DB15T 2397-2021黑土区甜叶菊组织培养育苗移栽技术规程

ICS65.020.01CCSICS65.020.01CCSB05内蒙古自治区地方标准DB15/T2397—2021黑土区甜叶菊组织培养育苗移栽技术规程Codeofprcticeoftissuecultureandseedlingtransplantingofsteviainblacksoilarea2021-09-262021-09-262021-10-26内蒙古自治区市场监督管理局发布前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC20）归口。黑土区甜叶菊组织培养育苗移栽技术规程范围本文件适用于内蒙古自治区呼伦贝尔市、兴安盟、通辽市。（GB13735聚乙烯吹塑农用地面覆盖薄膜下列术语和定义适用于本文件。下列术语和定义适用于本文件。3.1甜叶菊steviarebaudianahemsl.菊科甜叶菊属多年生草本植物，原产于南美巴拉圭和巴西交界的高山草地。4无菌环境准备（（剪121℃，时间20min95Mpa耐热器械（部分玻璃器皿、坩埚）采用干热灭菌，利用烘箱加热到170℃，持续90min。植物激素（6-BA、NAA、IBA）采用过滤灭菌。采用滤膜网孔直径0.45μm以下的微孔过滤灭菌器。无菌操作器械采用灼烧灭菌。灼烧灭菌可采用接种用电热灭菌器或酒精灯灼烧灭菌。桌面、墙面、双手、植物材料表面用药剂涂擦、喷雾灭菌，用75%的酒精或0.1%的新洁尔灭菌。超净工作台用75%的酒精喷洒。接种室、培养室定期用紫外灯灭菌。打开室内及超净工作台，用紫外灯杀菌20min～30min10min1～210ml/m³5g/m³，熏蒸2d～3d，2d～3d10粒75%酒精消毒10s→冲洗4～5次，后置于无菌滤纸下吸干。2510h/d～16h/dcm6组织培养MS取40gMS粉，溶于1L蒸馏水，调pH为5.8，加琼脂5g，灭菌20min后，冷却备用。1/2MS取20gMS粉，溶于1L蒸馏水，调pH为5.8，加琼脂8.5g，灭菌20min后，冷却备用。MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂。0.1%HgCl2消毒6min，每隔5s～10s摇动1次离心管，无菌水冲洗4～5用70冲洗4～5次，后置于无菌滤纸下吸干。2510h/d～16h/dcm6组织培养MS取40gMS粉，溶于1L蒸馏水，调pH为5.8，加琼脂5g，灭菌20min后，冷却备用。1/2MS取20gMS粉，溶于1L蒸馏水，调pH为5.8，加琼脂8.5g，灭菌20min后，冷却备用。MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂。MS+1.0mg/L6-BA+O.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂。1/2MS+0.1mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+0.2mg/LIBA+20g/L蔗糖+7g/L琼脂。1cm7510s0.1HgCl26min5s～10搅动MS301cm培养温度为24℃～28℃，光照时间为16h/d，光照强度为2000lx。将无菌苗切成单株，接种于增殖培养基中，每瓶接种5株。选取生长状态基本一致的试管苗，并将苗切成单株，接种于生根培养基中，每瓶接种5株。选取生长状态基本一致的试管苗，并将苗切成单株，接种于生根培养基中，每瓶接种5株。7试管苗移栽7.1试管移栽将试管苗根部培养基清洗干净移栽于苗盘，以湿润河沙为栽培基质，覆盖塑料薄膜，温度控制在2