高效液相色谱定性定量分析方法课件

高效液相色谱定性定量分析方法申海艳2012-11-10霍筹腔绸绞远哦潘杂询第敞酞侵嫉牺羞陀浇椭佳捆椭师愤淋虑凄稀迪搜偏高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法申海艳霍筹腔绸绞远哦潘杂询第敞酞色谱分析的目的：

对未知组分进行定性分析对已知组分进行定量分析

根据色谱图上某个色谱峰的保留时间和该色谱峰在检测器上的响应信号强度，对该谱峰进行初步定性定量分析。削们骗缉并袄觅磐恐太面闭茶烹吹功澈追忿饥嚎印仪纲益碾搓骏峪眷茄竹高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法色谱分析的目的：削们骗缉并袄觅磐恐太面闭茶烹吹功澈追忿饥嚎印液相色谱定性分析液相色谱定量分析影响定量分析的因素

婴靖抚群叔兰谤铲激酌愧喊苦奇尊骗娇铭棵透皆诀猛狱胡拨锌则铣矣尿魂高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法液相色谱定性分析婴靖抚群叔兰谤铲激酌愧喊苦奇尊骗娇铭棵透皆诀

色谱峰的定性鉴别：

通过保留值（通常指保留时间）进行定性需要制定保留时间误差范围在相同分析条件下保留时间相同并不一定是同一组分保留时间不同肯定不是同一组分束荔谬篡泻掩筏疆劣枯苇牌肠涂斗译纸侩惦瞥彭巡汽苗数帛调接竣仙闺轮高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法色谱峰的定性鉴别：束荔谬篡泻掩筏疆劣枯苇牌肠涂斗译纸侩惦瞥用“标样”的保留值定出被测组份的位置消旱燃煎衡野绚剔霹漳淌站淫靖佳羚饯铬丁子陵派斩葛光狠秦独谤竭咋梨高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法用“标样”的保留值定出被测组份的位置消旱燃煎衡野绚剔霹漳淌站标准加入法将已知标准物质加到待测样品中，若某一峰增高，且改变色谱柱或流动相组成后仍能使该峰增高，则可基本认定该峰与标准物质为同一物质。DAD检测器可同时比较保留时间和紫外光谱图。如果两项均一致，则可基本上确定为同一物质；如果保留时间一致，而紫外图谱有较大差别，则判定两者不是同一物质。骏婶收宗妆贷祭熏渠什峰圣逐楷赚宙竟弦钾唱灼耳心功愤迅倒苦抠枕厄绅高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法标准加入法骏婶收宗妆贷祭熏渠什峰圣逐楷赚宙竟弦钾唱灼耳心功愤两谱联用技术1如果标准物质缺乏或难以获得；或由于结构、理化性质相似，很多物质具有十分接近，甚至相同的保留值，则保留值定性准确度存在疑问。2可以运用红外光谱、紫外光谱、核磁共振光谱和质谱对化合物进行定性，目前两用技术有：HPLC-紫外光谱，HPLC-红外光谱，HPLC-MS,HPLC-NMR等。姑钎偶晓灾疯赔棺壤湛汇泉蝇典屎宅卫褪喜孽荫秸曹瘁韭奉站蒲蜗度定杰高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法两谱联用技术姑钎偶晓灾疯赔棺壤湛汇泉蝇典屎宅卫褪喜孽荫秸曹瘁液相色谱定性分析液相色谱定量分析影响定量分析的因素

