临床病理操作规范

临床病理操作规范

第一章病理工作程序规范

、活体组织检查程序活体组织检查(biopsy),简称活检，是从患者活体采取组织进行的病理学检查，其主要目的是为了协助临床明确诊断，合理地制定治疗方案，客观地判断预后。它是临床病理科的主要工作之一。

1.病理检查申请单和送检标本的接收

病理检查申请单是临床科室向病理科送达的会诊单，是病理医师作出病理诊断必备的临床文字资料，是具有法律性意义的文书档案。因此，临床医师应认真逐项填写申请单内的有关项目，并由管理该病员的本院医师签名后随同检查标本送往病理科。病理科在接收申请单及送检标本时应对二者进行第1次认真核对。凡有下列情况之一者，病理科应及时与送检科室联系或退回：

申请单与送检标本不符，盛标本的容器上未贴标记者;

申请单中有重要项目空缺未填写，或病史及临床检查(包括术中检查)过于简单者；

送检标本因未及时固定而致严重自溶、干缩、腐败，或被错误地使用非固定液(如消毒液等)浸泡者；

(4)送检标本的主要病灶被事先挖取或一件标本送两个单

位者。

对符合送检要求的标本，由接收者在相关科室的标本送检簿上签收，或发给收到标本通知单。

2•申请单、送检标本的编号与登记

病理科工作人员于标本收集的当天，及时对申请单与标本同时编号，经第2次核对无误后，进行登记。登记簿和(或)微机记录、申请单、送检标本容器上的编号应完全一致。

大标本的补充固定

对送检的大标本，病理医师应在不影响主要病灶定位的情况固定至取材的间隔时间超过10h以上。

下，作适当的剖

,并添加10%福尔马林，以补充固定。

巨检、取材与记录

本项操作，原则上应有2人参加，其中1名为记录者。记录者应详细记录取材者的口头描述，同时承担申请单编码、病人姓名、主要病史、术中所见、送检标本的件数等的宣读任务，并把临床对病检的特殊要求告知取材者，对取材者放置小号码进行监督。取材者应在记录者宣读上述内容时，对标本容器上的编号、姓名及标本件数作第3次核对。如发现标本的件数不符，应将该标本另置，待与临床联系后再作处理。巨检的观察、描述与取材应《规范》(三)要求进行。经反复检查，仍未发现标本内有临床所提到的病变时，应将标本另置，待与临床医生联系后作处理；必要时邀请手术者共同参与取材。有下列情况之一者，应在标本编号后编写小序码号，严格按编号顺序进行：

(1)一位病员被送检一件以上的标本；

申请单中注明有特殊标记的标本；

一个大标本多处取材；

(4)根治术标本的基部及切缘，检出或送检的淋巴结；

(5)补充取材。

每件标本取材完毕后，应冲洗取材用具，防止标本间的组织碎屑污染。取过材的标本应序另行放置，并加足固定液。当日取材全部结束后，移至标本存放架内，按照取材日期先后存放。自报告发出日起，保存2周后，统一清理。当日取材全部结束后，取材者与记录者共同清点当天取材总块数，记录于当天最后一张申请单的反面或日取材记录单上，以备技术人员核对。取材者与记录者分别在有关记录下签名。

脱水、透明、浸蜡

具体操作应按《规范》（二）要求进行。技术人员应在脱水前核对取材总块数。如为自动化操作，应于包埋前核对取材总块数。发现不符时，应与取材者联系，共同清查。

包埋、切片、染色、封片

具体操作按《规范》（二）要求进行。包埋时，应严格分件包埋，切勿包错。不得将来历不明的碎组织块（屑）任意包入，以防包埋过程中的污染。切片、裱（贴）片应严格分蜡块完成，切忌在裱（贴）片水内残留上一切片的碎片，以杜绝裱（贴）片过程中的污染。裱（贴）片时，必须注意蜡块编号与载玻片上编号的完全一致，杜绝因编号错误导致的误差。封片完毕后，应加贴有编号之标签。标签的编号必须与载玻片的编号完全一致。全部工作完毕后，技术人员在制片人栏内签字，并将蜡块按顺序归档。如有专人保管档案，则由保管人员核对蜡块总数与取材总数，两者相符合，由保管人员签字归档。

镜检

具体操作详见《规范》（三）。诊断人员在收到当日切片后，在技术室送片记录本上签字。如发现切片数与取材数不符，应及时与技术室人员联系，进行核查。在观察切片过程中,如发现下列情况，应作出反应：

（1） 切片内有明显污染组织，应与技术室人员联系并检查;

（2） 切片内容与送检组织不符，应分别与技术室人员、取材者联系，必要时，应与送检科室联系；

（3） 切片或染色质量差，应与技术人员联系，必要时重新制片；

（4） 为充分观察病变需要作深切、连切、特染、免疫组化者，应在申请单备注栏内写出意见，并签名。然后交负责切片的技术人员，技术人员应及时完成所需的制片工作。

签发病理诊断书

具体内容及要求详见《规范》（四）。病理诊断是病理医师对送检标本进行检查，结合临床资料，分析、综合、判断后作出的结论，必须十分认真书写。字迹应清楚，关键性字（如癌瘤、阴性、阳性等）更应如此，不得潦草或杜撰简化字，对于这些字亦不得涂改。如为微机打印报告，该格式式统一,无错别字。报告发出前，应由初、复检者分别亲笔签名。病理科医师一律不得应有关人员要求出具假报告或已签名的空白报告单。原报告如遗失，经病理科主任同意后方可以“抄件”形式补发。病理诊断书发出期限：在通常情况下，应于标本收到之日5天内发出（节假日除外）。凡因补取材、深切、特染、脱钙、延长固定（如结核病标本）、会诊或作免疫组化而不能如期发出病理诊断书时，应口头通知临床科室或发出“迟发病理诊断通知单”。在通知单上应说明迟发原因。病理诊断书是病理医师签署的医学证明文件，必须慎重对待。

病理诊断书的送收

住院病人的病理诊断书病理科送达相应科室护士办公室，收到人应在签收栏内签字；门诊病人的病理诊断书由病理科送交门诊部办公室或相应科室，收到人应在签收栏内签字。注明“自取”的报告，由送检人至病理科签收。实习医生、进修人员不得参与签收。

病理诊断书的登记与归档

病理诊断书发出后，应及时将诊断意见在登记本上登记。病理申请单及有关文字资料（如会诊意见等）应当及时整理归档。有专职档案管理人员者，应交管理人员归档。档案管理应力求规范、完整。文字及书面档案应阶段性装订成册，便于查阅。采用微机存档者，应由专人操作。与此同时，病理切片及蜡块亦应归档。病理切片与蜡块的存档时间应在10年以上，最长保存时间视单位具体情况，报请医院和(或)卫生主管部门批准。

借片

切片是否借出及借出办法，由医院作出规定，可有以下两种处理方式：

病员因转诊或外地会诊需要借片者，应填写借片单，按医院规定输借片手续后，由病理科复制所需之切片，并经原签发报告人和科主任核对后方可借出。一般情况下，原切片不予外借。蜡块为无法复制的重要档案，原则上不得外借。会诊单位确需作特染或免疫组化时，可借出重切之蜡片，或由会诊单位病理科向原诊断单位病理科直接商接，并由借方负责归还。

如医院规定为不同意借出切，则应由病理科以彩色图文报告或会诊形式，满足病人的需要。

会诊

病理科医师遇有疑难病例争取在科内或同行间进行会诊。会诊方式可以采取计算机远程会诊、邮寄切片会诊及读片会会诊等。切片和(或)蜡块，由请示会诊的病理科提供。会诊意见应记录或附贴于该例病理检查申请单后，一并归档。如会诊意见与原诊断不一致，由原诊断病理科医师决定是否更改或补发病理诊断报告。应病人要求或经病人同意的会诊，其全部费用用病人负担。对疑难病例，或病理诊断与临床诊断有分歧时，应争取与临床科室进行学科间会诊。

二、术中冷冻切片病理检查程序

术中冷冻切片病理检查，是临床科室向病理科发出的一种类似急会诊形式的会诊。冷冻切片病检的目的有：

明送检的标本中是否有病变存在；

病变的性质；

手术切缘是否足够；

如果不继续进行手术，已送检的标本是否能满足病理常规检查的需要。它要求病理医师在手术进行中就送检标本检查结果对上述问题(或其中一项)作出回答。术中冷冻切片病理检查的时间短、制片难度较大、对诊断者的要求较高，诊断结果往往直接关系到手术的范围和术式。

因此，临床科室与病理科均应十分重视，密切配合。临床医师应向病人家属讲清冷冻切片诊断的准确性低于常规石蜡切片诊断，两者可能出现不同的诊断意见，并有可能出现当时无法判断病变性质而须待石蜡切片等情况，取得病人家属的理解、同意并签字；病理医师应认真、谨慎、客观地进行观察和报告。

申请单的送达与接收

术中冷冻切片病理检查的申请单经本院手术主刀医生签名后，于术前一天送达病理科，以便病理科做好准备工作。病理医师接收申请单后，应仔细阅读并了解临床科室的特殊要求。对体表可看、触的病变，力求亲自检查患者。对内脏病变，则尽量亲自阅读有关临床资料(包括病历、影像学及实验室检查资料等)，务求做到心中有数。有下列情况之一者,应当及时作出反应：

