免疫标准操作程序SOP

PAGE..标准操作程序项目甲型肝炎病毒IgM检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号CHDEYY-JYK-MY-001文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期XX市第二人民医院检验科免疫室甲型肝炎病毒IgM检测的标准操作程序WHDRYY-JYK-MY-001共2页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经专业主管、科主任批准签字。[标本的采取和保存]采静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]采用兔抗-人IgMu链包被反应被,加入待测标本,同时加入HAVAg,抗HAV-HRP,如待测标本中含有抗-HAV-IgM时,就能与包被兔抗-人IgMu链结合,并且与HAVAg,抗-HAV-HRP结合成复合物,加TMB底物产生显色反应,反之则无显色反应。[操作步骤]将待测标本用生理盐水作〔1：1000稀释,每孔加入稀释标本100ul,设阴、阳性对照各2空,每孔加入阴性对照〔或阳性对照100ul〔或2滴,并设空白对照一孔,封板,置37度孵育20分钟。洗板机洗板：选择洗涤5次程序洗板后拍干。手工洗板：弃去孔内液体,洗涤液注满各空,静置5秒,甩干,重复三次后拍干。每孔加入HAVAg30ul〔或一滴,酶结合物50ul〔或一滴,〔空白对照孔不加,充分混匀,封板,置37度孵育20分钟。洗板机洗板：选择洗涤5次程序洗板后拍干。手工洗板：弃去孔内液体,洗涤液注满各空,静置5秒,甩干,重复三次后拍干。每孔加显色剂A液、B液各50ul〔或一滴,充分混匀,封板,置37度孵育10分钟。每孔加入终止液50ul〔或一滴,混匀。用酶标仪读数,取波长450nm〔建议使用双波长的酶标仪比色,参考波长630nm,先用空白孔校零,然后读取各孔OD值。[结果判断]样品OD值除以阴性对照平均OD值大于或等于2.1判断为阳性,否则为阴性阴性对照OD值低于0.05作0.05计算,高于0.05按实际OD值计算[临床意义]血清中HAV—IgM在亚临床期即已出现,其滴度在感染后3个月维持在1000以上,早被公认为早期诊断甲型肝炎的依据。[注意事项]试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。洗板时所用的洗水纸请勿反复。不同批号试剂请勿通用。结果判断须在10分钟内完成。实验室名称项目编号制定日期XX市第二人民医院检验科免疫室甲型肝炎病毒IgM检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-001共2页第2页2005-01-01封片不能重复使用。用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项目乙肝表面抗原检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-002文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期XX市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗原检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-002共2页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]双抗体夹心法测HBsAg：抗S包被反应板,加入待测血清后,再加入酶标抗S,加底物显色为阳性,证明样本中含被测物,含量与显色程度成正比。[操作步骤]实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒,在室温下平衡30分钟,同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升,并设阳性对照2孔,阴性对照2孔,空白对照1孔。加酶结合物：每孔0.05毫升,空白对照孔不加,充分混匀,置37℃孵育30分钟。洗板：手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔,静置5~10秒,弃去孔内洗涤液拍干,如此反复5次,拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板,最后拍干。加显色剂：先加显色剂A,每孔0.05毫升；再加显色剂B,每孔0.05毫升；充分混匀,放置37℃避光孵育15分钟。终止反应：每孔加入终止液0.05毫升,混匀。测定：用酶标仪读数,可选择波长450nm〔以空白孔校零或双波长450/630nm,读取各孔OD值。[结果判断]Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值*2.1标本OD值大于COV为阳性,标本OD值小于COV为阴性注：阴性对照OD值低于0.05按0.05计算,高于0.05按实际OD值计算。[临床意义]HbsAg在感染早期出现于患者血循环中,可持续数月,数年乃至终生,是诊断HBV感染最常用的指标。但所谓HBV感染的"窗口期",HbsAg可以阴性,而抗HBc等其他HBV血清标志物则可阳性。[注意事项]1试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。实验室名称项目编号制定日期XX市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗原检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-002共2页第2页2005-01-014不同批号试剂请勿通用。5结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项目乙肝表面抗体检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-003文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期XX市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗体检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-003共2页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]双抗原夹心一步法测HbsAb：S抗原反应包被板,加入待测血清后,再加入酶标抗S,加底物显色为阳性,证明样品中含被测物,含量与显色程度成正比。[操作步骤]实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒,在室温下平衡30分钟,同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升,并设阳性对照2孔,阴性对照2孔,空白对照1孔。加酶结合物：每孔0.05毫升,空白对照孔不加,充分混匀,置37℃孵育30分钟。