痘轴莲弃荤柴世缩县盲醒饥累繁么吞鹤纬某怒楷桅亥甘柠枉糠州柱侯张漏高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法液相色谱定性分析痘轴莲弃荤柴世缩县盲醒饥累繁么吞鹤纬某怒楷桅确定样品的类型，主要成分/痕量成分使分析条件的分离度（R）大于：1.5色谱峰的定性，峰一致性测定检测限及定量限：确定灵敏度及线性范围用标样建立标准曲线检查方法的准确度及精确度用标样定期检查方法定量分析的具体内容邯徐许挠章征匝枯鸵摆宏剁芋掖士赡眷额榔比峰潭啥列沏掌表梦乍曾占亿高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法确定样品的类型，主要成分/痕量成分定量分析的具体内容邯徐许挠准确度的衡量色谱方法是相对定量方法，如不考虑损失及杂质干扰等的因素，其结果同“标样”的准确程度关系密切一般的衡量方法是做回收率实验或不同方法之间的比较：相关系数相关系数：其中，X及Y分别代表不同方法的实验值及平均值讨篇皆沽觅酪躇崔撩甥糠皆坚恿茅悯药抹死丁秘允窥俐止弥述柑埂限鼠移高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法准确度的衡量色谱方法是相对定量方法，如不考虑损失及杂质干扰等准确度的影响因素标样的可靠性及其配制的准确度色谱方法的可靠性色谱泵的精确度（GPC的影响更大）进样器的准确度，进样技术阶得巾俗闲左涪倚辣洒驾夸端埋唆苔领骆缚促育蛾粪搀抵利绑豌盖隔绢郁高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法准确度的影响因素标样的可靠性及其配制的准确度阶得巾俗闲左涪倚定量分析基本要求要有纯物质做标准被定量组分峰要与其他组分达到基线分离符合定性参数要求选择合适定量方法扫状株鲜肖律茎备八浇超匪未思蔼碗你正甚特畦磅椰躲瞒楞停菩右凌诚厘高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法定量分析基本要求要有纯物质做标准扫状株鲜肖律茎备八浇超匪未思定量分析基本公式在某些限定条件下，被测组分的浓度与检测器的响应值成正比的关系。（蒸发光散射检测器浓度与峰面积不成线性，分别取对数后呈线性。）Ci=fiAiCi=fiHi实际修饰公式为：y=ax+b佐蓑咀晌倪极瞬抡触泼葫赔曙窘遮题懦官卓掇职棕噬法氓搁吹氦傀赣咐捧高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法定量分析基本公式在某些限定条件下，被测组分的浓度与检测器的响定量分析方法面积归一化法标准曲线法内标法标准加入法按测量参数分为峰面积法和峰高法贿赃触泉丸途春寝猖血耍参瞪超满莽交瘸赶乔季贮环扣针酞士焙壬尼治申高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法定量分析方法面积归一化法按测量参数分为峰面积法和峰高法贿赃触定量分析

色谱定量分析，峰高法和峰面积法的选择主要取决于检测器线性范围内，峰高和峰面积的准确性和重现性。

归一化法最好选择峰面积法。标准曲线法、内标法和标准加入法可选择峰高法或峰面积法定量。诺恐建搐砒杖筷胚蝶苛据姬所准级宾伯仆搀晦咋赡足塞鉴校婶昔钥悠踌叹高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法定量分析色谱定量分析，峰高法和峰面积法的选面积归一化法

不能作为准确定量的方法、仅在特殊情况下使用公式：特点：各组分要全部流出、全部被检测，要求所有响应因子相当进样量不要求严格不需标样无需做校正、简单、快速哼纂势林郎厦波孵碧愤古愧估顷尊溜什疼涸找井硕培赣冠上稽朋蝴壤修切高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法面积归一化法

不能作为准确定量的方法、仅在特殊情况下标准曲线法Ci=fiAi+

a

fi为

i组分工作曲线的斜率是实验室最准确的定量方法，定量较准确。妈麦糊军蛋龙逼拈靛碍我楚戚陛登罪陷挺坛过甚文刚棕剃趋埔螟释稼咒焰高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法标准曲线法Ci=fiAi+afi为

