全血胆碱脂酶测定精讲课件

全血胆碱酯酶活性的测定——三氯化铁比色法全血胆碱酯酶活性的测定——三氯化铁比色法1实验目的掌握全血ChE活性测定的意义掌握全血ChE活性测定原理、方法实验目的2方法Asch-DTNB比色法（GBZ52）三氯化铁比色法溴麝香草酚蓝（B·T·B）比色法纸片法Biocheck法（便携式分析仪）方法Asch-DTNB比色法（GBZ52）3全血胆碱脂酶测定精讲课件4三氯化铁比色法[原理]乙酰胆碱胆碱酯酶胆碱+乙酸碱性羟胺乙酰羟胺HClFeCl3羟肟酸铁(棕红色络合物)三氯化铁比色法[原理]乙酰胆碱胆碱酯酶胆碱+乙酸碱性羟胺乙酰5三氯化铁比色法[原理]血液中胆碱酯酶可使乙酰胆碱水解生成胆碱和乙酸，终止反应后，剩余的乙酰胆碱与碱性羟胺作用生成乙酰羟胺，然后在酸性环境中与三氯化铁反应生成棕红色羟肟酸铁络合物。其颜色深浅与乙酰胆碱的量成正比，在520nm进行比色定量，从而推算出胆碱脂酶活性。三氯化铁比色法[原理]血液中胆碱酯酶可使乙酰胆碱水解生成胆碱6实验器材一次性注射器(1ml)12个，采血用；微量移液器（20μl）；分光光度计；玻璃比色杯(每组至少3个)；擦镜纸；恒温水浴箱（37℃±0.5℃）移液管(0.2ml，1ml，5ml)；试管；漏斗；容量瓶

实验器材一次性注射器(1ml)12个，采血用；7试剂试剂均为分析纯，水为蒸镏水或去离子水。1．磷酸盐缓冲溶液，pH=7.2准确称取磷酸氢二钠(Na2HP04·12H2O)16.72g和磷酸二氢钾(KH2PO4)2.72g，用水溶解并稀释到1000ml，置4℃冰箱中保存。2．碱性羟胺溶液临用时将139g/L的盐酸羟胺溶液与140g/L的氢氧化钠溶液等体积混合。3．盐酸溶液1+2浓盐酸l份加水2份混合。

试剂试剂均为分析纯，水为蒸镏水或去离子水。8试剂4．三氯化铁溶液(100g/L)称取10g三氯化铁(FeCl3·6H2O)，加浓盐酸0.84ml，溶解后再加水至100ml，贮存于棕色瓶中。5．氯化乙酰胆碱标准溶液(1)标准贮备液：精确称取氯化乙酰胆碱1.2716g，用pH=7.2的磷酸盐缓冲液溶解并稀释至100ml。此溶液1ml含70μmol乙酰胆碱。置4℃冰箱内保存。(2)标准应用液：取标准贮备液用磷酸盐缓冲液稀释10倍。此液1ml含7μmol乙酰胆碱，于临用前配制。试剂4．三氯化铁溶液(100g/L)称取10g9[分析步骤]1.乙酰胆碱标准曲线的绘制2.样品测定[分析步骤]101.乙酰胆碱标准曲线的绘制（1）取六只具塞试管，配制不同浓度的乙酰胆碱溶液管号123456乙酰胆碱标准应用液（ml）00.20.40.60.81.0磷酸盐缓冲液（ml）21.81.61.41.21.0乙酰胆碱含量（μmol）01.42.84.25.67.0（2）各管加碱性羟胺4ml，立即振摇2min（3）各管加1∶2盐酸溶液2ml，振摇2min（4）各管加10%三氯化铁溶液2ml，摇匀，过滤（5）测吸光度:λ=520nm，参比管-第1管（6）绘制标准曲线1.乙酰胆碱标准曲线的绘制管号123456乙酰胆碱标准应用液11全血胆碱脂酶测定精讲课件122.样品测定A管（样品管）B管（对照管）0.98ml磷酸缓冲液0.98ml磷酸缓冲液20μl血20μl血37℃水浴5min碱性羟胺4ml,振3min乙酰胆碱标准应用液1ml乙酰胆碱标准应用液1ml37℃水浴30min（准确计时）碱性羟胺4ml,振3min1∶2盐酸溶液2ml,摇1min10%三氯化铁溶液2ml摇匀、过滤、比色2.样品测定A管（样品管）B管（对照管）0.98ml磷酸缓13计算1.被水解的乙酰胆碱吸光度=对照管吸光度（B管）－样品管吸光度（A管）2.对照标准曲线，得出被水解的乙酰胆碱(μmol)---即0.02ml血经37℃，30min反应条件下的