洗板：手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔,静置5~10秒,弃去孔内洗涤液拍干,如此反复5次,拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板,最后拍干。加显色剂：先加显色剂A,每孔0.05毫升；再加显色剂B,每孔0.05毫升；充分混匀,放置37℃避光孵育15分钟。终止反应：每孔加入终止液0.05毫升,混匀。测定：用酶标仪读数,可选择波长450nm〔以空白孔校零或双波长450/630nm,读取各孔OD值。[结果判断]Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值*2.1标本OD值大于COV为阳性,标本OD值小于COV为阴性注：阴性对照OD值低于0.05按0.05计算,高于0.05按实际OD值计算。[临床意义]抗—HBs为HBV的中和抗体,有清除HBV,防止在感染的作用,抗—HBs一般出现于乙肝患者恢复期,提示感染已终止。此外,注射过乙肝疫苗的人,抗—HBs阳性。[注意事项]1试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。4不同批号试剂请勿通用。实验室名称项目编号制定日期XX市第二人民医院检验科免疫室乙肝表面抗体检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-003共2页第2页2005-01-015结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项目乙肝E抗原检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-004文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期XX市第二人民医院检验科免疫室乙肝E抗原检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-004共2页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]双抗体夹心法测HbeAg：抗e包被反应板,加入待测血清后,再加入酶标抗e,加底物显色为阳性,证明样本中含被测物,含量与显色程度成正比。[操作步骤]实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒,在室温下平衡30分钟,同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升,并设阳性对照2孔,阴性对照2孔,空白对照1孔。加酶结合物：每孔0.05毫升空白对照孔不加,充分混匀,置37℃孵育30分钟。洗板：手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔,静置5~10秒,弃去孔内洗涤液拍干,如此反复5次,拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板,最后拍干。加显色剂：先加显色剂A,每孔0.05毫升；再加显色剂B,每孔0.05毫升；充分混匀,放置37℃避光孵育15分钟。终止反应：每孔加入终止液0.05毫升,混匀。测定：用酶标仪读数,可选择波长450nm〔以空白孔校零或双波长450/630nm,读取各孔OD值。[结果判断]Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值*2.1标本OD值大于COV为阳性,标本OD值小于COV为阴性注：阴性对照OD值低于0.05按0.05计算,高于0.05按实际OD值计算。[临床意义]HBeAg是HBV的核心部分,故一般认为HBeAg阳性是具有传染性的标志,在乙肝潜伏期乃至整个病程中,HBeAg均可检出。抗HBe是HBeAg的相应抗体。一般认为HbeAg消失和抗HBe出现是病情趋向好转的征象。但并不意味着HBVDNA停止复制,或传染性消失。[注意事项]1．试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。2．从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。3．洗板时所用的洗水纸请勿反复。实验室名称项目编号制定日期XX市第二人民医院检验科免疫室乙肝E抗原检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-004共2页第2页2005-01-014．不同批号试剂请勿通用。5．结果判断须在10分钟内完成。6．封片不能重复使用。7．用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项目乙肝E抗体检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-005文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期XX市第一人民医院检验科免疫室乙肝E抗体检测的标准操作程序WDYYY-JYK-MY-005共2页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]竞争抑制一步法测HBeAb：抗e包被反应板,加入待测血清后,加入中和e抗原,再加入酶标抗e,加底物不显色的为阳性,证明样本含被测物,含量与显色程度成反比。[操作步骤]验准备：从冷藏环境中取出试剂盒,在室温下平衡30分钟,同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升,并设阳性对照2孔,阴性对照2孔,空白对照1孔。加中和试剂：每孔0.05毫升,空白对照孔不加。加酶结合物：每孔0.05毫升空白对照孔不加,充分混匀,置37℃孵育30分钟。洗板：手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔,静置5~10秒,弃去孔内洗涤液拍干,如此反复5次,拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板,最后拍干。加显色剂：先加显色剂A,每孔0.05毫升；再加显色剂B,每孔0.05毫升；充分混匀,放置37℃避光孵育15分钟。终止反应：每孔加入终止液0.05毫升,混匀。测定：用酶标仪读数,可选择波长450nm〔以空白孔校零或双波长450/630nm,读取各孔OD值。[结果判断]Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值*0.3标本OD值大于或等于COV为阴性,标本OD值小于COV为阳性注：非原倍血清样品〔稀释血清、质控血清COV=阴性对照*0.5[临床意义]抗HBe是HBeAg的相应抗体。一般认为HbeAg消失和抗HBe出现是病情趋向好转的征象。但并不意味着HBVDNA停止复制,或传染性消失。[注意事项]1试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。实验室名称项目编号制定日期XX市第二人民医院检验科免疫室乙肝E抗体检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-005共2页第2页2005-01-014不同批号试剂请勿通用。