骨组织，因难以做冷冻切片，应向临床科室说明，将申请单退回或改用其它快速诊断方法；

淋巴结难以制作理想的冷冻切片，因此临床要求作出是否为恶性淋巴瘤诊断时，应向临床说明，退回申请单，改做常规石蜡切片，但如仅要求判断有无癌转移，应予接受；

脑组织含水量多，冷冻切片质量较差，应向临床说明,或劝请改为常规石蜡切片检查；

主要依赖于发现有无侵袭或转移等到恶性生物学行为才能判断良恶性的肿瘤，鉴于冷冻切片时间和取材数均受到限制，因此不宜依靠冷冻切片作出良恶性的诊断，应向临床说明，或退回申请单，或在取得共识的情况下，有选择性地进行术中冷冻切片诊断；

软组织肿瘤中须依靠核分裂象计数以判断良恶性者，因限于切片质量及时间，难以作出可靠的定性诊断，应向临床说明，或劝请改为常规石蜡切片检查，或在双方达成共识后进行；

病灶小或多发性的皮肤及皮下病变，原则上不作术中冷冻切片病理诊断。

标本的送达与接收

术中送检组织应及时送达病理科。病理科接到标本后，应对病人姓名、科室(病区)、床号进行核对，随即进行编号,将送检标本与申请单一同交主检者。主检者应作出大体描述及取材情况说明，并记录于申请单有关栏内。取材后，直接交给负责冷冻切片的技术人员。技术人员制片完毕后，应直接交给取材者，双方同时进行核对。术中冷冻切片的操作详见《规范》(二)。

术中冷冻切片病理诊断的报告

可出具冷冻切片病理诊断书，也可采用电话通知。电话通知者应为主检者或参与诊断的病理医师；接电话者，原则上应为参与手术过程的医师。通话时，双方均应有另一人在场。电话报告内容：

病人姓名、性别、病区、床号及送检物为何处(或何种)组织；

病理诊断；

需要进行说明的问题；

(4)报告人姓名；

接电话人应做书面记录，并奖有关内容进行复述，同时，告之接话人姓名。上述内容，双方应同时在各自的专用登记本上进行书面记录。

特殊情况处理

凡有下列情况者，应请手术主刀医师听电话，双方探讨。必要时，病理科医师可赴手术室直接观察病变，现场商讨：

病理诊断与临床术前诊断差距校大，甚至相反；

交界性病变或交界性肿瘤；

低度恶性肿瘤；

新近发现的病变，病理与临床间对疾病名称的内涵可能存在争议的病变；

术中无法作出病变性质判断，须待常规石蜡报告；

临床或病理要求重新取材送检。

上述情况经双方商定后，记录于申请单和登记本上。

冷冻切片报告应由副高以上职称的病理医师签发。有的科室，应有两名副高以上职称的病理医师同时签发。在特定情况下，经医院领导批准，病理主治医师可以签发报告。

冷冻切片剩余组织及未取材组织的处理

冷冻切片剩余组织，一律应作常规石蜡切片，以作对照。“冷冻”组织石蜡切片病理诊断书应在术后尽快发出。未取材冻切的其他剩余组织亦酌情取材作常规制片，要另编小号，该切片有时可能与冷冻切片不符。如有与手术中冷冻切片报告不符者，应及时及早通知临床并发出补充报告。同一患者术后送检的标本按常规进行取材、制片、报告。报告中应旬含术中冷冻病理诊断内容(包括冷冻切片号)。

归档

冷冻切片所有的有关资料(申请单、切片、冷冻切片病理诊断报告书等)，均应按序分别存档。术中快速石蜡切片诊断程序处理程序及原则基本与术中冷冻切片病理诊断相同，但对样本的要求可适当放宽如脂肪组织、脑组织等)，在特定情况下，经医院领导批准，病理主治医师可以签发报告。四、细胞学检查程序

细胞学检查是通过对脱落细胞（如分泌物、渗出物、排泄物中的细胞）和穿刺抽取、内窥镜下刷、刮而得的细胞进行形态学观察并作出判断的过程。具体内容及要求详见《规范》

（三）。

申请单、送检标本的送达

送检医师认真填写细胞学检查申请单，签字后连同送检标本送往病理科或细胞学室。

申请单、标本的接收

病理科或细胞学室按标本接收程序及要求进行核对、编号。穿刺涂片和组织印片由病理科或细胞学室工作人员应按规范操作并编号。深部组织穿刺可在临床及相关科室配合下进行。涂片或印片直接交给技术人员编号后进行染色、封片。制片完毕后，由技术人员将涂片或印片连同申请单一并交主检医师。

3•阅片及签发细胞学诊断书

具体内容及要求详见《规范》（四）。

细胞学检查诊断书是病理医师（或细胞学室医师）对涂片中细胞形态的综合性结论。由于它的依据是细胞学形态而不是组织学结构，因此，应按细胞学诊断原则进行诊断。细胞学诊断书由主检医师亲笔签名。

细胞学诊断书的送达

其程序同活体组织检查病理诊断书。

登记、归档

其程序同活体组织检查病理诊断资料。阳性及可疑阳性的涂片，应加贴有编号的标签后归档。明确阴性的涂片可不予存档。

五、病理解剖（尸检）检查程序

有下列情况之一者，应争取进行病理解剖

（1）主要疾病诊断不明；

直接死因不明；

死者生前有遗嘱捐献遗体或家属自愿将死者遗体提供解剖交医学研究者；

科学研究价值者。

病理解剖，限于教学、医疗、医学科学研究和医疗预防机构的病理科(教研室)施行。涉及医疗纠纷的尸体解剖，应依据福建省卫生厅医政处《医疗纠纷尸体解剖检验理暂行规定》程序进行。法医解剖，限于各级人民法院、人民检察院、公安局以及医学院校附设的法医科(教研室)施行。涉及猝死和烈性传染病者，病理教研室和临床病理科可在公、检、法及卫生、防疫等执法单位委托下，参与解剖。对上述部门委托送检的部分组织或器官，病理科或教研室仅作局部病理学检查，所有诊断书只报告给委托单位。

2、病理解剖申请单的填写与送达

病理解剖申请单由负责死者治疗的主治医师以上医务人员填写，其中系统解剖或局部解剖栏必须填写明确，对拟检器官处理方式亦应注写明白；对新生儿(含围生期胎儿)尸检后的尸体处理方式，应明确写出，经科室主任审阅同意并分别签字；

死者家属阅读申请单，表示同意并亲笔签字(以上两项为必须发行并完备的程序)；

怀疑烈性传染病的尸检应有卫生执法部门的委托或批准；

涉及民事纠纷的尸检应有公、检、法或卫生等执法部门的委托或批准。

以上两项尸检申请单由委托方指定单位或人员填写并经死者家属同意签字。病理解剖申请单由申请或委托单位送达病理科，交给病理科主任。病理科主任应认真阅读申请单内容，核对上述程序是否完备，有下列情况之一者，应及时作

出反应

上述程序不完备，应当拒收；

死者亲属对尸检范围及脏器的取留持保留意见，从而影响尸检进行，应当拒检；

死亡超过48h,尸体未经冷冻或固定处理，致尸体自溶或腐败而影响尸检结果，

应拒检；

与病理性死亡无关的尸检，可以拒检。

3、 病理解剖的准备工作

病理科主任应根据具体尸检目的及内容安排参与人员，对应有执法人员（如法医等）参与的尸检，应向委托单位说明，由委托单位安排有关人员参加。尸检前，应向委托单位及死者家属说明以下问题，并形成文字协议，由三方签字认可。

病理科只承担病理诊断任务，尸检结果可能发现主要疾病及直接死因，但也可能无阳性发现，或虽有病变但不能解释死因，病理只能客观地作出描述与报告；

病理解剖诊断书，只能送达申请或委托单位；涉及懂事纠纷及烈性传染病的尸检报告，只送达给执法部门；

尸检过程中必须取材，并留取部分组织或器官作为诊断及研究应用；

尸检后的遗体处理按有关方面的协议办，病理科不参与;

尸检报告的发出时间为尸检后45天，（如遇重大不可回避等因素可申请延期出报告）。

4、 病理解剖

具体操作及要求详见《规范》（三）。

解剖尸体必须经过临床医师签署死亡证明后，方可进行。病理解剖应在尸检室或病理科认可的场所进行。剖验时无关人员不得进入现场。如确有教学价值，应征得死者家属同意后,方可同时进行教学。尸检应在严肃认真气氛中进行。尸检过

程应有详细文字记录（原始记录），必要时，应现场拍照（被拍照物体，应附有尸检号标记）或摄像。上述图象资料只作存档用，凡涉及死者整体形象或面容之资料不得散布或公布。

5、 体解剖的取材、固定、制片和观察具体内容及要求详见《规范》（三）。

6、 体解剖病理诊断书

具体内容及要求详见《规范》（四）。

病理解剖诊断书不得涂改，并经复检者审阅后，由初检及复检者亲笔签字，加盖科室公章后发出。

7、 检资料的归档

尸检报告发出后，即应进行登记和全部有关材料归档。尸检中留取的剩余组织或器官在尸检报告发出2个月后，可统一清理。如事先即已知为涉及纠纷者，应保留至纠纷处理完2个月后清理；如事先已有协议者，按协议。注：本规范具体内容如与今后国家有关规定不符或抵触者，将及时及时进行修订，并以修订本为准。本规范中有关条款的具体解释，由批准本规范的部门进行

