物具有多态性。可用于种或型的鉴定或分离株变异分析第24页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五PCR猪链球菌2型:
mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测
cps2具有型特异性第25页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五bp970744622557mrp,ef,sly,CPS2123451:HA9801;2:ZY05719;3:Marker;4,5:阴性对照第26页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五250bp500bp750bpM122000bp1000bpMaker1.HA9801(cps2)2.ZY05719(cps2)cps2第27页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五250bp500bp750bp2000bpM1234ef,mrp,gdh,orf2Maker1.ef(626bp)2.mrp(316bp)3.gdh(688bp)4.orf2(858bp).第28页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五250bp500bp750bp1000bp2000bp250bp500bp750bp1000bp2000bp1099bp1310bpM1M1slyfbpsMaker1.slyMaker1.fbps第29页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五第30页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五1040bp100bp250bp500bp750bp1000bp2000bpM123M:DL-Marker20001:ZY05719(gapdh)2:HA9801(gapdh)3:空白对照gapdh第31页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五图8orf2PCR检测结果1marker;2~4,7~13PCRproductsofswineStreptococcus,2HA9801;5~6negativecontrol第32页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五图11PCR检测猪链球菌2型cps21.H2O;2.SH0033;3.35246;4.ZY05722;5.ZG05464;6.GH05458;7.HA9802;.8.ZY05719;9.HA9801;10.YJ05465;11.JDZ05802-1;12.JR05730;13.ZY05721;14.11611;15.CHZ05806;16.260;M.MarkerDL2000.bp387M161514131211109876543211002502000750第33页,共35页,2022年,5月20日,8点13分,星期五1234562000→1000→750→500→250→100→1DL2000market2、3PCRproductofATCC352464PCRproductof
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