5结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项目乙肝核心抗体检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-006文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室乙肝核心抗体检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-006共2页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]竞争抑制一步法测HBcAb：抗c包被反应板,加入待测血清后,加入中和c抗原,再加入酶标抗抗c,加底物不显色的为阳性,证明样本含被测物,含量与显色程度成反比。[操作步骤]实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒,在室温下平衡30分钟,同时将浓缩洗涤液作1：20稀释。加待测标本：加入待测标本每孔0.05毫升,并设阳性对照2孔,阴性对照2孔,空白对照1孔。11：30稀释血清〔血浆检测结果代表临床意义,待检标本可用稀释后的洗涤液加以稀释2原倍血清〔血浆检测结果代表流行病学意义。酶结合物：每孔0.05毫升〔抗—HBc1：30稀释血清代表临床意义,可用稀释后的洗涤液加以稀释；原倍血清代表流行病学意义,空白对照孔不加,充分混匀,置37℃孵育30分钟。洗板：手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔,静置5~10秒,弃去孔内洗涤液拍干,如此反复5次,拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板,最后拍干。加显色剂：先加显色剂A,每孔0.05毫升；再加显色剂B,每孔0.05毫升；充分混匀,放置37℃避光孵育15分钟。终止反应：每孔加入终止液0.05毫升,混匀。测定：用酶标仪读数,可选择波长450nm〔以空白孔校零或双波长450/630nm,读取各孔OD值。[结果判断]Cutoff值计算：原倍血清COV=阴性对照平均OD值*0.31：30稀释血清COV=阴性对照平均OD值*0.5标本OD值大于或等于COV为阴性,标本OD值小于COV为阳性。[临床意义]抗HBc是HBeAg的相应抗体,也是HBV感染后血清中最早出现的HBV的标志性抗体。持续时间长,甚至终生存在。几乎所有个体在感染HBV后都能产生抗HBc,故它是乙肝流行病学调查的良好指标。在HBV感染的"窗口期"抗HBc常是唯一可测出的HBV血清标志物。[注意事项]实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室乙肝核心抗体检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-006共2页第2页2005-01-011试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。3洗板时所用的洗水纸请勿反复。4不同批号试剂请勿通用。5结果判断须在10分钟内完成。6封片不能重复使用。7用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项目乙肝病毒Pre-S1抗原检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-007文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室乙肝病毒Pre-S1抗原检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-007共1页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]用乙肝病毒PreS1蛋白抗体和抗HBS分别用作酶标记抗体和包被抗体。采用ELISA双抗体夹心一步法检测标本中的乙肝病毒PreS1蛋白。[操作步骤]将包被条固定于支架并编上序号。设阳性对照2孔,每孔加入阳性对照50微升,阴性对照2孔,每孔加入阴性对照50微升,空白对照一孔,加入生理盐水100微升。然后,依次在反应孔内加入待测样品50微升,除空白孔外,每孔再加酶结合物50微升,置微型震荡器混匀5秒后,盖好封片放37℃孵育60分钟。弃去反应孔内液体并拍干,用工作洗涤液〔浓缩洗涤液1毫升加19毫升蒸馏水稀释后即为工作洗涤液注满各孔,静置30秒,再拍干,重复洗涤5次。每孔加入TMB显色剂A50微升,在加入TMB显色剂B50微升,37℃中显色10~15分钟。每孔加入终止液50微升。用酶标仪波长450nm读数,先用空白孔调零,然后读取各测定孔OD值。[结果判断]阴性对照A值*2.5=临界值阴性对照小于0.05时,按0.05计算,高于0.05时按实际OD值计算。待测样本大于临界值即为阳性,待测样本小于临界值即为阴性。[临床意义]乙肝病毒Pre—S1抗原〔前s1抗原主要存在于病毒完整颗粒中,表示病毒具有复制功能和传染性。其敏感性好于HBeAg,可弥补由于HBeAg变异等造成的HBeAg阴性的临床"误导"。在早期诊断上早于乙肝两对半和ALT。可与HBv—DNA取得几乎同样的敏感性。[注意事项]包被条需密封防潮,从冰箱取出后,在室温中平衡不少于15分钟。保存在2~8度,在有效期内使用。终止液终止后,需在30分钟内测定结果。不同批号试剂请勿通用。。5．用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项目丙型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-008文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室丙型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-008共2页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]采用ELISA间接抗体两步法测抗HCV,用HCV抗原包被反应板加入待测标本后再加入酶标记第二抗体,加底物显色为阳性,证明样本中含丙肝抗体,含量与显色程度成正比。[操作步骤]每次试验设阴性、阳性对照各两孔,分别加入阴、阳性对照血清100ul,再设一孔空白对照,加入样品稀释液100ul。其余孔加100ul样品稀释液,再加待测血清10ul。充分混匀后,置37℃温育30分钟。洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板,最后拍干。每孔加酶结合物100ul,〔空白对照除外,置37℃温育20分钟。洗板机洗板：选择洗涤5次的程序洗板,最后拍干。每孔加显色剂A、B各50ul,轻轻震荡后,37℃避光静置10分钟。每孔加入终止液50ul终止反应,用酶标仪读数,可选择波长450nm〔以空白调零,读取各孔OD值。[结果判断]阳性对照平均值大于1.20,实验结果有效。实验设计要求阳性、阴性对照OD值之差应大于1.20,否则本次实验无效。若阴性对照值小于0.050时,按0.050计算。临界值=阴性对照平均值+0.1测试标本的计算值小于临界值则为HCV抗体阴性。