柱层析分离丙种球蛋白与核黄素课件_第1页
柱层析分离丙种球蛋白与核黄素课件_第2页
柱层析分离丙种球蛋白与核黄素课件_第3页
柱层析分离丙种球蛋白与核黄素课件_第4页
柱层析分离丙种球蛋白与核黄素课件_第5页
已阅读5页，还剩5页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

柱层析分离丙种球蛋白与核黄素第五组：孙玉桃

班级：生药1213

简介Sephadex是由葡聚糖通过环氧氯丙烷交联形成的三维网状凝胶颗粒。Sephadex凝胶按交联度不同，用SephadexG加一个数字来区别型号，数字越小，表示介质交联度越大，分级范围越小，反之亦然。SephadexG葡聚糖凝胶特点：1、经典的葡聚糖和环氧丙烷偶联介质，拥有极高的流速2、多种不同的分离范围，提供了广泛的选择性。实训目的1.学习和掌握分子筛凝胶层析法的工作原理和基本操作技术2、多种不同的分离范围，提供了广泛的选择性。实训原理凝胶过滤是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析方法。此类层析的固相载体是具有分子筛性质的凝胶，此次实验使用葡聚糖凝胶过滤。凝胶过滤的分离过程是在装有多孔物质填料的柱中进行的。加入交联剂表氯醇交联聚合而成多糖链的三维结构，是多孔性网状结构，凝胶的孔径大小与交联剂的量有关，交联剂多则交联度大，网状结构紧密，孔径小，反之交联剂少则孔径大。实训准备实训器材层析柱（玻璃柱）、铁架台实训材料样品液：0.05%核黄素(VitB2)与6%丙种球蛋白等量混合置4oC保存。注意：核黄素需近期生产，并新鲜配制实训过程取直径0.8—1.2cm，长度为25cm的层析柱，在上口箍橡皮筋，出口处装上乳胶管，柱内加注蒸馏水2—3ml，排出乳胶管内的气泡，抬高乳胶管防止柱内的蒸馏水排空。自顶部缓缓加入经膨胀的葡聚糖G-50悬液。待底部凝胶沉积2—3cm时将乳胶管放低，仍继续加入上述悬液至凝胶层积至18cm高度即可。操作过程中，应防止气泡与分层现象的发生。让凝胶自然下沉，使表层平整。待凝胶柱层稳定后，以洗脱液(蒸馏水)洗柱5分钟，调节流速至4滴每分钟。2待蒸馏水流至柱面平时，(注意，不可使柱面干掉)，马上沿层析柱内壁小心加4滴样品于柱床面，注意尽量不使床面搅动，马上加入1—2倍于样晶体积的蒸馏水，反复两次后，可加大量蒸馏水连续洗脱，这样可以使样品稀释最小。样品一旦加入后马上用量筒或刻度离心管收集流出液，柱床上不断加蒸馏水，待红色(血红蛋白)流出一半时记录毫升数，此为血红蛋白Ve也为Vo。继续收集流出液，待黄色(核黄素)流出一半时记录体积，此为核黄素Ve。测出柱床体积(Vt)，外水体积(Vo)内水体积(Vi)，及核黄素的洗脱体积(Ve)。并计算出Hb及鱼精蛋的分配系数(Kd)。用蒸馏水反复加在柱床上面，洗柱10分钟然后将柱内凝胶回收入凝胶瓶内。注意事项在收集过程中，要保持流出液的流速稳定，洗脱速度控制在4滴

人人文库> 全部分类> 专业文献 > 工业制造

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论