第二章病理科技技术操作规范

【规范（二）】

经典的病理学是一门形态学学科，侧重研究疾病时机体的结构性变化（病变，Lesion）,即组织、细胞的形态变化。除了肉眼观察外，借助显微镜是建立病理学诊断的核心环节，而显微镜观察的客体是切片中的形态。大量事实证明：厚薄适宜、染（显）色良好的切片，是建立正确病理诊断的前提和保证；相反，质量很差的切片或使病理诊断无法进行，或导致误诊。而切片质量取决于四大因素：第一，技术人员的敬业态度；第二，技术操作的规范化程度；第三，技术水平;

第四，设备状况。为此，应提倡奉献、严谨、求精的精神和作风，并主动反映情况，争取领导支持，改善基本设备条件。

（一） 固定的概念

应用各种方法使病理标本尽量保持其离体前状态的过程称为固定（fixation）。病理标本（样本）离体后，由于微环境的变化将发生自溶和（或）腐败，使其结构破坏。固定的目的和机制是：①使蛋白质凝固，终止或减少分解酶的作用,防止自溶，保存组织、细胞的离体前结构状态，包括保存组织或细胞的抗原性，使抗原不失活，不发生弥散。②保存组织、细胞内的蛋白质、脂肪、糖原、某些维生素及病理性蓄积物，维持病变的特异性特征。③使上述物质转为不溶解状态，防止和尽量减少制片过程中人为的溶解和丢失。④起助染作用。固定方法有：①物理学方法，如低温冷冻，干冰（dryice,即固态无水碳酸）冰冻真空脱水，石蜡渗入法。

化学方法，采用各种化学溶液作固定液，使组织细胞进入固定状态。这是国内最常用的方法。

固定应在标本离体后尽快进行，小标本可在取材后直接放入固定液内，大标本应在手术结束前或结束后迅速放入固定液内。固定液与标本的比例不得少于标本体积得5倍。有特殊要求者应事先选定相应得固定液，如欲查糖原，应选择无水乙醇作固定液等。固定得时间应适当，微小标本（如胃粘膜等）2〜4h即可，大标本应置放12~24h,但亦不要过久，以免影响抗原性，造成免疫组化操作中得困难。

（二） 用固定液及其配制固定液分单纯固定液和混合固定液。

1甲醛（formaldehyde）是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37%-40%得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）o用作固定的浓度习惯为10%福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4%。10%福尔马林渗透力强，固定均匀,

对组织收缩少。对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。

2乙醇无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可

作为脱水剂，对组织有硬化作用。

是80%一95%

浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后,仍能溶于水，因此核的着色不良。

3中性甲醛液（混合固定液）甲醛（浓）120ml，加蒸馆水880ml,磷酸二氢钠（NaH2PO4・H2O）4g,磷酸氢二纳（Na2HPO4）13go此液固定效果比单纯10%福尔马林要好。

4AF液（混合固定液）95%乙醇90ml，甲醛（浓）10mlo也有配方是95%乙醇85ml,甲醛（浓）10ml，冰醋酸5mlo此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95%乙醇脱水。

以上4种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10%福尔马林，乙醇应尽量不用。

七、常规石蜡切片操作

（一）组织洗涤

经过固定的组织一般都要洗涤（washing）,其目的是清除组织内外残留的固定剂，以免影响脱水等后续过程；防止有些固定剂在组织中发生沉淀或结晶而影响观察。洗涤时最好是从容器的底部入水，再从容器上面缓慢流出，这样2h即可,若为陈旧标本则需24h。

（-）组织脱水

1概念

为保证石蜡有可能进入组织内部，采用适当方法，将已固定和水洗过的组织中的水分彻底驱除的过程称为脱水

（dehydration）。脱水剂必须是与水在任何比例均能混合的

液体。最常用的脱水剂为乙

其它尚有正丁醇和二氧已环

以及丙酮等。

2浓度与时间

脱水用的乙醇浓度一般从70%一75%开始，然后依次80%-95%-100%,即由低浓度逐步到高浓度。脱水的时间与组织大小、厚薄有很大关系.组织厚大，脱水时间要长些；而小薄的组织脱水时间相对的可以短些。组织脱水时间在低浓度乙醇中可以长些（如70%_80%）,而在高浓度乙醇中

要短些，这是因为高浓度的乙醇渗透力不强，延长脱水时间无益，相反高浓度乙易使组织收缩、变脆，致使以后切片和观察困难。

（三）组织透明

采用既能与脱水剂（如乙

）混合，并使之被提去

（dealcoholisation），又能作为石蜡溶媒的诱导剂、使石

蜡真正渗入组织中的过程称为媒介（intermediary）。由于常用的透明剂（如二甲苯）作用之后，其折射指数与组织蛋白折射指数接近，组织显示出半透明状态，因此，通常又称此过程为透明（clearing）。但并非所有媒介过程均使组织透明。常用的透明剂为二甲苯，它易使组织收缩、变脆，故透明时间不宜长，一般1..5~2h,二节（即换2次，下同）,最好是肉眼观察，见组织呈棕黄色或暗红色透明状（象琥珀样）即可。

（四）组织浸蜡组织经媒介（透明）处理后，置入熔化的石蜡内浸渍，使石蜡分子浸透入组织中的过程称浸蜡或石蜡渗透

（infiltrating）o渗透的过程也可用火棉胶代替石蜡，称为浸胶。但其透明过程应作相应更动。浸蜡一般分2一3节,总共4~24h,浸蜡时间过短，蜡没有完全渗入组织中，组织过软，切片困难；浸蜡时间过长，造成组织硬脆，切片也困难。

组织包埋

把浸蜡的组织包在蜡里成块，使之有一定的硬度和韧度，便于在切片机上夹持切片，称之为包埋(embedding)o

1注意事项

包埋框要比组织块大，这样保证包成的蜡块组织四周都有蜡边。

胃、肠、胆囊等组织，应将能看到组织学各个层面的一面作为切面。其它组织应将切面朝下。

包埋蜡冬季用低熔点(56_58°C),夏秋季用高熔点蜡(60_62°C)。

包埋蜡最好是经多次熔化、沉淀过的蜡，这样的蜡干净、致密，利于切片。

2脱水机脱水、透明、浸蜡时间

70%乙醇lho

80%乙醇lho

95%乙醇Ilho

95%乙醇IIlho

95%乙醇IIIlho

100%乙醇Ilho

100%乙醇Illh。

二甲苯I30mino⑼二甲苯IIlh。

浸蜡Ilho

浸蜡IIIh

浸蜡III2h以上。

3手工组织脱水、透明、浸蜡时间

70%乙醇l・5h.

80%乙醇l・5h.

⑶95%乙醇从上午下班前进入直到下午上班。

100%乙醇I30min

100%乙醇II30min

（6） 二甲苯I15min

（7） 二甲苯II30~60min（肉眼观察透明即可）

⑻浸蜡过液。

手工浸蜡只有一节，故在组织透明后将沾在组织上的二甲苯尽量多去掉（一般是将组织倒在铺有数层滤纸上，再一个个拣回，或将整个脱水篮用力甩几下），再浸蜡。

（六）组织切片

1切片过程

把切片刀架上，固定紧，然后将蜡块在切片机固定器上夹紧。

先修块，左手转推进器，右手转轮盘，直到把组织全部切出,这时左手松掉推进器而持毛笔，右手旋围轮盘，蜡片切成后,右手用小镶子摄蜡片，左手用毛笔沿刀锋轻轻把蜡片分开,切面朝下把切片放入5（rc水中，摊平后用蹑子轻轻将连续蜡片分开，再用载玻片捞起，蜡片应捞在玻片的1/3处，蜡片厚度一般在3~5nmo2注意事项

切片前蜡块要冷冻，这样容易切片，特别在夏秋季一定要冷冻，但不能把刚包埋好的热蜡块冷冻，否则会造成蜡块裂痕，一夹就碎。

写号码用优质碳素墨水或用一边毛砂处理的载玻片时用铅笔写号即可。不需配制蛋白甘油。

如遇难切的蜡片时，可用与蜡块切面差不多大小的薄纸潮湿后贴在蜡块上切片，然后将附有蜡片的一面朝上放入水中漂片。

如遇易脱片组织（如血凝块、脑组织）时，可将载玻片上涂少许蛋白甘油后再捞片或用多聚赖氨酸处理过的玻片。

总是切不出完整的蜡片，或皱缩或卷片，可能是刀不快。

切出的蜡片总是皱缩，也可能是切片角度不对，慢慢调试，一旦有最佳磨刀角度和切片角度后不要随意改变。

切片厚薄不匀或空片，可能是刀未固定紧或蜡块未夹紧,也可能是切片机有问题。

烤片时间与温度有关，一般时间宁长勿短，否则会造成脱片。62°C6h以上，90°C15min以上。

连续切片放入热水漂片时，不要捞取第一、二张蜡片，因为前2张蜡片厚、组织有空洞（镜下可见）。

如遇硬脂酸石蜡处理的蜡块时，切的蜡片不能直接入热水漂片，否则蜡片会散碎而应先入冷水，然后再慢慢加热水。为了不影响切片、特殊染色及免疫组化的效果，目前，不用硬脂酸石蜡来代替二甲苯、石蜡。

（七）HE染色

1原理

HE染色也称苏木精-伊红染色，它是常规染色。苏木精是一种天然染料，它本身并不能染色，在经氧化后变成苏木红才是真正的染料，苏木对细胞核的亲和力并不强，而在媒染剂的帮助下才能较好显示细胞核，此时细胞核呈红色，只有在它可能是通过渗透或弥散作用完成染色的，因此和组织万分结合是不牢固的。它对细胞质着色。

碱性环境中，

苏木才变成蓝色。伊红Y是人工全盛染料，

2染色程序

脱蜡

二甲苯15一101115

二四苯II5~10min

100%乙醇r2min

95%乙醇r2min

自来水洗

染色

a・苏木精浸染5min

b.自来水洗

c.