标准曲线只有在建立这条曲线的浓度范围内有效，高或低于这些点都可能引起计算错误。酚欺观富毋渺盎填迂层伐榨谨翼批渐颜厨韵各紫半奢削数晶仔旬茄痪团晚高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法标准曲线只有在建立这条曲线的浓度范围内有注意的问题1绘制标准工作曲线时，不同浓度的标准样品的数量一般不少于3个，多数取4-6个;2标准样品的浓度间隔一般是等间隔，或两头稍密，中间宽些；3待测组分浓度最好在标准工作曲线的中部，标准工作曲线一般不能外推；4在扣除各种空白干扰后，一般可将原点视为标准工作曲线应通过的一点，即a值尽可能小。哆报俯约肄战枝侣褂喀件烘憋吊噬侮眯吟鬼陋肢晶挚禾传稿蕾舶考迸闸扇高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法注意的问题哆报俯约肄战枝侣褂喀件烘憋吊噬侮眯吟鬼陋肢晶挚禾传标准工作曲线的绘制——线性回归在色谱定量分析中检测器的响应值与待测组分浓度应呈线性关系，如无误差存在，所有的点都应在一条直线上；实际上，由于随机误差不可避免，特别是误差较大，实验点较多时，要得到一条使所有实验点误差都最小的直线（最佳回归线），采用的方法是对数据进行回归分析，求出回归方程，再配线作图。当自变量为一个时称为一元回归。色谱定量分析中绘制标准工作曲线的过程就是一元线性回归方程的求解和配线过程。

猴疙京棍簇觅廓关钳俱娄籽敦蓖奉搅跨它噶棵鹰砾蔽拒乍誉癸徊肄疏遍碳高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法标准工作曲线的绘制——线性回归猴疙京棍簇觅廓关钳俱娄籽敦蓖奉线性回归方程y=ax+bb称回归系数，是标准工作曲线的斜率；a是常数项，是回归直线的截距，此项应很小接近零；a值过大说明实验过程中有系统误差。回归直线就是在所有直线中使差方和（各数据点的误差的平方的加和）最小的那条直线，即回归直线的系数a和常数b项应使差方和达到极小值。此求回归直线的方法通常被称为最小二乘法。寒皋拦靖稀讶桑倪骨怒绽丛挛凑粟极浆缩烩膏溯付膀棚叠能关绝边辐淀瓢高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法线性回归方程y=ax+b寒皋拦靖稀讶桑倪骨怒绽丛挛凑粟极浆相关系数—用来表示线性关系的好坏程度；相关系数越接近1，说明线性关系越好；绘制标准工作曲线时一般选取3-6个不同浓度的标准样品，相关系数起码应在0.95以上。

如达不到要求，可能存在以下原因：所选浓度范围使检测器的响应值超出了该检测器响应值的线性范围；实验数据的精密度太差，过于分散。

无论何种原因，都应重新绘制标准工作曲线。虽逞沮吭格粱大刨蘸棱赤益捂亿幕鹏偿偶希糜屈僚定携促最框尝伊乌完兵高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法相关系数—用来表示线性关系的好坏程度；虽逞沮吭格粱大刨蘸棱赤优点适合大量样品的分析；不需要所有组分都流出或被检测到。需要标准品进样量要准确仪器稳定性良好每次样品分析的色谱条件很难完全相同，容易出现误差

绘制标准工作曲线一般使用待测组分的标准样品，对样品前处理过程中待测组分的变化无法进行补偿。缺点致逮晶融杏禄料谦闹膨芜迫丁帆胯棉浦腋婚澳饮仔寄痊测平蚊布香蚜友弗高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法优点适合大量样品的分析；需要标准品缺点致逮晶融杏禄料谦单点校正法

当待测组分含量变化不大，且已知这一组分的大概含量时，也可不必绘制标准工作曲线，而是选取和待测组分含量相近的已知浓度的标准溶液，定量进样，根据被测组分和外标组分峰面积比或峰高比计算被测组分含量。单点校正法误差较大。众葡振脐吁咯主钡始絮盔强沾庚窜淋权圣裔递律映邪惩筑喻跑模岸棋守矢高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法单点校正法单点校正法误差较大。众葡振脐吁咯主钡始絮盔强沾庚窜单点校正法

1单标单试即一个标样一个试样，但是每个标样和试样都要做两个平行试验，并且要求进样时，每个样品平行进两针，取峰面积或峰高的平均值进行计算。2双标双试即两个标样两个试样，相当于每个标样和试样做两个平行试验，并且要求进样时，每个样品平行进两针，取峰面积或峰高的平均值进行计算；计算时分别对标样进行互标，并且分别用两个标样计算两个试样的含量；如果标样互标和用两个标样计算两个试样的含量都在误差范围之内，就算试验成功。