测试标本的计算值等于或大于临界值则为HCV抗体阳性。[临床意义]抗—HCV阳性仅提示已被HCV感染,不是获得免疫力的标志。急性期多为IgM型,慢性期多为IgG型,两者均为非保护性抗体,是具有传染性的标志。[注意事项]试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。洗板时所用的洗水纸请勿反复。不同批号试剂请勿通用。结果判断须在10分钟内完成。封片不能重复使用。实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室丙型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-008共2页第1页2005-01-017．用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项目丁型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序〔IgG方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-009文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室丁型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-009共2页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]采用丁型肝炎病毒特异性抗原成分作为包被抗原,采用ELISA法检测丁型肝炎病毒抗体。样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔,在随后的温育过程中,若样品中含特异性抗体,则该抗体与包被抗原形成抗原—抗体复合物被吸附到固相上,再加上酶标记的第二抗体,最终形成抗原—抗体—酶标二抗复合物,洗涤除去未结合的游离酶,加入显色剂后显色,反之若样品中不含特异性抗体,则加入显色剂后不显色。[操作步骤]配洗液：将洗涤液〔20倍与蒸馏水按1：19的比例稀释,充分摇匀后备用。加样品稀释液：用加样器在微孔反应条孔中加入样品稀释液每孔100ul,空下四孔准备加对照。加标本和留空白：将每份待检标本10ul分别加入已有样品稀释液的各孔中,留下一孔不加标本做空白对照,标好位置。加对照：在预先空下的4孔分别加入阴性对照两孔,阳性对照两孔每孔100ul,标好位置,阴、阳对照应在所有待测标本加完后再加,以保证阈值计算的准确性。温育〔一：充分混匀,37℃温育20分钟。洗板〔一：洗板机洗板：洗板次数为5次,每次洗液在孔中滞留时间为15~30秒,洗液应注满反应孔,确保每次吸净无残留,全部洗完后在毛巾或洗水纸上用力拍干。加酶标二抗：各孔中加入酶标二抗100ul。温育〔二：37℃温育20分钟。洗板〔二：方法同洗板〔一。加显色剂：每孔加入显色剂A50ul,全部加完后,再次每孔加入显色剂B50ul,混匀。温育〔三：37℃显色10分钟。终止：显色完毕后立即于每孔加50ul终止液,混匀。判断：终止后应在10分钟内完成判读,用空白对照调零,用酶标仪在450nm波长处测定吸光值。[结果判断]对空白对照调零后,两孔阳性对照OD平均值大于两孔阴性对照OD平均值0.5以上,阴性对照OD平均值小于0.10时,方可认为试剂盒有效并且用户操作无误。阈值的计算：1两孔阴性对照平均值小于0.06按0.06计算2阈值=2.1乘以阴性对照OD平均值[临床意义]实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室丁型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-009共2页第1页2005-01-01HDV是一种有缺陷的病毒,表面被HBV包膜蛋白包裹。HDV的致病性依赖于HBV,可与HBV重叠感染或共同感染,HDV感染与暴发型肝炎重症肝炎及肝硬变密切相关。HDV感染的血清学检测测定抗HDV—IgG,一般认为是即往感染。[注意事项]试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。洗板时所用的洗水纸请勿反复。不同批号试剂请勿通用。结果判断须在10分钟内完成。封片不能重复使用。用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项目丁型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序〔IgM方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-010文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室丁型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-010共2页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]采用丁型肝炎病毒特异性抗原成分作为包被抗原,采用ELISA法检测丁型肝炎病毒抗体。样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔,在随后的温育过程中,若样品中含特异性抗体,则该抗体与包被抗原形成抗原—抗体复合物被吸附到固相上,再加上酶标记的第二抗体,最终形成抗原—抗体—酶标二抗复合物,洗涤除去未结合的游离酶,加入显色剂后显色,反之若样品中不含特异性抗体,则加入显色剂后不显色。[操作步骤]配洗液：将洗涤液〔20倍与蒸馏水按1：19的比例稀释,充分摇匀后备用。加样品稀释液：用加样器在微孔反应条孔中加入样品稀释液每孔100ul,空下四孔准备加对照。加标本和留空白：将每份待检标本10ul分别加入已有样品稀释液的各孔中,留下一孔不加标本做空白对照,标好位置。加对照：在预先空下的4孔分别加入阴性对照两孔,阳性对照两孔每孔100ul,标好位置,阴、阳对照应在所有待测标本加完后再加,以保证阈值计算的准确性。温育〔一：充分混匀,37℃温育20分钟。洗板〔一：洗板机洗板：洗板次数为5次,每次洗液在孔中滞留时间为15~30秒,洗液应注满反应孔,确保每次吸净无残留,全部洗完后在毛巾或洗水纸上用力拍干。加酶标二抗：各孔中加入酶标二抗100ul。温育〔二：37℃温育20分钟。洗板〔二：方法同洗板〔一。加显色剂：每孔加入显色剂A50ul,全部加完后,再次每孔加入显色剂B50ul,混匀。温育〔三：37℃显色10分钟。终止：显色完毕后立即于每孔加50ul终止液,混匀。判断：终止后应在10分钟内完成判读,用空白对照调零,用酶标仪在450nm波长处测定吸光值。[结果判断]对空白对照调零后,两孔阳性对照OD平均值大于两孔阴性对照OD平均值0.5以上,阴性对照OD平均值小于0.10时,方可认为试剂盒有效并且用户操作无误。阈值的计算：1两孔阴性对照平均值小于0.06按0.06计算2阈值=2.1乘以阴性对照OD平均值[临床意义]实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室丁型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-010共2页第2页2005-01-01HDV是一种有缺陷的病毒,表面被HBV包膜蛋白包裹。