1%盐酸乙醇分化数秒

d・自来水洗

e.蓝化（50°C左右温水）数分钟f・伊红浸染数秒g.自来水洗

脱水、透明、封片

95%乙醇lmin

bcdefgh

100%乙醇Ilmin

100%乙醇Ulmin

100%乙醇IIIlmin

二甲苯-石碳酸液（3:1）lmin

二甲苯Ilmin

二甲苯Ulmin

滴中性树胶，盖盖玻片

3注意事项

二甲苯脱蜡时间冬季长些，夏季可短些，为防止脱蜡不净影响染色，脱蜡时间宁长勿短。

盐酸乙相离分化时间灵活掌握，可以在切片蓝化后镜下观察。

染色后的脱水透明也很重要，若脱水不完全，切会会模糊不清，脱水的乙醇要保持纯度，切片在进入脱水乙醇前尽量把水多去掉。

若用Harris苏木精液时，染色前要先用一张纸把液体表面的结晶捞去，否则会污染切片。

在脱水透明时，二甲苯一石碳酸的作用利于透明，此步故也可省去。

HE染色虽是常规染色，但是要制出一张完美的HE切片并不是易事，如两种颜色的深浅对比、与染液的浓度、染液的新旧、染色时间有关，需每位操作者灵活运用。

4染色液的配制

Gill改良苏木精液苏木精2g，无水乙醇250ml,硫酸铝17.6g,蒸馆水750ml,

碘酸钠0・2g，冰醋酸20mlo先将苏木精溶于无水乙酸铝溶于蒸馆水，再将两液混合后加碘酸纳，最后加入冰醋酸。此配方为半氧化苏木精液，碘酸纳为氧化剂，硫酸铝为媒染剂，此液不会产生沉淀并很少有氧化膜。

沉淀酸化伊红丫乙醇液伊红丫20g?蒸馆水500ml,浓盐酸10mlo将伊红与蒸馆水混合溶解后加入浓盐酸，搅拌，过夜。过滤、滤液不要，用蒸馆水多次冲洗滤纸中的沉淀，然后将沉淀物连同滤纸一起入温箱中干燥，用95%乙醇1000ml配成饱和液。使用前取饱和液1份，95%乙醇2"3份，配成染色液。在用此液染色前最好将切片先在95%乙醇中过一下，以保护染色液。

盐酸乙醇分化液\

70%乙醇99ml加浓盐酸lmlo

八、快速石蜡切片操作

（一） 应用范围

（1） 替代冷冻切片，在没有条件制作冷冻切片的单位，用作术中诊断；

（2） 快速诊断：适用于门诊外地患者，1天可取报告。

（二） 切片制作

（1）将送检的各类组织按《规范》（一）编号登记、眼观、描述记录后，用大头针和羊皮纸包好，投入配制好的固定液烧杯内5"10min（固定液配制：95%乙醉85mL甲醛10ml，冰醋酸5ml）;若组织较厚，可在预固定后修薄，重复固定;

(2)无水乙醇、丙酮脱水35min;

(3)浸蜡5min;

常规石蜡包埋，或封固于预制好的蜡块内；

常规HE加温染色。

注意事项

(1)制作快速石蜡切片全过程过程均加温在65~72°C范围内操作，可用快速组织处理仪、或在恒温水浴锅或恒温箱内気成;

(2)替代冷冻切片可随到即做，一般在30min内完成;

若成批操作，则可根据标本的数量多少,

勺情延长时间;

制作快速石蜡切片，操作人员必须经过一段时间的训

练和摸索，在取得一定经验、技术较熟练能保证切片质量后,方可受理对外服务，以把好质量关。

九、冷冻切片操作冷冻切片的方法是一种最省时最快速的制片方法。因此主要用于临床手术中的病理诊断上。其原理很简单：冷冻使组织变硬，以代替石蜡做浸蜡。组织中的水分起着浸蜡的作用，用OCT做包埋剂，将组织固定在冷冻头上，在短时间内冻好，可以立即在冷冻机上进行切片，不需要经过脱蜡，可随时染色，节省了时间。另外，在冷冻切片的过程中，没有一个步骤使组织接触到任何有机溶剂或其他试剂能溶解或破坏组织中的脂肪、酶以及抗体。因此，冷冻切片也常用于:

显示组织中的脂质和中性脂肪；②显示酶的活性；③神经组织的染色；④免疫荧光技术。冷冻切片种类很多，以前有氯乙烷法、二氧化碳法、半导体冷冻法等。这些方法在使用过程中都存在着一定的难度和不方便，制做出的切片质量也不好，直接影响到诊断。随着医学技术的发展，以上方法已淘汰，现在使用的冷冻切片机(恒冷切片机)，从根本上解决了不利于切片的难题。能更快、更方便地切出较好的切片，而且人为的缺陷也少。冷冻切片目前最广泛应用于临床手术中的病理诊断，手术医生根据病理诊断结果决定手术范围，因此做出一些高质量的冷冻切片至关重要。

冷冻切片操作程序：

冷冻切片机要始终处于运行状态，即使在不做冷冻切片时也要开着致冷，不能时开时关，以免影响机器寿命。

手术取下的新鲜组织不要固定，因固定过的组织不利于切片，而且还会影响染色。

用OCT做包埋剂，起到支撑的作用。先将OCT标在固定头上再将组织放在OCT上，OCT不要太多，以免流到固定头外，组织表面露在OCT夕卜。

4・外固定头放在冷冻机内的速冷台上，在-25€左右，冻10min?视组织不同而时间略有差异，组织较大或脂肪组织时间可长一些，一般情况下lOmin左右即可。如果冷冻不足，则切片可呈粥糜状或切不下来；如果冷冻过分，则切片呈碎悄状或切片上呈条痕状，都得不到良好的切片。

5・高速刀的角度，固定好，切片刀要快。

6.把冻好的冻头夹到切片机上，用精调修平组织，使其暴露最大切面，将微调刻度调在5pm,放下抗卷板开始切片,得到满意切片后，打开抗卷板，将组织贴在载玻片上。载玻片要放平。动作要稳，一次完成，这样才能将切片完整的贴在载玻片上。

7・切片晾干后用95%乙醇固定10s，水洗后进行常规染

色。

8・冷冻切片完成后取下冻头组织，固定后做常规切片。将冷冻机内的组织碎屑清扫干净，定期打开紫外线消毒。

第三章病理解剖及尸检规范【规范（三）】

（一）病理解剖的方法和记录

1.肉眼观察与记录

正确的肉眼观察（识别）和描述送检标本的形态是确立病理诊断的重要环节之一，病理医师必须参加此项工作。观察标本首先要借助解剖学知识判定是何器官或组织，然后再根据该器官或组织的形态特点依序观察。一般要注意标本的大小（以mm、cm记录，有时可用拟物化比较，如花生米大、鸽蛋大）、形状、表面和切面的颜色、质地以及病变部位、形态特点和病变与周围组织的关系。描述应先描述主要病变，后描述次要病变。现将常见器官组织的观察与描述举例如

下:

（1）胃.肠及肝.胆

胃粘膜活检标本的块数及体积大小；标本的色泽、质地以及有无水肿、坏死；如同时送检不同部位的几件标本，应分别编写小序号。

胃溃疡沿大弯剪开标本，如病变在大弯，则沿小弯剪开；识别并记录切除标本的手术类型，大弯及小弯的长度以及十二指肠长度、直径或周径；观察溃疡的数目.位置、大小、外形以及其边缘粘膜皱嬖是否集中，切面溃疡深度，溃疡底部有无瘢痕，溃疡边缘的粘膜肌层和肌层是否粘合以及浆膜情况；如影像学诊断为胃溃疡，但肉眼检查未发现溃疡，应与外科联系了解是否为溃疡旷置术；非溃疡区，尤其是边缘粘膜形态，有无萎缩、肥大、水肿、糜烂和出血。

