【教学课件】第2节 微生物的培养技术及应用 第2课时 示范课件1

第2节微生物的培养技术及应用（第2课时）第1章发酵工程新课引入有一段时间，水果“酵素”风靡各地，水果“酵素”制作的大致过程是：将洗净、切成块状的水果，放入洁净的容器，再加入糖和水，密封，置于阴凉处发酵一至两周。有人说，吃水果“酵素”可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力。请评估这一论点是否可信。新课引入思考关于水果“酵素”的问题：1．水果“酵素”是什么？

是“酶”的另一种说法。2．水果“酵素”的制作原理是什么？

利用微生物进行无氧呼吸的原理。3．与我们所学过的哪种传统发酵技术相似？

泡菜的制作。学生活动新课引入思考关于水果“酵素”的问题：4．水果“酵素”可能含有哪些成分？糖类、蛋白质、有机酸如乳酸。5．它是否含有人们无法从其他食品中获取但又是维护健康所必需的成分？6．水果“酵素”中所有的成分都有益于身体健康吗？一些微生物发酵产生的有毒物质，食用后可能会危害人体健康。学生活动不存在它独有的成分。一、微生物的纯培养阅读课本第11页的内容，理解培养物、纯培养物、纯培养的概念，并初步认识纯培养的操作步骤。学生活动在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体，称为培养物。1．培养物一、微生物的纯培养由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。2．纯培养物获得纯培养物的过程就是纯培养。3．纯培养4．纯培养的步骤配制培养基灭菌接种分离培养二、酵母菌的纯培养采用__________和________________能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。稀释涂布平板法朗读本实验的实验原理、目的要求和材料用具。学生活动（一）实验原理平板划线法二、酵母菌的纯培养1．学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。2．学会进行无菌操作。3．尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。（二）目的要求能得到单菌落的是固体培养基还是液体培养基？固体培养基二、酵母菌的纯培养酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸（或报纸）、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌锅和恒温培养箱。（三）材料用具二、酵母菌的纯培养根据灭菌方式的区别将上述材料用具进行分类。学生活动干热灭菌：高压蒸汽灭菌：酒精灯灼烧灭菌：小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、培养皿。马铃薯、葡糖糖、琼脂、蒸馏水配制的培养基。接种环。二、酵母菌的纯培养（1）配制培养基（四）方法步骤1．制备培养基马铃薯处理去皮称200g切块后加水煮沸至软烂过滤取滤液加20g葡萄糖加15~20g琼脂定容至1000mL二、酵母菌的纯培养（2）灭菌将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15~30min。将5~8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160~170℃灭菌2h。1．制备培养基二、酵母菌的纯培养（3）倒平板待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。1．制备培养基①拔出锥形瓶的棉塞。②将瓶口迅速通过火焰。③将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10~20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖。④等培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。二、酵母菌的纯培养根据实验操作流程进行培养基的配制、灭菌和倒平板。在此过程中注意不到烫伤、划伤，灭菌要操作规范。学生活动1．为什么培养基冷却至50℃左右时才开始倒平板？

琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，而高于50℃会烫手。2．在倒平板时，不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？

不能，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，造成杂菌污染。3．倒平板时，为什么在酒精灯火焰旁操作？酒精灯火焰旁是无菌区域，可以避免周围环境中的微生物的污染。易错辨析二、酵母菌的纯培养4．倒平板时为什么要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。5．平板冷凝后为何要倒置？防止皿盖上的冷凝水珠落入培养基，避免培养基中的水分过快蒸发。6．配制培养基时先灭菌还是先调节pH值？7．配制酵母菌培养基是否需要调节pH值？易错辨析二、酵母菌的纯培养先调pH。不需要。二、酵母菌的纯培养（1）平板划线法通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，就称为平板划线法。在数次划线结束后，就可以分离到单菌落。2．接种和分离酵母菌二、酵母菌的纯培养（2）平板划线的具体操作2．接种和分离酵母菌①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。②在火焰旁冷却接种环。同时拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞。③将试管口通过火焰。④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液。二、酵母菌的纯培养（2）平板划线的具体操作⑤将试管口通过火焰，并塞上棉塞。⑥在火焰附近将皿盖打开一条缝，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次划线与第一次的划线相连。二、酵母菌的纯培养①在灼烧接种环后，到等其冷却再进行划线，以免温度过高杀死菌种。②划线时用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。③接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。（3）注意事项二、酵母菌的纯培养④除第一次划线外，每次划线均从上一次划线的末端开始，能使酵母菌的数目随划线次数的增加而逐步减少，最终得到单个细菌繁殖而来的菌落。⑤划线首尾不能相接，最后一次划线的菌最稀少，第一次划线的菌最密集，如果连在一起会影响菌落的分离效果，得不到单个菌落。（3）注意事项二、酵母菌的纯培养每次划线前后灼烧接种环的目的是什么？灼烧时间目的第一次划线前每次划线前划线结束后杀死接种环上可能存在的微生物，防止外来微生物干扰杀死上一次划线结束后接种环残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端杀死接种环上残存的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者二、酵母菌的纯培养六次以下图为例，一种灼烧了几次接种环？完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种（接种等量无菌水）的平板倒置，放入28℃作用的恒温培养箱中培养24~28h。3．培养酵母菌二、酵母菌的纯培养1．在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，说明了什么？未接种的培养基是作为空白对照的，表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染。（五）结果分析与评价二、酵母菌的纯培养2．在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了单菌落？如果你观察到了不同形态的菌落，可能是哪些原因引起的？如果观察到单菌落，培养基上生长的菌落颜色、形状、大小等基本一致，说明接种成功。若培养基出现了其他菌落，说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，可能是菌种不纯、培养基灭菌不彻底或实验过程中被杂菌污染。（五）结果分析与评价课堂小结倒平板时都有哪些操作是为了避免杂菌污染？1．锥形瓶的瓶口通过火焰；2．在酒精灯附近操作；3．培养皿只露出一个小缝；4．平板冷凝后倒置。学生活动平板划线的过程中有哪些操作是为了避免杂菌污染？1．灼烧接种环，在火焰旁冷却；2．将试管口通过火焰；3．在火焰附近将培养皿开一条缝；4．每次接种完灼烧接种环。接种环灭菌第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌课堂小结思考平板划线的基本操作和注意事项。学生活动课堂检测1．下列关于微生物的实验操作的叙述，正确的是（

）A．配制细菌培养基过程中，需要在倒平板时调节培养基的pHB．配制固体培养基时加入琼脂，其作用是为微生物生长提供碳源C．平板划线法接种时，每次划线之前都需要对接种环进行灭菌D．实验结束后，使用完的培养基可以直接丢弃C课堂检测2．（多选）微生物接种的方法很多，平板划线法是常用的一种。如图是平板划线示意图，划线的顺序为①②③④。下列相关叙述错误的是（

）

A．划线操作时，将蘸有菌种的接种环插入培养基B．平板划线后培养微生物时要倒置培养C．可以将第④区域的划线与