HDV的致病性依赖于HBV,可与HBV重叠感染或共同感染,HDV感染与暴发型肝炎重症肝炎及肝硬变密切相关。HDV感染的血清学检测测定抗HDV—IgM。阳性一般认为是近期感染。[注意事项]试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。洗板时所用的洗水纸请勿反复。不同批号试剂请勿通用。结果判断须在10分钟内完成。封片不能重复使用。用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项目戊型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序〔IgG方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-011文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室戊型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-011共2页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]采用戊型肝炎病毒〔HEV特异性抗原成分作为包被抗原,采用ELISA法检测戊型肝炎病毒抗体。样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔,在随后的温育过程中,若样品中含特异性抗体,则该抗体与包被抗原形成抗原—抗体复合物被吸附到固相上,再加上酶标记的第二抗体,最终形成抗原—抗体—酶标二抗复合物,洗涤除去未结合的游离酶,加入显色剂后显色,反之若样品中不含特异性抗体,则加入显色剂后不显色。[操作步骤]配洗液：将洗涤液〔20倍与蒸馏水按1：19的比例稀释,充分摇匀后备用。加样品稀释液》：用加样器在微孔反应条孔中加入样品稀释液每孔100ul,空下四孔准备加对照。加标本和留空白：将每份待检标本10ul分别加入已有样品稀释液的各孔中,留下一孔不加标本做空白对照,标好位置。加对照：在预先空下的4孔分别加入阴性对照两孔,阳性对照两孔每孔100ul,标好位置,阴、阳对照应在所有待测标本加完后再加,以保证阈值计算的准确性。温育〔一：充分混匀,37℃温育20分钟。洗板〔一：洗板机洗板：洗板次数为5次,每次洗液在孔中滞留时间为15~30秒,洗液应注满反应孔,确保每次吸净无残留,全部洗完后在毛巾或洗水纸上用力拍干。加酶标二抗：各孔中加入酶标二抗100ul。温育〔二：37℃温育20分钟。洗板〔二：方法同洗板〔一。加显色剂：每孔加入显色剂A50ul,全部加完后,再次每孔加入显色剂B50ul,混匀。温育〔三：37℃显色10分钟。终止：显色完毕后立即于每孔加50ul终止液,混匀。判断：终止后应在10分钟内完成判读,用空白对照调零,用酶标仪在450nm波长处测定吸光值。[结果判断]对空白对照调零后,两孔阳性对照OD平均值大于两孔阴性对照OD平均值0.5以上,阴性对照OD平均值小于0.10时,方可认为试剂盒有效并且用户操作无误。阈值的计算：1两孔阴性对照平均值小于0.06按0.06计算2阈值=2.1乘以阴性对照OD平均值[临床意义]实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室戊型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-011共2页第2页2005-01-01HEV属杯状病毒科,所致戊型肝炎的临床症状和流行病学都与甲肝相似,其急性肝炎的死亡率高〔1%~2%。孕妇可达20%,戊肝的血清学诊断用ELISA法检测抗HEV抗体。[注意事项]试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。洗板时所用的洗水纸请勿反复。不同批号试剂请勿通用。结果判断须在10分钟内完成。封片不能重复使用。用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项目戊型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序〔IgM方法ELISA方法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-012文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室戊型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-012共2页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]采用戊型肝炎病毒〔HEV特异性抗原成分作为包被抗原,采用ELISA法检测戊型肝炎病毒抗体。样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔,在随后的温育过程中,若样品中含特异性抗体,则该抗体与包被抗原形成抗原—抗体复合物被吸附到固相上,再加上酶标记的第二抗体,最终形成抗原—抗体—酶标二抗复合物,洗涤除去未结合的游离酶,加入显色剂后显色,反之若样品中不含特异性抗体,则加入显色剂后不显色。[操作步骤]配洗液：将洗涤液〔20倍与蒸馏水按1：19的比例稀释,充分摇匀后备用。加样品稀释液》：用加样器在微孔反应条孔中加入样品稀释液每孔100ul,空下四孔准备加对照。加标本和留空白：将每份待检标本10ul分别加入已有样品稀释液的各孔中,留下一孔不加标本做空白对照,标好位置。加对照：在预先空下的4孔分别加入阴性对照两孔,阳性对照两孔每孔100ul,标好位置,阴、阳对照应在所有待测标本加完后再加,以保证阈值计算的准确性。温育〔一：充分混匀,37℃温育20分钟。洗板〔一：洗板机洗板：洗板次数为5次,每次洗液在孔中滞留时间为15~30秒,洗液应注满反应孔,确保每次吸净无残留,全部洗完后在毛巾或洗水纸上用力拍干。加酶标二抗：各孔中加入酶标二抗100ul。温育〔二：37℃温育20分钟。洗板〔二：方法同洗板〔一。加显色剂：每孔加入显色剂A50ul,全部加完后,再次每孔加入显色剂B50ul,混匀。温育〔三：37℃显色10分钟。终止：显色完毕后立即于每孔加50ul终止液,混匀。判断：终止后应在10分钟内完成判读,用空白对照调零,用酶标仪在450nm波长处测定吸光值。[结果判断]对空白对照调零后,两孔阳性对照OD平均值大于两孔阴性对照OD平均值0.5以上,阴性对照OD平均值小于0.10时,方可认为试剂盒有效并且用户操作无误。阈值的计算：1两孔阴性对照平均值小于0.06按0.06计算2阈值=2.1乘以阴性对照OD平均值[临床意义]实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室戊型肝炎病毒抗体检测的标准操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-012共2页第2页2005-01-01HEV属杯状病毒科,所致戊型肝炎的临床症状和流行病学都与甲肝相似,其急性肝炎的死亡率高〔1%~2%。孕妇可达20%,戊肝的血清学诊断用ELISA法检测抗HEV抗体。[注意事项]试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。