胃癌记录切除标本手术类型，大小弯长度及十二指肠长度直径或周径；沿大弯剪开标本，解剖胃区淋巴结并移开大网膜，如同时行脾切除，应测量脾大小并解剖脾门淋巴结;

观察肿瘤的位置、大小、外形及边缘粘膜形态，切面浸润深度、浆膜及大网膜有无累及，十二指肠、食管是否累及，两端切缘与肿瘤的距离，有无累及邻近器官；非肿瘤区粘膜形态，有无糜烂、溃疡、疣状突起、息肉等病变。

（2）结肠

非肿瘤性病变识别并记录切除标本的解剖部位，肠管长度，扩张和狭窄肠管的直径及肠系膜体积；肠粘膜的病变、范围，有无溃疡、溃疡形态及其深度，有无息肉样增生、出血；肠壁有无局限性或弥漫性增厚、萎缩，有无纤维化、坏死、穿孔及痿管；浆膜有无纤维素性渗出、脓苔及与肠系膜等粘连及可疑结节状病灶；憩室部位，数量、大小、与结肠带的部位关系，内容物及其性状，有无炎症、出血或穿孔。

息肉及腺瘤息肉或腺瘤的部位及数目；息肉或腺瘤的体积，其头部的直径和蒂的长度（多个息肉或腺瘤，至少应测量最大及最小者）；息肉或腺瘤有无蒂、溃疡，表面形状,切面有无囊肿及蒂基底部情况。

结肠癌手术术式，切除标本部位，肠管长度及肠系膜体积；观察肿瘤大小、形态，浸润肠管周径及范围，累及肠壁深度，浆膜有无浸润、有无出血、坏死及卫星结节或侵犯血管与邻近器官；分别测量不同部位肿瘤与每一切缘的距离；如结肠癌合并息肉、溃疡等其它病变时，应根据病变的正面观绘制草图，并对每个病灶编号分别描述；记录各组淋巴结数目，最大及最小淋巴结直径及淋巴结眼观有无累及等情况。

（3）肝及胆囊

肝切取活检及肝肿瘤分辨标本切取类别与部位（肝小块切除、部分切除、肝叶或半肝切除），测量标本体积、重量;观察表面有无炎性渗出、纤维粘连、不规则隆起或结节形成（结节大小、色泽），包膜有无紧张、皱缩、增厚，有无质地坚实或囊变区；观察切面肝小叶结构是否清晰，有无淤胆、胆管扩张及结石，有无慢性淤血（槟榔肝），有无结节性病变，如有，应注意其大小、数目、色泽、质地、境界、与周围组织关系以及与肝切缘距离；有无脓肿，门静脉与肝静内

有无血栓或瘤栓。

②胆囊切除标本

测量胆囊长度与最大直径；切开胆囊（沿

胆囊纵轴自底至胆囊颈），观察粘膜色泽、外形，有无增生、息肉；囊壁是否增厚，有无出血；浆膜有无纤维粘连或纤维素性渗出；有无胆汁，胆汁容积、色泽与性状；有无结石,结石数目、形态、大小，切面色泽与外形，结石类型；如为肿瘤，应注意其部位、离胆囊底及颈的距离、大小、形状、浆膜是否累及。

（4）子宫颈、子宫体及卵巢

A、子宫颈

定位送检标本（如3点、6点、9点、及12点）应分别观察描述其形态、大小、色泽。由于标本小，一般不作剖面检查。

子宫颈切取体积较大标本（如前唇或后唇）应观察有无粘膜上皮存在，粘膜上皮有无糜烂、溃疡及不规则增厚或形成息肉；有无肿瘤和囊肿。

③子宫颈锥形切除标本

应记录标本大小（包括直径、

度）、外形；观察子宫颈外口、颈和及移行区的色泽、质地、糜烂、撕裂、不规则增生、息肉、溃疡、肿块（大小、形状、部位及浸润深度）、囊肿及原做过活检的部位。

子宫颈癌根治手术标本观察子宫颈：粘膜上皮色泽，

有无不规则增生、糜烂、撕裂、肿瘤大体类型、大小、部位

以及浸润深度,

囊肿及曾做过活检的部位;

观察子宫体:

膜、肌壁、浆膜；如标本带有输卵管和卵巢，应观察输卵管长度及最大管径、浆膜、管壁、管腔以及粘膜与伞端；卵巢大小、色泽、光滑度以及有无结节或囊肿，切面皮髓质和卵

巢门特征以及有无囊肿、黄体、钙化和出血；子宫旁组织;

淋巴结:

数量、

最大和最小淋巴结直径

B、子宫体

刮宫活检的子宫内膜标本测量标本总体积；观察标本色泽、质地，血块与标本的比例以及有无坏死与绒毛（注意绒毛的形态，尤其要注意有无水泡状胎块样绒毛），有无孕囊和大而坚实的组织。

子宫切除标本识别并记录子宫切除术的类型：包括全切除子宫、子宫癌根治术；测量子宫大小，并从子宫颈经两侧壁至子宫角剪开子宫或作Y形剪开；观察子宫外形、浆膜（有无粘连、凸起肿块）、肌壁（有无增厚、结节及出血坏死）、子宫内膜（有无增厚、息肉、囊肿、出血及坏死）及子宫颈（外口、移行区及颈管改变）；如有肌瘤，应观察肌瘤的数量、部位（内膜下、肌壁间、浆膜下）、大小、有无蒂以及继发病变（出血、坏死、钙化）。

C、卵巢

测量大小，观察卵巢被膜有无增厚、粘连、破裂和出血;

切面皮髓质和卵巢门特征，有无囊肿（大小、内容物）、黄体、钙化和出血。

如有病变，应描述病变大小、特征与卵巢门及残留卵巢的关系。

如为肿瘤，囊性肿瘤应观察大小、囊内壁是否光滑，内容物的形态，有无乳头状突起，新生物和出血；实性肿瘤则应观察大小、开头、部位和色泽，还应注意肿瘤与卵巢的关系，以及有无水肿、出血、钙化、囊性变和坏死等继发病变。

⑸乳腺

A、乳腺切取活检及良性病变

测量送检标本大小，观察色泽，触扪标本硬度。

切面观察肿块大小、色泽、境界、硬度以及出血、坏死、钙化等继发性病变；如有囊肿应观察囊肿大小、数目、内容物及囊壁厚度；如为导管内乳头状肿瘤，应观察其导管大小,乳头状瘤的形态特征。

B、乳腺癌根治切除标本

记录乳腺切除标本类型（如扩大根治、根治、改良式根治、单纯乳腺切除、皮下乳腺切除标本等），分清乳腺的上下左右方位，确定肿块所在部位（通常将乳腺分为内上、内下、外上、外下、正中五区）。

注意皮肤有无隆起或溃疡、有无橘皮样外观或湿疹样改变，乳头是否内陷，挤压有无分泌物溢出；切除标本内是否包含胸大肌、胸小肌筋膜、腋窝脂肪淋巴组织、胸壁组织。

测量标本体积及皮瓣面积（长径及与长径垂直的横径）。

用手触摸乳腺各部，注意有无硬结或囊肿区，确定肿块位置,记录肿块离乳头距离及其所在象限内的几点种处。

在乳头与肿块正中部的连线作一切面然后，在两侧面每赣r2cm作多个平行切面；观察肿块大小、形状、色泽、关系；记录病灶与标本切缘的距离。

硬度以及有无出血、坏死、钙化;

与皮肤、肌肉、

盘子膜的

如有淋巴结，记录每群淋巴结（乳内淋巴结、腋窝淋巴结、锁骨下淋巴结）的数目与最大及最小淋巴结大小（最大径长度），如肉眼观察有明显肿瘤转移的淋巴结，应记录部位、大小、及数目。

（6）甲状腺

观察和描述甲状腺切除标本的手术类型（单纯肿瘤切取、肿瘤及侧叶切除或亚全切除），测量标本大小并对切除标本定位（如腺叶上极、下极、左右侧叶、峡部），检查有无甲状旁腺。

在标本最大直径处作切面（标本较大时应每隔5mm作平行切面），观察甲状腺的被膜、腺体实质，注意有无结节,其大小、数目，有无纤维化、囊性变、钙化和出血坏死，如结节有包膜，应观察包膜是否完整，有无浸润包膜或穿破包膜向腺体或穿过被膜向周围组织侵犯。

对有包膜的肿瘤，应在包膜与甲状腺交界处多点取材。当发现有微小瘢痕样或白色结节区时，应在该处取材，以避免漏诊。

（7）骨及软组织

结构致密，灰白色，有可能是肿瘤组色泽及有无钙化、坏死、囊性变均应

碎骨或小块组织上记录标本数目和总体积，辨认是碎骨还是软骨，致密骨还是疏松骨，有无骨髓或软组织，有无死骨片及坏死组织或炎性肉芽组织；软组织呈膜状的要辨认是否为滑膜，如呈块状，织，对送检组织质地、描述。