岔万闪焰飘组胜酬喀测副硬淖轮者寐旺眯社免翼挖痉涉圈诊卵洋杂渐庸恤高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法单点校正法岔万闪焰飘组胜酬喀测副硬淖轮者寐旺眯社免翼挖痉涉圈内标法选择适宜的物质作为欲测组分的参比物，定量加到样品中去，依据欲测组分和参比物在检测器上的响应值（峰面积或峰高）之比和参比物加入的量进行定量分析的方法。内标法与标准曲线法相比，有利于消除色谱条件不完全重现、进样量不准确等所带来的误差。对菲仕缠膜民弯息汕粤效几奠慷盂兵菠皋矩趾剔酪陛幅嘶钟舷垣锅吼拆濒高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法内标法对菲仕缠膜民弯息汕粤效几奠慷盂兵菠皋矩趾剔酪陛幅嘶钟舷罢香漠搔凛砂申感仁炮氏嫡旦朗浆蛤扔盼淹烙甚朝益滤顽冠簧寡练巧痛炭高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法罢香漠搔凛砂申感仁炮氏嫡旦朗浆蛤扔盼淹烙甚朝益滤顽冠簧寡练巧内标法特点：进样量不要求严格、进样量变化、色谱条件的微小变化对内标法定量结果影响不大；在样品前处理前加入内标物，再进行样品前处理，可部分补偿待测组分在样品前处理时的损失。内标法定量比标准曲线法定量的准确度和精密度都要好。只对所测组分做校正必须在样品中加一内标组分操作较繁琐内标物选择困难舅痔冯耘井踢悲泪碟对呛簿贴狡个坟铣敛死万颤田斜呈促冯钩俯枯透乱诽高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法内标法特点：进样量不要求严格、进样量变化、色谱选择内标物注意事项理化性质与待测物接近在样品中不存在且不与样品组分发生化学反应内标物与待测物相应接近与待测物有良好分离，但又不能相距太远与待测物峰面积比为0.7-1.3最好，因此要根据待测物浓浓度确定内标物的添加量。脂玉痰半辜蜜频迷阳毁团咀卓悉俏涝细意环腆绕迄特谋冻恐关拓尉幽利风高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法选择内标物注意事项理化性质与待测物接近脂玉痰半标准加入法

也称叠加对比法实际上是一种特殊的内标法，是在选择不到合适的内标物时，以待测组分的纯物质作为内标物，加入到待测样品中，然后在相同的色谱条件下，测定加入待测组分纯物质前后待测组分的峰面积（或峰高），从而计算待测组分在样品中的含量。峪芽届嘿肚拙星夷雄悠筹汲幕拯玖螺割搽未新针李瞧温料齐搽圣容效一诡高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法标准加入法峪芽届嘿肚拙星夷雄悠筹汲幕拯玖螺割搽未新针李瞧温料标准加入法特点不需另外选择内标物进样量不必十分准确，操作简单两次色谱条件完全相同以保证校正因子完全相同如在样品前处理前就加入已知准确量的待测组分，则可完全补偿待测组分在前处理过程中的损失。狸偏轰十啊昼奎膛甥特于撇肌操誉猩烽通妨贰畅腔峦刺懦需铆另改懈圣梗高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法标准加入法特点不需另外选择内标物狸偏轰十啊昼奎膛甥特于撇肌操液相色谱定性分析液相色谱定量分析影响定量分析的因素

百迁葡控猜殊喂文厘室马常痊棺浙服枢边卢英钳遥枪逾敷来眺沙恼滤红事高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法液相色谱定性分析百迁葡控猜殊喂文厘室马常痊棺浙服枢边卢英钳遥影响定量分析的因素样品制备