洗板时所用的洗水纸请勿反复。不同批号试剂请勿通用。结果判断须在10分钟内完成。封片不能重复使用。用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。标准操作程序项目ENA多肽谱检测的标准操作程序方法免疫印迹法编写人冯岚日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-013文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室ENA多肽谱检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-013共2页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]免疫印迹酶组化法即细胞核内可溶性抗原〔ENA用PBS提取〔混合抗原后用凝胶电泳将各组ENA因分子量及带电荷量拉开距离分出不同区带转印至NC膜,被测血清中某种ENA抗体与NC膜条上某种ENA抗原反应,在加上酶标第二抗体。某区带不同分子量表位显色提示被测血清中含有相应ENA抗体。用该检测法可同时检测多种ENA抗体,并分项报告检查结果。[操作步骤]按所需量将浓缩洗涤液用蒸馏水作1：10稀释。取出反应槽,每槽加入0.5毫升洗涤液,然后加入待测血清10微升,充分混匀,缓慢摇动下37℃孵育30分钟。弃去槽内液体,在吸水纸上拍干,用洗涤液洗涤4次,每次每槽1毫升,洗涤一分钟。每槽加入洗涤液0.5毫升,酶标抗体20微升,混匀。缓慢摇动下37℃孵育30分钟。同"3"洗涤。加入显色剂A0.5毫升,显色剂B0.5毫升,室温反应10分钟。每槽加入0.5毫升终止液,一分钟后弃去液体,用自来水洗涤数次,取出膜条,用吸水纸吸干后判断结果。[结果判断]膜条蓝线与标准谱带"0"线对齐,查出相应的色带区域。实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室ENA多肽谱检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-013共2页第2页2005-01-01显色区带检测抗体相关疾病及阳性率60KD、52KD、[抗SSA]60KD、52KD任意出现一条即可。干燥综合症〔SS〔65%SLE〔35%47KD、45KD、[抗SSB]47KD,45KD应同时出现。干燥综合症〔40%55KD[抗JO—1]多发性肌炎/皮肌炎〔PM/DM〔25%38KD、16.5KD、15KD[抗rRNP38KD]应出现,16.5KD,15KD有时很浅。系统性红斑狼疮〔10%29KD、28KD、13.5KD[抗Sm]三条区带应同时出现系统性红斑狼疮〔SLE〔30%70KD、32KD、29KD、28KD、22KD[抗U1RNP]其中70KD,32KD应任意出现一条区带。混合性结缔组织病〔MCTD〔95%SLE〔32%其他自身免疫性疾病86~67KD[抗ScL-70]86KD,67KD区带应同时出现,中间尚可见2~3条较弱区带。弥漫性硬皮病〔PSS〔43%~70%28.5~11.5KD[抗D、E]28.5KD、18.5KD,11.5KD应同时出现,之间尚可出现20KD,18KD,13.4KD区带。混合性结缔组织病〔MCTD〔19%53KD[抗DM—53]皮肌炎〔DM〔20%54KD[抗RA—54]类风湿性关节炎〔RA〔14%[临床意义]抗SM为SLE的标志抗体。抗U1RNP为混合性结缔组织病的标志抗体。抗SSA和抗SSB为干燥综合症的特异抗体。抗JO—1对皮肌炎有一定价值。[注意事项]浓缩洗涤液需用前稀释。整个操作中,洗涤液用量大约每个人10毫升,可参照此稀释。未用完洗涤液弃之,不可留下次再用。全部操作最好在生化摇摆平台上摆动进行,改用手工间隙晃动也可,但敏感性降低。显色剂A、B,需恢复室温方可使用,显色剂有颗粒时不影响检测结果。诊断不应只建立在单个检测基础上,所有检测结果必须考虑病人的临床病史和其他检测结果。不同试剂盒间的标准谱不能混用。不同血清标本,不同带型,显色强度会不一致,遇到弱阳性结果时,应仔细观察。标准操作程序项目抗核抗体〔ANA检测的标准操作程序方法金标免疫斑点法编写人周晓林日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-014文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室抗核抗体〔ANA检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-014共1页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]斑点反应板上的固相混合细胞核抗原与血清中ANA结合形成复合物,胶体金标记的抗人IgG〔或IgM抗体再与复合物结合,形成肉眼可见的红色圆斑。[操作步骤]加试剂A2滴于反应板孔中,待液体充分吸入。用样品吸管加样品0.15毫升〔4滴于反应板孔中,待液体充分吸入。去除蓝色过滤盖。加试剂B3滴于反应板孔中,待液体充分吸入。加试剂A1~2滴于反应板孔中,待液体吸入后观察结果。[结果判断]反应板孔中央出现红色圆斑与红线为阳性。只出现红色横线为阴性。圆斑与红线均不出现为试剂失效。[临床意义]抗核抗体〔ANA是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称,性质主要是IgG。ANA滴度很高或持续阳性,常提示某些自身免疫性疾病,如：系统性红斑狼疮、药物性红斑狼疮、干燥综合症、混合结缔组织病、硬皮病、多发性肌炎、类风湿关节炎等,少数正常人,尤其是老年人血清中可测出低滴度的ANA,另外,一些特殊病毒感染性疾病〔如传染性单核细胞增多症也可诱导机体产生ANA。[注意事项]试剂盒从冰箱取出时,应恢复室温〔大于30℃后使用。试剂B若出现明显颗粒状沉淀或变兰色为失效。标准操作程序项目抗双链脱氧核糖核酸〔抗ds-DNA检测的标准操作程序方法金标渗滤法编写人周晓林日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-015文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室抗双链脱氧核糖核酸〔抗ds-DNA检测的标准操作程序WHDEYY-JYK-MY-015共1页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]斑点金免疫渗滤试验单位为三层反应盒,血清中抗ds-DNA抗体透过过滤层与反应层NC膜上抗ds-DNA〔斑点结合。未结合物渗入下面吸垫层加入金标抗IgG形成红色斑点为抗ds-DNA抗体阳性,否则斑点无色不显示。[操作步骤]取出所需测定板,按顺序编号。加入待测血清100微升于测定板上滤器孔内。待血清完全渗滤干后,除去过滤器。加金标液3滴于测定板小孔内待干。加洗涤液2滴于测定板小孔内,待干即可判断结果。[结果判断]阳性：在小孔中央的膜上同时出现红色的点和线。如"—""."阴性：在小孔中央的膜上出现红色的线条。如"—"。无效：在小孔中央的膜上无任何显色。[临床意义]抗ds-DNA抗体是系统性红斑狼疮〔SLE标记抗体。即仅在SLE病人可检出该抗体,阳性率在30%左右。