记录截肢手术类型肢体侧别及切除肢

骨肿瘤截肢标本体的长度与周径（包括肿瘤部位的周径）；记录曾做过活检的部位和大小；记录肿瘤的特征，剥离皮肢，从肿瘤中央部病变骨纵轴平面锯开，观察肿瘤部位（骨、干聽端、骷端、骨髓腔），有无骨皮质或骨膜被肿瘤掀起，有无反应性骨质增生，肿瘤是否侵犯关节软骨及关节腔，是否穿过骷线，是否累及软组织；观察肿块大小、形态、色泽、质地及边界，切面观察有无成骨、软骨、纤维、粘液样变及出血、坏死和囊性变，测量肿瘤与骨切缘的距离；肿瘤远处骨有无卫星结节，非肿瘤区肢体的皮肤、皮下脂肪、肌肉，大血管、神经及关节有无异常；如有淋巴结，应记录最大与最小淋巴结的直径及数目和肉眼有无转移。

软组织截肢标本同骨肿瘤截肢标本；于肿瘤部位切开皮肤分离周围组织观察原发部位（即位于脂肪、肌肉间隙或盘子膜）以及有无累及周围软组织及骨膜、骨、关节、血管和神经；观察肿瘤大小、形态、色泽、边界、包膜，是膨胀性或浸润性生长，质地和有无出血、坏死、囊性变，有无粘液变性、钙化、软骨和骨；测量肿瘤距标本切缘的最近距离,观察肢体剩余部分有无异常；如有淋巴结，应记录数目，测量最大的最小淋巴结直径并观察其切面有无肿瘤累及。

取材

(1)定义取材(sampling)是抽取样本(samplesorspecimens)备检验，或提供检查样品的过程。Sampling在统计学中称为抽样，意为从总体中抽选出可以反映总体的调查部分，其抽样过程是通过随机化的处理，目的是使样本具代表性。病理学中的取材(sampling)指自患病部位有针对性地切取备病理组织学检查的小块组织(tissueblocks,specimens)的过程，目的是通过对最少"样本”的检查识别所患的疾病。与统计学抽样一样，组织块必须具备代表性；与统计学抽样不同的是，病理学取材是有高度针对性的。原因是病变的总体统计学中的总体不同，前者已高度局限，当病灶孤立而小时，被检的标本就是病变的总体，当病变不大时，适当数量的样本几乎就可能包括了该例病变的总体。在日常工作中，就一个具体病例而言，即使病变范围很大，其治疗所需的仅是能判断疾病种类性质及范围等的信息，无须全部切取检查。这与科研情况有别。

(2)组织块应具备的条件

疾病本质的代表性即能反映所患疾病的病理特征；怀疑感染性病变，还应包括病原聚集万分。

组织学的代表性组织块内应饮食有非病变的组织学成分(病变区+非病变区)，便于识别及作出组织学定位，提供组织学、组织化学、免疫组化的“自身对照”。

疾病范围的代表性根据病变的性质(炎症、肿瘤等)，在眼观可疑的多个病灶及病灶周边取材，可准确判断病变的真实范围(例如小肝癌面积的判断，肿瘤或炎症累及的深度的判断等等)。

病变生物学行为的代表性对有包膜的肿瘤，或有被膜器官内的肿瘤，常在跨包膜或被膜处取材［病变+包(被)膜+正常（临近）组织］。这种取材，对判断那些不能靠组织细胞形态学而必须靠生物学行为，即有浸润、穿破包（被）膜侵入包膜内血管等，才能判断良恶性的肿瘤，尤为重要。

病变发展过程的代表性组织内应包含病变区与非病变区以及两者间的移行区，以有助于观察癌前变化，如恶性黑色素瘤的上皮内异型增生痣dysplasticnevi、癌旁的非典型性增生、原位癌以及微小浸润，对确定原发肿瘤排队转移有很高的价值。

手术范围合适程度的代表性指自肿块或手术切除大标本切缘的取材，合理和正确的取材，可以反映浸润的范围，证实手术范围是否合适。在有另送检的标本如淋巴结、网膜或胸脑膜结节时，应单独取材，它可能反映转移的范围。

（3）决定取材（组织块）数量的原则

组织块是病理医师获取病变信息的主要信息源（另一些信息来自临床及巨检），是获取组织病理学（包括特染、免疫组化、电镜观察、病原学检查）的唯一信息源。因此，取材的数量应以保存具体病例的更多的有代表性的信息为依据，而很难做到千人一标准，百病一标准。它们应包括：

——病变特征区；

——病变与非病变交界区；

——主要病变以外的卫星病变、散在病变区；

一一切除的大标本的深部及四周切缘区；——提示转移（肿瘤）扩散（炎症）的病组织，如淋巴结、网膜、脑膜、胸膜等等。取材应争取一次取齐。因为：①取材可破坏标本原有的解剖学关系，给第二次取材（补充取材）定位造成困难；②由于多数病理科无取材后更换或添加固定液的规定，第一次取过材的标本可能会干涸或自溶，或组织内有福尔马林色素沉着等等，使第二次取材的样本不理想。

但由于取材者的经验不足、眼观识别病变的水平不高、或病

变不明显，因而在日常工作中补充取材是经常发生的，甚至也是正常的。由于送检标本一般在报告发出后2击即被清除，因此，取材的组织块将是以后再研究时仅存组织学信息源。从这个角度看，取材不宜少。对小块组织原则上应全部选为组织块保存。然而，对于取材的最少块数还是可因病变标本不同而作出不同的规定。

（4）活检一一切取标本的取材只切取病变的一小部分组织块，称为切取标本。

①切取标本中大多数小标本是由临取医师切取后送检病理医师一般仅对其作眼观观察和修切。

——体积＜2cmx1.5cmx0.3cm,原则上全取。但可视其厚度（＞0.5cm）再做剖面切开，使组织块厚度保持在2mm。可大致分为厂2个l・5cmxi・5cinx0・2cin的组织片（全包）。

——体积＞2cmx2cmx0.5cm,如病变均一，可先作最大径切

开，视厚度再啬剖

按每块1.5cmx1.5cmx0.2cm的要

求取2"3个组织片（全包）。如病变不均匀，应分别自不同

变化之剖面切取2~5个组织片（全包）。

体积大于4cmx4cmxlcm,

可先做最大蹭剖

巨检，

视标本厚度分别做平行术页状切开（每隔0・5cni），标本三维相似者，也可做与厚剖面垂直剖面切开。病变均一者，蹭取一块，周边取4块（上下左右），总数在5块左右。病变不均一者，应在不同病灶剖面取材，总数在5~6块左右。②送检的息肉样物——较小者，正中切开，切取2块，全包，蒂部应摆正，原则上应连续。

长度＞2cm者，正中切开后，横断为2,一块为息肉上部，一块包括息肉下部+蒂部+粘膜的组织块。

多个息肉，应分别取材，分别编号。

送检物为碎组织（子宫内膜、宫腔刮出物等）

——将碎组织平铺成3mm厚的正方或长方形，测量体积。

选取其中灰白、浅橙或杂色的实性区作组织块；有膜状物者宜单独包；有绒毛或或小水泡者宜单独包；怀疑绒癌或宫外孕者，血块样物也应选一小块。

按总量为1.5cmx1.5cmx0.2cm的倍数分成若干“组织块”。

送检为排出物者，少量的全包，大者选无明显坏死、粘液区包。

宫颈活切、原则上全部取材，单块小组织厚度＞5mni者，

正中切开（包在一个盒内），否则不作修切，但注意包埋面。

内镜取材，全取（记录块数）分号。

（5）活检切除标本的取材切除标本有2个含义：

a•病灶全部及其周围一圈“正常”组织。病变器官的病变全部及临近组织

b.病变全部及大部分器官成分或患病的整个器官病变器官的病变全部及临近器官的部分这种取材由病理医师执行。其操作可参照以下举例进行。

3、非肿瘤器官切除标本取材

①胃溃疡切除标本从溃疡中心，取2~4块带有周围胃组织的组织块，其中包括胃小弯组织，或沿溃疡作一长条切块,包括溃疡及其两端胃组织，然后分成3~4小块，每块宜包括胃壁全层；若胃内再无其它病变，一般不再多取材，如有其它病变，应另取材；如有淋巴结应根据部位分别取材。

胆囊切除标本在胆囊底部及体部选异常区域各取1块（从粘膜至浆膜全层）；如胆囊管和淋巴结有异常，则加取1块。

阑尾切除标本近1/3靠近切缘处横断面取1块；远1/3处纵切面取1块；如有穿孔、肿瘤及其他病变，则相应多取几块；阑尾粘液囊肿标本应排除恶性可能，可作多个

横断面寻找有无浸润，并应多取材；如行其他手术（如子宫切除）时切除的阑尾，则在尖端取1块，体部取2块；如系恶性肿瘤应取有关部位淋巴结。

子宫切除标本子宫颈前、后壁各取组织1块。如有息肉，则另取1块；子宫体紧靠宫底处取2块，厚度应包括内膜、肌层及浆膜。如有内膜息肉，则另取1块；如为肌瘤，每个肌瘤取厂2块，注意取肉眼病变区（即软化区、肉样区、坏死或囊变区）。