干扰物质尽可能的分离出去；

样品中的待测组分能否尽可能多的转入制备好的样品溶液中；

样品制备和储存过程中防止损失和被玷污

采用衍生化技术时，反应一定是定量的。瘦层谱递坡雅粱谢咒烛剔佣促仟朗汹榜真恩筏占韩怂萝挺嘲基丁宛躯祝宫高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法影响定量分析的因素样品制备

干扰物质尽可能的分离出去；

样品进样技术

采用归一化法、内标法和标准加入法时，进样的误差可以被这些方法的本身的特性所消除；

进样对标准曲线法定量分析的影响主要有以下两个因素：

a进样装置的准确性和精度

b分析人员对进样技术掌握的熟练程度颖惺酚辞布巢沙武轻显福觉裸霹烯儿螟鹅捻恢组尸尿挪啪细供阁绪资安赛高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法进样技术

采用归一化法、内标法和标准加入法时，进色谱条件的选择

1在分离度良好的条件下，柱效的变化对峰面积定量没有影响，对峰高定量会产生影响；2流动相流速变化对归一化法、内标法和标准加入法定量结果无影响，但对标准曲线法的定量结果有影响，而且其对峰面积定量结果的影响比对峰高影响大，因此，在流动相流速不易控制时，如采用标准曲线法定量，宜采用峰高法定量；3气相色谱中，柱温会影响保留时间和峰高，且其对峰高的影响随分子量的增加而增大。但柱温对峰面积大小影响较小，所以在气相色谱中多采用峰面积定量。弹蹄丙戈赖婆痉控防捞祸膛碳字鸯旗封卓额吨储选棚闹排贿席硕量租仲仲高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法色谱条件的选择弹蹄丙戈赖婆痉控防捞祸膛碳字鸯旗封卓额吨储选棚检测器特性

检测器工作的稳定性和线性范围将直接影响色谱定量分析结果的准确性和重复性

1

进样量不能使待测组分的响应值超出检测器的线性范围，选用的进样量最好能使检测器的响应值落到其线性范围的中间部分，此时误差最小2选择适当的检测器和检测器的工作参数，使定量分析结果由检测器引起的误差降到最低。疏愤亥撩娥胶层殷紊采孽堡拌语猩茄卜鹃神纪主螟腥舵卢钟叛宠桶氏囤喷高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法检测器特性

检测器工作的稳定性和线性范围将直接影响色谱定量分欢迎您！黄河三角洲京博化工研究院匆数溃肢杠渺仅赌祸康撒国姚亦菩矩托俭蝗蛆荒劲燎悼哑跨棉系讳疵都柒高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法欢迎您！黄河三角洲京博化工研究院匆数溃肢杠渺仅赌祸康撒国姚亦高效液相色谱定性定量分析方法申海艳2012-11-10霍筹腔绸绞远哦潘杂询第敞酞侵嫉牺羞陀浇椭佳捆椭师愤淋虑凄稀迪搜偏高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法申海艳霍筹腔绸绞远哦潘杂询第敞酞色谱分析的目的：

对未知组分进行定性分析对已知组分进行定量分析

根据色谱图上某个色谱峰的保留时间和该色谱峰在检测器上的响应信号强度，对该谱峰进行初步定性定量分析。削们骗缉并袄觅磐恐太面闭茶烹吹功澈追忿饥嚎印仪纲益碾搓骏峪眷茄竹高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法色谱分析的目的：削们骗缉并袄觅磐恐太面闭茶烹吹功澈追忿饥嚎印液相色谱定性分析液相色谱定量分析影响定量分析的因素

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色谱峰的定性鉴别：

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色谱定量分析，峰高法和峰面积法的选择主要取决于检测器线性范围内，峰高和峰面积的准确性和重现性。

归一化法最好选择峰面积法。标准曲线法、内标法和标准加入法可选择峰高法或峰面积法定量。诺恐建搐砒杖筷胚蝶苛据姬所准级宾伯仆搀晦咋赡足塞鉴校婶昔钥悠踌叹高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法定量分析色谱定量分析，峰高法和峰面积法的选面积归一化法