抗ds-DNA抗体阳性与SLE活动期及红斑狼疮性肾炎发生有关。SLE活动期抗体检出率明显增高。[注意事项]结果判断中不论阳性,阴性反应膜中央都会显示一条红线,其为试剂质量对照。滴加标本中不能含有红细胞,以免干扰结果的观察。使用不同方法、来源及批号试剂盒前必须仔细阅读其说明书,具体操作参阅试剂盒说明书加以改动。待测血清应新鲜,某些阳性血清4℃保存一周抗ds-DNA抗体就难以测出。标准操作程序项目弓形虫抗体检测的标准操作程序〔IgG方法ELISA方法编写人周晓林日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-016文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室弓形虫抗体检测的标准操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-016共1页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]采用ELISA间接抗体两步法测TOX,用TOX抗原包被反应板,加入待检样本后再加入酶标记第二抗体。加底物显色为阳性,证明标本中含弓形虫抗体,含量与显色程度成正比。[操作步骤]试剂盒放置室温20~30分钟。浓缩洗涤液用蒸馏水10倍稀释。将待测血清分别用试剂盒配套稀释液作1：100稀释〔将样品稀释液1毫升加入一清洁小试管中,加10微升待测样品,充分混匀。取包被板条固定在96孔板架上,分别加入上述稀释血清100微升每孔,同时设阴、阳性对照各2孔,每孔100微升,另留一孔不加任何液体为空白对照,置37℃30分钟。甩去孔内液体,用洗涤液洗3次,每次浸泡一分钟后甩净,扣干。除空白孔外每孔加酶标记物一滴,37℃30分钟。同〔3各孔加显色液A、B液各一滴〔50微升,混匀,37℃避光显色10分钟,加终止液每孔50微升,混匀后用酶标仪450nm波长测OD值。[结果判断]以空白孔调零,450nm波长测定OD值。阳性对照值大于或等于0.25,阴性对照值小于或等于0.10证明实验成立。如阴性对照值小于0.07,按0.07计算,S/N值大于或等于3.0,则判为阳性〔即样品OD值大于或等于0.21判为阳性,如S/N值小于3.0则为阴性。S/N=待测样品OD值/阴性对照OD值平均值[临床意义]弓形虫感染是一种人畜共患疾病,由猫与其他宠物感染人的可能性最大。后天感染轻型者常无症状,但血清中可查到抗体；重型者可引起各种症状,如高热,肌肉、关节疼痛,淋巴结肿大等。通过胎盘宫内感染者,可引起死胎、早产,出生后可表现一系列中枢神经系统症状以及眼及内脏的先天损害。弓形虫抗体IgG阳性提示为TOX继往感染。[注意事项]染菌、严重溶血或高血脂的待测样品可能引起错误结果,应重新采样。临床医生应结合临床症状进行诊断,并对抗体水平进行动态观察。确保样品稀释准确,请按此中方法进行稀释〔将样品稀释液1毫升加入一清洁小试管中,加10微升待测样品,充分混匀。不同批号试剂不可混用。标准操作程序项目弓形虫抗体检测的标准操作程序〔IgM方法ELISA方法编写人周晓林日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-017文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室弓形虫抗体检测的标准操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-017共1页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]采用ELISA间接抗体两步法测TOX,用TOX抗原包被反应板,加入待检样本后再加入酶标记第二抗体。加底物显色为阳性,证明标本中含弓形虫抗体,含量与显色程度成正比。[操作步骤]试剂盒放置室温20~30分钟。浓缩洗涤液用蒸馏水10倍稀释。将待测血清分别用试剂盒配套稀释液作1：100稀释〔将样品稀释液1毫升加入一清洁小试管中,加10微升待测样品,充分混匀。取包被板条固定在96孔板架上,分别加入上述稀释血清100微升每孔,同时设阴、阳性对照各2孔,每孔100微升,另留一孔不加任何液体为空白对照,置37℃30分钟。甩去孔内液体,用洗涤液洗3次,每次浸泡一分钟后甩净,扣干。除空白孔外每孔加酶标记物一滴,37℃30分钟。同〔3各孔加显色液A、B液各一滴〔50微升,混匀,37℃避光显色10分钟,加终止液每孔50微升,混匀后用酶标仪450nm波长测OD值。[结果判断]以空白孔调零,450nm波长测定OD值。阳性对照值大于或等于0.25,阴性对照值小于或等于0.10证明实验成立。如阴性对照值小于0.07,按0.07计算,S/N值大于或等于3.0,则判为阳性〔即样品OD值大于或等于0.21判为阳性,如S/N值小于3.0则为阴性。S/N=待测样品OD值/阴性对照OD值平均值[临床意义]弓形虫感染是一种人畜共患疾病,由猫与其他宠物感染人的可能性最大。后天感染轻型者常无症状,但血清中可查到抗体；重型者可引起各种症状,如高热,肌肉、关节疼痛,淋巴结肿大等。通过胎盘宫内感染者,可引起死胎、早产,出生后可表现一系列中枢神经系统症状以及眼及内脏的先天损害。弓形虫抗体IgM阳性提示为TOX急性感染。[注意事项]染菌、严重溶血或高血脂的待测样品可能引起错误结果,应重新采样。临床医生应结合临床症状进行诊断,并对抗体水平进行动态观察。确保样品稀释准确,请按此中方法进行稀释〔将样品稀释液1毫升加入一清洁小试管中,加10微升待测样品,充分混匀。不同批号试剂不可混用。标准操作程序项目风疹病毒抗体检测的标准操作程序〔IgG方法ELISA方法编写人周晓林日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-018文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室风疹病毒抗体检测的标准操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-018共1页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]采用ELISA间接抗体两步法测RUV,用RUV抗原包被反应板,加入待检样本后再加入酶标记第二抗体。加底物显色为阳性,证明标本中含RUV抗体,含量与显色程度成正比。[操作步骤]试剂盒放置室温20~30分钟。浓缩洗涤液用蒸馏水10倍稀释。将待测血清分别用试剂盒配套稀释液作1：100稀释〔将样品稀释液1毫升加入一清洁小试管中,加10微升待测样品,充分混匀。取包被板条固定在96孔板架上,分别加入上述稀释血清100微升每孔,同时设阴、阳性对照各2孔,每孔100微升,另留一孔不加任何液体为空白对照,置37℃30分钟。甩去孔内液体,用洗涤液洗3次,每次浸泡一分钟后甩净,扣干。除空白孔外每孔加酶标记物一滴,37℃30分钟。同〔3各孔加显色液A、B液各一滴〔50微升,混匀,37℃避光显色10分钟,加终止液每孔50微升,混匀后用酶标仪450nm波长测OD值。[结果判断]以空白孔调零,450nm波长测定OD值。阳性对照值大于或等于0.25,阴性对照值小于或等于0.10证明实验成立。如阴性对照值小于0.07,按0.07计算,S/N值大于或等于3.0,则判为阳性〔即样品OD值大于或等于0.21判为阳性,如S/N值小于3.0则为阴性。