4、肿瘤根治手术切除标本

①胃癌切除标本沿大弯切开胃壁，从粘膜面沿胃长轴经病变最大径，从贲门至幽门取一长条组织，宽0.4_0.5cm,厚度应包括胃壁全层，绘图后分切数块，其中厂2块应带有周围胃组织；在胃体中央非肿瘤粘膜区取厂2块；如肿瘤取材时未包括大、小弯在内，则应沿大弯与小弯各取1块;近、远侧切缘各取厂2块；如切除脾或部分胰，应另取材;淋巴结按分组取材。每组淋巴结数目及最大、最小淋巴结大门淋巴结（包括贲门左和贲门右组）；b、小弯；c、幽门下组；d、大弯；e、幽门上组；早期胃癌（指癌组织限于粘膜层和粘膜下层，不论是否有淋巴结转移）从粘膜面通过癌灶最大径，自贲门端至幽门端取一长条组织，以0.5cm左右厚度，将癌灶连续取材，癌周取2cm编号标记。另一种取材方法称席卷法，将标本铺平固定，沿小弯平行方向，将粘膜每0.5cm割一长条，剥下的粘膜按同一方向卷起包埋制片。

小、切面是否转移，应分别编号取材。淋巴结分组:

a、贲

②子宫颈癌根治手术切除标本子宫颈癌病变明显者，可自肿瘤中央及肿瘤与正常组织交界处各取1块，如肿瘤体积较大或有特殊病变，可酌情多取几块；如子宫颈肌层深部已有癌肿浸润时，必须切取子宫颈全层，直至子宫颈旁及前后凹部的结缔组织；如癌肿累及子宫内膜，则取材必须延伸至病灶周围正常子宫内膜，但不需要取子宫壁的全层；如癌种有多中心病灶或转移时，应多点取材；手术标本切缘，即子宫颈阴道部或阴道下切缘、子宫两侧壁及前后壁切缘各取组织1块；取子宫旁左右软组织和1块；淋巴结按解剖分群取材；卵巢和输卵管按该器官要求取材。

乳腺癌根治手术切除标本确定标本方位：以腋窝脂肪作为外侧标记，以肌肉的手术切面作为上面的标记，用防水笔通过乳头画一垂直线和水平线，把乳腺分为四个象限，外上、外下、内上、内下；肿瘤：至少选取3块，肿瘤与皮肤交界处，肿瘤与乳腺交界处、肿瘤基底与肌盘子膜或肌肉处各取1块；每个象限各取1块；乳头：在乳头中央及其下方组织纵切取1块；胸大肌：在异常区取1块，如无异常区则在离肿瘤最近处取1块；淋巴结：所有查到的淋巴结均应取材，小的完全取格，直径大于0.5cm的切开取材,如肉眼见腋窝脂肪受累，则应在代表性区域取材，并按以下顺序标记：腋窝下淋巴结、腋窝中淋巴结、腋窝上淋巴结，胸肌间淋巴结（Rotter淋巴结），如无此淋巴结，取该部脂肪组织。

（二）病理尸体解剖的方法和记录

1拍照

裸露死者遗体后，在醒目部位放置尸检编号，进行全身及重要病变部位拍照。（以下观察、操作，由解剖者进行，同时口述观察结果。记录者随即准确、完整记录于记录单上。对所有病变，均应测量其数值（mm,cm）,避免使用参照物类比描述，如黄豆大、枣大等）。

2体表检查

一般状态：死者的年龄、性别、身长、体重。发育及营养状况。全身皮肤的色泽，有无出血（淤点或淤斑）、水肿、黄疸、有无外伤等。死后现象：(尸体现象)。

尸冷：死亡后，尸体体温一般即逐渐下降。有衣物覆盖的成人尸体，气温在1「15°C的环境中，须经28h,尸温始下隆至与周围温度相同。如为冷藏尸体，则免去此项。

尸僵：死后各部肌肉渐成僵硬，称为尸僵。一般于死后2h自下颌开始，渐延及颈部、躯干、上肢及下肢，持续24h以上，以后逐渐消失，顺序同上。猝死或死前有痉挛者,尸僵出现较早，程度较强，持续时间较长；老弱久病者，则尸僵程度较弱，持续时间较短。气温较高时尸僵出现较早，消失出较快；寒冷时则相反。

尸班：死后血管内血液逐渐向尸体下垂部沉降，于皮肤显出不规则的紫红色斑纹或斑块，即为尸斑。一般在死后2~4h出现，但也有死后很快发生者。开始时，压之即褪以,12h后尸斑即成固定状态，压之不易褪色。24h后则压之不褪。尸斑通常为暗紫红色，时间愈长，颜色愈深。死于一氧化碳中毒及氧化物中毒者，尸斑呈樱桃红色。

角膜混浊：死后尸体的组织蛋白质受细菌的作用而分解，称为尸体腐败。表现为腹壁皮肤变绿、变软、发生所泡、水泡，甚至全身膨胀、舌眼突出、口唇、面部肿胀，呈所谓

“巨人观”。尸体腐败由体内腐败菌引起。通常在死后一昼夜末或数日才明显出现。出现的快慢与温度、湿度、空气是否流通等有关。内脏亦可形成多数大气泡，称为泡沫器官。体表各部状态：从头部至四肢逐部检查。头皮及头发状况(如头皮有外伤、血肿、肿块；头发颜色、长度、密度，有无脱发秃顶等)；两侧瞳孔形状、直径(mni)是否等大；结合膜是否苍白，有无充血、出血；巩膜有无黄疸，眼睑有无水肿;

鼻腔及外耳道有无内容物流出；口腔有无液体流出，牙齿有无脱落，口唇粘膜是否变青紫色；腮腺、甲状腺及颈部淋巴结是否肿大；胸廓平坦或隆起，左右是否对称；腹壁是否膨隆，有无手术切口及切口瘢痕（测量其长度）、人工肛门等;背部及紙部有无褥疮；外生殖器有无泌物及疤痕；腹股沟淋巴结是否肿大；四肢有无损伤或疤痕；体表有无畸形等。3颈部器官及胸、腹腔的剖检胸、腹腔的切开方法常用的有“T”形及T”字形切开法。

“T”形切开法其横切线自左肩峰起，沿锁骨、胸骨柄达于右肩峰；直切线自胸骨柄起，沿正中线，绕过脐左侧，止于耻骨联合处。T”字形切开以下颌骨下方，大约相当于甲状软骨处为起点，沿前正中线切开，切线绕过脐左侧，止于耻骨联合处。颈部器官的剖检：将置于项部的木枕向背部移动,使颈部垫高，以利操作。如用“T”形切开法，沿横切线从锁骨、胸骨柄起，向上将颈前半部的皮肤，连同皮下组织剥离。刀口朝下，以免割穿皮肤；左手提起皮瓣相助。待颈前部皮肤及皮下组织与颈部器官和肌肉分离完毕，沿下颌骨内侧，从正中分别向左右将口腔底部肌肉与下颌骨分离。然后从下颌骨分离。然后从下颌骨下将舌等器官向下拉出，再把软腭切断，在尽量高的位置切断两侧颈外及颈内动脉，然后向下沿颈椎前将软组织剥离，将颈部各器官组织剖出（剥离时注意连带将两侧扁桃体完整剥下，一并取出）。如用T”字形切开法，则从

颈部正中切线向两侧及上方将颈前半部的皮肤及皮下组织剥离（其余同“T”形切开法）。胸廓的暴露，在切线完成后，将胸廓皮肤，连同皮下组织、胸大肌等自正中线向两侧剥离至腋前线。剥离时可用左手紧握皮肤和肌肉，手背面对皮肤用力向上外翻起，右手执刀，将胸廓外组织尽量切除，充分暴露肋骨。腹腔的切开，可在皮肤、皮下脂肪及肌肉切开后，在腹膜上方作一小切口，注意有无液体或气体排出。继以左手二指伸入切口，稍向上提，右手持剪沿二指间剪开腹膜，以避免伤及腹腔器官。继则切断连于胸壁下缘的肌肉,扩大暴露腹腔。观察腹壁皮下脂肪层的厚度，肌肉的色泽等。腹腔：检查大网膜及腹腔各器官的位置是否正常，肝脏是否肿大，其前缘在锁骨中线处是否超过肋弓。脾脏是否肿大，伸出肋弓下多少厘米。胃、肠有无胀气。各器官之间有无粘连。腹腔内有无过多的液体（腹水），记录其性状及量。如有出血，注意寻找器官或大血管破裂处。如有腹膜炎，检查有无器官穿孔。记录横膈高度，以锁骨中线为标准，正常时右侧达第4肋骨（或肋间），左侧达第5肋骨。胸腔：如疑有气胸，可于胸壁皮肤切开后，将皮肤提起呈袋形，注水少许，然后用尖刀在水面下穿刺胸廓，如有气胸即见气泡从水底冒出。切开胸廓时，先用软骨刀自第二肋骨开始切断两侧肋软骨，切线距肋软骨与肋骨交界处0.5_lcm为宜。继用手术刀将胸锁关节切断（避免切破锁骨下动脉、静脉，防止血液流入胸腔），并用肋骨剪剪断两侧第一肋骨，然后将肋弓提起，紧贴胸骨及肋软骨后面，分离膈肌和纵隔，最后将胸骨（连同肋软骨）摘除，暴露胸腔。检查胸腔有无积液,记录其量及性状。肺膜与胸壁有无粘连。将胸腺剥离取出，记录其脂肪化程度及重量。剪开心包，记录心包腔内液体量和性状（正常约有5_10ml,淡黄色澄清的液体）。怀疑有败血症时，应在无菌操作下，抽取心血5ml,置入消毒的试管内，送细菌室培养。疑有空气栓塞者，应在原位向心包注入少量水，在水平面下刺穿心室，观察有无气泡逸出。