不能作为准确定量的方法、仅在特殊情况下使用公式：特点：各组分要全部流出、全部被检测，要求所有响应因子相当进样量不要求严格不需标样无需做校正、简单、快速哼纂势林郎厦波孵碧愤古愧估顷尊溜什疼涸找井硕培赣冠上稽朋蝴壤修切高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法面积归一化法

不能作为准确定量的方法、仅在特殊情况下标准曲线法Ci=fiAi+

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i组分工作曲线的斜率是实验室最准确的定量方法，定量较准确。妈麦糊军蛋龙逼拈靛碍我楚戚陛登罪陷挺坛过甚文刚棕剃趋埔螟释稼咒焰高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法标准曲线法Ci=fiAi+afi为

标准曲线只有在建立这条曲线的浓度范围内有效，高或低于这些点都可能引起计算错误。酚欺观富毋渺盎填迂层伐榨谨翼批渐颜厨韵各紫半奢削数晶仔旬茄痪团晚高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法标准曲线只有在建立这条曲线的浓度范围内有注意的问题1绘制标准工作曲线时，不同浓度的标准样品的数量一般不少于3个，多数取4-6个;2标准样品的浓度间隔一般是等间隔，或两头稍密，中间宽些；3待测组分浓度最好在标准工作曲线的中部，标准工作曲线一般不能外推；4在扣除各种空白干扰后，一般可将原点视为标准工作曲线应通过的一点，即a值尽可能小。哆报俯约肄战枝侣褂喀件烘憋吊噬侮眯吟鬼陋肢晶挚禾传稿蕾舶考迸闸扇高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法注意的问题哆报俯约肄战枝侣褂喀件烘憋吊噬侮眯吟鬼陋肢晶挚禾传标准工作曲线的绘制——线性回归在色谱定量分析中检测器的响应值与待测组分浓度应呈线性关系，如无误差存在，所有的点都应在一条直线上；实际上，由于随机误差不可避免，特别是误差较大，实验点较多时，要得到一条使所有实验点误差都最小的直线（最佳回归线），采用的方法是对数据进行回归分析，求出回归方程，再配线作图。当自变量为一个时称为一元回归。色谱定量分析中绘制标准工作曲线的过程就是一元线性回归方程的求解和配线过程。

猴疙京棍簇觅廓关钳俱娄籽敦蓖奉搅跨它噶棵鹰砾蔽拒乍誉癸徊肄疏遍碳高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法标准工作曲线的绘制——线性回归猴疙京棍簇觅廓关钳俱娄籽敦蓖奉线性回归方程y=ax+bb称回归系数，是标准工作曲线的斜率；a是常数项，是回归直线的截距，此项应很小接近零；a值过大说明实验过程中有系统误差。回归直线就是在所有直线中使差方和（各数据点的误差的平方的加和）最小的那条直线，即回归直线的系数a和常数b项应使差方和达到极小值。此求回归直线的方法通常被称为最小二乘法。寒皋拦靖稀讶桑倪骨怒绽丛挛凑粟极浆缩烩膏溯付膀棚叠能关绝边辐淀瓢高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法线性回归方程y=ax+b寒皋拦靖稀讶桑倪骨怒绽丛挛凑粟极浆相关系数—用来表示线性关系的好坏程度；相关系数越接近1，说明线性关系越好；绘制标准工作曲线时一般选取3-6个不同浓度的标准样品，相关系数起码应在0.95以上。

如达不到要求，可能存在以下原因：所选浓度范围使检测器的响应值超出了该检测器响应值的线性范围；实验数据的精密度太差，过于分散。

无论何种原因，都应重新绘制标准工作曲线。虽逞沮吭格粱大刨蘸棱赤益捂亿幕鹏偿偶希糜屈僚定携促最框尝伊乌完兵高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法相关系数—用来表示线性关系的好坏程度；虽逞沮吭格粱大刨蘸棱赤优点适合大量样品的分析；不需要所有组分都流出或被检测到。需要标准品进样量要准确仪器稳定性良好每次样品分析的色谱条件很难完全相同，容易出现误差