S/N=待测样品OD值/阴性对照OD值平均值[临床意义]风疹病毒易感人群为1~5岁儿童和孕妇。据统计,孕妇感染风疹者多在怀孕1~6周时〔大于50%,除可致流产、死产、早产外,所生婴儿还可发生先天性风疹综合症。IgG抗体阳性提示为RUV继往感染。[注意事项]染菌、严重溶血或高血脂的待测样品可能引起错误结果,应重新采样。临床医生应结合临床症状进行诊断,并对抗体水平进行动态观察。确保样品稀释准确,请按此中方法进行稀释〔将样品稀释液1毫升加入一清洁小试管中,加10微升待测样品,充分混匀。不同批号试剂不可混用。标准操作程序项目风疹病毒抗体检测的标准操作程序〔IgM方法ELISA方法编写人周晓林日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-019文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室风疹病毒抗体检测的标准操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-019共1页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]采用ELISA间接抗体两步法测RUV,用RUV抗原包被反应板,加入待检样本后再加入酶标记第二抗体。加底物显色为阳性,证明标本中含RUV抗体,含量与显色程度成正比。[操作步骤]试剂盒放置室温20~30分钟。浓缩洗涤液用蒸馏水10倍稀释。将待测血清分别用试剂盒配套稀释液作1：100稀释〔将样品稀释液1毫升加入一清洁小试管中,加10微升待测样品,充分混匀。取包被板条固定在96孔板架上,分别加入上述稀释血清100微升每孔,同时设阴、阳性对照各2孔,每孔100微升,另留一孔不加任何液体为空白对照,置37℃30分钟。甩去孔内液体,用洗涤液洗3次,每次浸泡一分钟后甩净,扣干。除空白孔外每孔加酶标记物一滴,37℃30分钟。同〔3各孔加显色液A、B液各一滴〔50微升,混匀,37℃避光显色10分钟,加终止液每孔50微升,混匀后用酶标仪450nm波长测OD值。[结果判断]以空白孔调零,450nm波长测定OD值。阳性对照值大于或等于0.25,阴性对照值小于或等于0.10证明实验成立。如阴性对照值小于0.07,按0.07计算,S/N值大于或等于3.0,则判为阳性〔即样品OD值大于或等于0.21判为阳性,如S/N值小于3.0则为阴性。S/N=待测样品OD值/阴性对照OD值平均值[临床意义]风疹病毒易感人群为1~5岁儿童和孕妇。据统计,孕妇感染风疹者多在怀孕1~6周时〔大于50%,除可致流产、死产、早产外,所生婴儿还可发生先天性风疹综合症。IgM抗体阳性提示为RUV急性感染。[注意事项]染菌、严重溶血或高血脂的待测样品可能引起错误结果,应重新采样。临床医生应结合临床症状进行诊断,并对抗体水平进行动态观察。确保样品稀释准确,请按此中方法进行稀释〔将样品稀释液1毫升加入一清洁小试管中,加10微升待测样品,充分混匀。不同批号试剂不可混用。标准操作程序项目巨细胞病毒抗体检测的标准操作程序〔IgG方法ELISA方法编写人周晓林日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-020文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室巨细胞病毒抗体检测的标准操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-020共1页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]采用ELISA间接抗体两步法测CMV,用CMV抗原包被反应板,加入待检样本后再加入酶标记第二抗体。加底物显色为阳性,证明标本中含CMV抗体,含量与显色程度成正比。[操作步骤]试剂盒放置室温20~30分钟。浓缩洗涤液用蒸馏水10倍稀释。将待测血清分别用试剂盒配套稀释液作1：100稀释〔将样品稀释液1毫升加入一清洁小试管中,加10微升待测样品,充分混匀。取包被板条固定在96孔板架上,分别加入上述稀释血清100微升每孔,同时设阴、阳性对照各2孔,每孔100微升,另留一孔不加任何液体为空白对照,置37℃30分钟。甩去孔内液体,用洗涤液洗3次,每次浸泡一分钟后甩净,扣干。除空白孔外每孔加酶标记物一滴,37℃30分钟。同〔3各孔加显色液A、B液各一滴〔50微升,混匀,37℃避光显色10分钟,加终止液每孔50微升,混匀后用酶标仪450nm波长测OD值。[结果判断]以空白孔调零,450nm波长测定OD值。阳性对照值大于或等于0.25,阴性对照值小于或等于0.10证明实验成立。如阴性对照值小于0.07,按0.07计算,S/N值大于或等于3.0,则判为阳性〔即样品OD值大于或等于0.21判为阳性,如S/N值小于3.0则为阴性。S/N=待测样品OD值/阴性对照OD值平均值[临床意义]巨细胞病毒IgG主要用于诊断巨细胞病毒继往感染,成人感染巨细胞病毒可引起肝炎、肺炎,孕妇感染后会造成胎儿受损,最终导致胎儿宫内死亡,新生儿感染会造成黄疸,血小板减少性紫癜、溶血性贫血、脑损伤。[注意事项]染菌、严重溶血或高血脂的待测样品可能引起错误结果,应重新采样。临床医生应结合临床症状进行诊断,并对抗体水平进行动态观察。确保样品稀释准确,请按此中方法进行稀释〔将样品稀释液1毫升加入一清洁小试管中,加10微升待测样品,充分混匀。不同批号试剂不可混用。标准操作程序项目巨细胞病毒抗体检测的标准操作程序〔IgM方法ELISA方法编写人周晓林日期2005/01/01审核人曹进平日期2005/01/01批准人陈健康日期2005/01/01文件分发部门和/或个人免疫室,医务科本规程自20XX01月01日起实施,每2年复审一次文件编号WHDEYY-JYK-MY-021文件版本号第1版医务科保管者院长办公室保管者院档案室保管者检验科主任实验室名称项目编号制定日期芜市第二民医院检验科免疫室巨细胞病毒抗体检测的标准操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-021共1页第1页2005-01-01[目的]保证检测结果准确可靠。[该SOP变动程序]本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。[标本的采取和保存]随机静脉血2ml,分离血清备用。也可以使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。[测定原理]采用ELISA间接抗体两步法测CMV,用CMV抗原包被反应板,加入待检样本后再加入酶标记第二抗体。加底物显色为阳性,证明标本中含CMV抗体,含量与显色程度成正比。[操作步骤]剂盒放置室温20~30分钟。浓缩洗涤液用蒸馏水10倍稀释。将待测血清分别用试剂盒配套稀释液作1：100稀释〔将样品稀释液1毫升加入一清洁小试管中,加10微升待测样品,充分混匀。取包被板条固定在96孔板架上,分别加入上述稀释血清100微升每孔,同时设阴、阳性对照各2孔,每孔100微升,另留一孔不加任何液体为空白对照,置37℃30分钟。甩去孔内液体,用洗涤液洗3次,每次浸泡一分钟后甩净,扣干。除空白孔外每孔加酶标记物一滴,37℃30分钟。同〔3各孔加显色液A、B液各一滴〔50微升,混匀,37℃避光显色10分钟,加终止液每孔50微升,混匀后用酶标仪450nm波长测OD值。[结果判断]以空白