4胸腔器官一般采用联合取出法，以保持各器官及管道原来的关系，但也可将器官分别取出。在颈部器官剥离后，切断无名动脉及左锁骨下动脉，然后将气管连同心、肺一并拉出胸

腔，一般可自横膈以上将食管、胸主动脉等切断，取出心肺。怀疑有肺动脉栓塞者，应于原位剪开肺动脉探查其主干及左右分支，直达肺门。若主动脉有病理变化（如梅素性主动脉炎、主动脉粥样硬化症等）确需保存整个主动脉时，须将心脏及主动脉与肺分离，待腹腔各器官取出后，再将心脏连同主动脉整个摘出。肺的单独取出，可将肺提出胸腔，靠在胸廓肋软骨断面边缘上，然后角解剖刀在肺门处将主支气管和肺动脉切断，即可将肺取出。称其重量，并记录之。

（1）心脏：心脏的剖检一般是在肺未分离之前进行（把心肺平放在垫板上，左手提起心脏，然后进行剖切）。但如估计无主动脉病变及先天性心脏病等时，可将心脏与肺分离后进行剖检。即提起心脏剪断肺静脉，继在心包壁层与脏层转折处剪断主动脉等，即可将心脏取出。

心脏的剪开，一般顺血流方向从下腔静脉将右心房剪开（如有心脏疾患需检查窦房结时，必须保留上腔静脉搏及其入口处1厘米内的心房组织），然后用肠剪沿右心室右缘（锐缘）剪至心尖部，再从心尖部，距心室中隔约1厘米将右心室前壁及肺动脉剪开，检查右心各部分；左心，从左右肺静脉口间剪开左心房，检查二尖瓣口有无狭窄（正常成人可容二指通过），再沿左心室左缘（钝缘）剪至心尖部，从心尖部沿心室中隔左缘向上剪开左心室前壁，及至靠近肺动脉根时，尽量避免剪断左冠状动脉前降支，切线宜稍向左偏，然后剪断左冠状动脉回旋支，在左冠状动脉主干左缘，即在肺动脉干与左心耳之间剪开主动脉。检查并记录心脏的重量（正常成人约270g）.大小（约如尸体右拳），左、右心室肌壁的厚度（一般在两侧切缘的中点测量，肉柱及心外膜下脂肪组织均须除外，正常右心室肌壁厚约0.3_0.4c叫左心室厚约0.9cm）。疑有肺心病时，须在距肺动脉瓣游离缘下2~2.5cm处测量右心室肌壁厚度。检查各瓣膜有无增厚或赘生物，有无缺损、粘连、缩短等。腱索有无变粗、缩短。

测量各瓣口周长（正常成人三尖瓣口周长12cm、肺动脉瓣口8.5cm、二尖瓣口10.4cm、主动脉瓣口7.7cm）o检查心腔有无扩张，心肌有无色泽改变、变软、梗死或瘢痕等，有无先天性畸形（卵圆孔、动脉导管是否开放，房间隔、室间隔有无缺损等）。冠状动脉：检查左、右冠状动脉口有无狭窄或闭塞。冠状动脉的检查一般在心脏固定以后进行，方法是沿左、右冠状动脉走向每2_3mm作横切面（注意切面与动脉中轴垂直），观察每一切面有无动脉粥样硬化斑块及血栓，并记录之（左冠状动脉前降支在心室间隔上端开始作切面，回旋支在左心耳下方的冠状沟找到其断面，右冠状动脉可在右心切张的房、室交界处找到其断面。

主动脉：检查内膜有无动脉粥样硬化斑块或其他变化（若腹主动脉没有同时取出，须俟腹腔各器官取出后，剪开其前壁,基于两骼动脉，以便观察）。

（2）肺：先检查两肺表面胸膜有无增厚，有无炎性渗出物,触摸各肺叶有无实变病灶或肿块。剪开肺动脉各大支，观察腔内有无血栓质块。剪开各叶支气管，观察其管腔有无扩张,有无粘液阻塞或肿块。肺的切开常用脏器刀沿其长轴自外侧凸缘向肺门作一水平切面。观察肺切面的颜色，有无病灶，轻压之有无血液或含气泡的血水流出等。肺门淋巴结是否肿大。

慢性肺心病时，需将心、肺完整取出固定，以保持其外形和病变特征。先用蹑子经腔静脉将右心腔内凝血块取出，然后用止血钳夹紧上、下腔静脉断端，以注射器刺入肺动脉干，注入固定液（10%福尔马林溶液），待右心室和肺动脉圆锥完全膨隆，近似生前状态时，结扎肺动脉干；继将心、肺标本浸泡于固定液内。另在一定高处安装灌注瓶，内盛固定液，并装有带玻璃接管的橡皮管。灌注时将玻璃接管插入喉头后以线结扎。灌注液面与浸泡液面的距离以25~30cm为宜（低压灌注），待肺膜展平后，停止灌注，夹闭气管以防固定液外流。标本通常固定7天，如前法将心、肺分离。将肺平放在垫板上，以脏器刀作额状切面，将肺切成厚约2cm的肺片，然后观察病变，并记录。

5颈部器官

消化道：胸有成竹有无肿块或溃疡；两侧扁桃体是否肿大，其表面有无炎性渗出物；食管粘膜面有无溃疡及肿物,有无静脉曲张等。

呼吸道：喉头有无水肿或炎性渗出物；气管及主支气管有无内容物或炎性渗出物(正常时粘膜灰红色而平滑)。

甲状腺：是否肿大，有无结节和肿块；切面，有无囊腔、肿块、瘢痕灶。

其他：颈部淋巴结是否肿大。

6腹腔器官

(1)脾脏：大小(正常13cmx8.5cmx3.5cm)、重量(正常约150g)o包膜是否光滑(正常呈灰紫色)，有无增厚。切脾时可将脾放在垫板上，膈面向上，然后沿长轴向脾门作一切面。记录其色泽、表面及切面性状，脾小结能否看到,插髓用刀背能否刮下，有无梗死灶等。

(2)肠及肠系膜：先将大网膜及横结肠往上提起，即可见到空肠与十二指肠交界处(相当于屈氏韧带处)。用肠钳夹紧交界处然后切断空肠。继以左手提空肠，右手以长刃刀沿肠系膜附着处将小肠与肠系膜分离(愈近小肠壁愈佳)。再将大肠与腹腔后其他软组织分离至乙状结肠与直肠交界处，作双层结扎，在结扎间切断。然后以肠剪沿肠系膜附着线剪开小肠，大肠可沿游离结肠带剪开。检查肠腔内容、粘膜及肠壁，观察有无病变。必要时可用流水轻轻洗去肠内容物，以利观察。若疑为特殊病原感染，应在剪开肠壁前，于无菌操作下，抽取内容物，置消毒试管内送培养。

胆囊和胆管：通常将胃、十二指肠，连同胰、肝脏等一并取出。在剖割之前宜先检查下腔静脉有无血栓。左手提起肠系膜，用剪刀将肠系膜、十二指肠及胰等与腹膜后的软组织分离，继而往上剪断腹腔动脉，使整个肝脏变得活动。然后剪剥离肝右叶后面的软组织（注意勿损伤右侧肾上腺，可先将其与肝分离摘出）。再将膈肌与肝相连部分剪去，肝横膈面的镰状韧带也剪去。然后将上述各器官一并取出。将上述器官仿照原来位置放在垫板上，将肝前缘向上翻起，然后将十二指肠前壁剪开，暴露十二指肠乳头（Vater壶腹开口处），挤压胆囊，检查胆道通畅情况（有无胆汗从十二指肠乳头处流出，若有称排胆试验阳性）。疑有胆管阻塞时，应仔细分离肝门部软组织暴露总胆管及左、右肝管。观察胆管有无扩张，剪开总胆管及肝管，检查管壁是否增厚，管腔有无扩张或阻塞，腔内有无结石、蛔虫、华支睾吸虫或肿瘤。剪开胆囊，观察囊壁是否增厚，粘膜是否变粗（正常形成网状的纤细皱嬖），内容物性状，腔内有无结石（记录其数量、形状、色泽及切面性状）等。检查完毕，即可用剪将其与肝脏分离，并在肝门处将肝十二指肠韧带连同其中的总胆管、门静脉及肝动脉

剪断。

（4） 胃和十二指肠：自十二指肠前壁，经幽门部，沿胃大弯至贲门，将胃剪开。观察胃壁内容物，胃、十二指肠粘膜有无出血、糜烂、溃疡及肿块。

（5） 胰：胰管的检查，可用解剖刀在胰体部作一横切面，找出胰管断面，然后向胰尾及胰头将胰管剪开，直至十二指肠乳头处，观察胰管与总胆管汇合处的情况，胰管有无扩张和结石。把胰平放在垫板上，作若干横切面，观察其小叶结构是否清楚，有无出血、坏死灶及肿块等。

（6）肝脏