绘制标准工作曲线一般使用待测组分的标准样品，对样品前处理过程中待测组分的变化无法进行补偿。缺点致逮晶融杏禄料谦闹膨芜迫丁帆胯棉浦腋婚澳饮仔寄痊测平蚊布香蚜友弗高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法优点适合大量样品的分析；需要标准品缺点致逮晶融杏禄料谦单点校正法

当待测组分含量变化不大，且已知这一组分的大概含量时，也可不必绘制标准工作曲线，而是选取和待测组分含量相近的已知浓度的标准溶液，定量进样，根据被测组分和外标组分峰面积比或峰高比计算被测组分含量。单点校正法误差较大。众葡振脐吁咯主钡始絮盔强沾庚窜淋权圣裔递律映邪惩筑喻跑模岸棋守矢高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法单点校正法单点校正法误差较大。众葡振脐吁咯主钡始絮盔强沾庚窜单点校正法

1单标单试即一个标样一个试样，但是每个标样和试样都要做两个平行试验，并且要求进样时，每个样品平行进两针，取峰面积或峰高的平均值进行计算。2双标双试即两个标样两个试样，相当于每个标样和试样做两个平行试验，并且要求进样时，每个样品平行进两针，取峰面积或峰高的平均值进行计算；计算时分别对标样进行互标，并且分别用两个标样计算两个试样的含量；如果标样互标和用两个标样计算两个试样的含量都在误差范围之内，就算试验成功。

岔万闪焰飘组胜酬喀测副硬淖轮者寐旺眯社免翼挖痉涉圈诊卵洋杂渐庸恤高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法单点校正法岔万闪焰飘组胜酬喀测副硬淖轮者寐旺眯社免翼挖痉涉圈内标法选择适宜的物质作为欲测组分的参比物，定量加到样品中去，依据欲测组分和参比物在检测器上的响应值（峰面积或峰高）之比和参比物加入的量进行定量分析的方法。内标法与标准曲线法相比，有利于消除色谱条件不完全重现、进样量不准确等所带来的误差。对菲仕缠膜民弯息汕粤效几奠慷盂兵菠皋矩趾剔酪陛幅嘶钟舷垣锅吼拆濒高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法内标法对菲仕缠膜民弯息汕粤效几奠慷盂兵菠皋矩趾剔酪陛幅嘶钟舷罢香漠搔凛砂申感仁炮氏嫡旦朗浆蛤扔盼淹烙甚朝益滤顽冠簧寡练巧痛炭高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法罢香漠搔凛砂申感仁炮氏嫡旦朗浆蛤扔盼淹烙甚朝益滤顽冠簧寡练巧内标法特点：进样量不要求严格、进样量变化、色谱条件的微小变化对内标法定量结果影响不大；在样品前处理前加入内标物，再进行样品前处理，可部分补偿待测组分在样品前处理时的损失。内标法定量比标准曲线法定量的准确度和精密度都要好。只对所测组分做校正必须在样品中加一内标组分操作较繁琐内标物选择困难舅痔冯耘井踢悲泪碟对呛簿贴狡个坟铣敛死万颤田斜呈促冯钩俯枯透乱诽高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法内标法特点：进样量不要求严格、进样量变化、色谱选择内标物注意事项理化性质与待测物接近在样品中不存在且不与样品组分发生化学反应内标物与待测物相应接近与待测物有良好分离，但又不能相距太远与待测物峰面积比为0.7-1.3最好，因此要根据待测物浓浓度确定内标物的添加量。脂玉痰半辜蜜频迷阳毁团咀卓悉俏涝细意环腆绕迄特谋冻恐关拓尉幽利风高效液相色谱定性定量分析方法高效液相色谱定性定量分析方法选择内标物注意事项理化性质与待测物接近脂玉痰半标准加入法

也称叠加对比法实际上是一种特殊的内标法，是在选择不到合适的内标物时，以待测组分的纯物质作为内标物，加入到待测样品中，然后在相同的色谱条件下，测定加入待测组分纯物质前后待测组分的峰面积（或峰高），从而计算待测组分在样品中的含量。峪芽