胆碱酯酶活性绝对值C计算1.被水解的乙酰胆碱吸光度=143.胆碱酯酶活性相对值（%）浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值男：3.22±0.336μmol女：3.19±0.398μmol3.胆碱酯酶活性相对值（%）浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值15注意事项采血前先准备好试管，加入磷缓采血时严格消毒，用过的棉球、刺针集中放置准确控制水浴温度和放置时间加三氯化铁显色后，在20min内比色参比管的溶液留用到最后注意事项采血前先准备好试管，加入磷缓16实验报告要求[实验目的][实验原理][实验步骤][实验结果][分析与讨论]实验报告要求[实验目的]17全血胆碱酯酶活性的测定——三氯化铁比色法全血胆碱酯酶活性的测定——三氯化铁比色法18实验目的掌握全血ChE活性测定的意义掌握全血ChE活性测定原理、方法实验目的19方法Asch-DTNB比色法（GBZ52）三氯化铁比色法溴麝香草酚蓝（B·T·B）比色法纸片法Biocheck法（便携式分析仪）方法Asch-DTNB比色法（GBZ52）20全血胆碱脂酶测定精讲课件21三氯化铁比色法[原理]乙酰胆碱胆碱酯酶胆碱+乙酸碱性羟胺乙酰羟胺HClFeCl3羟肟酸铁(棕红色络合物)三氯化铁比色法[原理]乙酰胆碱胆碱酯酶胆碱+乙酸碱性羟胺乙酰22三氯化铁比色法[原理]血液中胆碱酯酶可使乙酰胆碱水解生成胆碱和乙酸，终止反应后，剩余的乙酰胆碱与碱性羟胺作用生成乙酰羟胺，然后在酸性环境中与三氯化铁反应生成棕红色羟肟酸铁络合物。其颜色深浅与乙酰胆碱的量成正比，在520nm进行比色定量，从而推算出胆碱脂酶活性。三氯化铁比色法[原理]血液中胆碱酯酶可使乙酰胆碱水解生成胆碱23实验器材一次性注射器(1ml)12个，采血用；微量移液器（20μl）；分光光度计；玻璃比色杯(每组至少3个)；擦镜纸；恒温水浴箱（37℃±0.5℃）移液管(0.2ml，1ml，5ml)；试管；漏斗；容量瓶

实验器材一次性注射器(1ml)12个，采血用；24试剂试剂均为分析纯，水为蒸镏水或去离子水。1．磷酸盐缓冲溶液，pH=7.2准确称取磷酸氢二钠(Na2HP04·12H2O)16.72g和磷酸二氢钾(KH2PO4)2.72g，用水溶解并稀释到1000ml，置4℃冰箱中保存。2．碱性羟胺溶液临用时将139g/L的盐酸羟胺溶液与140g/L的氢氧化钠溶液等体积混合。3．盐酸溶液1+2浓盐酸l份加水2份混合。

试剂试剂均为分析纯，水为蒸镏水或去离子水。25试剂4．三氯化铁溶液(100g/L)称取10g三氯化铁(FeCl3·6H2O)，加浓盐酸0.84ml，溶解后再加水至100ml，贮存于棕色瓶中。5．氯化乙酰胆碱标准溶液(1)标准贮备液：精确称取氯化乙酰胆碱1.2716g，用pH=7.2的磷酸盐缓冲液溶解并稀释至100ml。此溶液1ml含70μmol乙酰胆碱。置4℃冰箱内保存。(2)标准应用液：取标准贮备液用磷酸盐缓冲液稀释10倍。此液1ml含7μmol乙酰胆碱，于临用前配制。试剂4．三氯化铁溶液(100g/L)称取10g26[分析步骤]1.乙酰胆碱标准曲线的绘制2.样品测定[分析步骤]271.乙酰胆碱标准曲线的绘制（1）取六只具塞试管，配制不同浓度的乙酰胆碱溶液管号123456乙酰胆碱标准应用液（ml）00.20.40.60.81.0磷酸盐缓冲液（ml）21.81.61.41.21.0乙酰胆碱含量（μmol）01.42.84.25.67.0（2）各管加碱性羟胺4ml，立即振摇2min（3）各管加1∶2盐酸溶液2ml，振摇2min（4）各管加10%三氯化铁溶液2ml，摇匀，过滤（5）测吸光度:λ=520nm，参比管-第1管（6）绘制标准曲线1.乙酰胆碱标准曲线的绘制管号123456乙酰胆碱标准应用液28全血胆碱脂酶测定精讲课件292.样品测定A管（样品管）B管（对照管）0.98ml磷酸缓冲液0.98ml磷酸缓冲液20μl血20μl血37℃水浴5min碱性羟胺4ml,振3min乙酰胆碱标准应用液1ml乙酰胆碱标准应用液1ml37℃水浴30min（准确计时）碱性羟胺4ml,振3min1∶2盐酸溶液2ml,摇1min10%三氯化铁溶液2ml摇匀、过滤、比色2.样品测定A管（样品管）B管（对照管）0.98ml磷酸缓30计算1.被水解的乙酰胆碱吸光度=对照管吸光度（B管）－样品管吸光度（A管）2.对照标准曲线，得出被水解的乙酰胆碱(μmol)---即0.02ml血经37℃，30min反应条件下的

胆碱酯酶活性绝对值C计算1.被水解的乙酰胆碱吸光度=313.胆碱酯酶活性相对值（%）浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值男：3.22±0.336μmol女：3.19±0.3