山楂的降血脂有效部位提取及其滴丸制备工艺研究分析 中药学专业

山楂的降血脂有效部位提取及其滴丸制备工艺研究中文摘要工作包括：采用乙醇提取－大孔树脂精制的方法提取山楂叶中的总黄酮。对其中的乙D-101用稀碱的浓度，对确定的工艺进行了初步验证。建立了硝酸铝比色法测定山楂总黄酮含量、香草醛－高氯酸比色法测定山定山楂黄酮提取部位中金丝桃苷和牡荆素-2”-O-鼠李糖苷含量，双波长薄层色谱扫描法测定三萜酸提取部位中熊果酸含量的方法。条件的优选，对确定的工艺进行了验证。通过以上研究，同时使用了山楂中黄酮类和三萜酸类有效成分制备滴丸，有效利用了山楂资源，提高了山楂类制剂的技术水平。关键词：山楂；制备工艺；质量标准；滴丸；大孔树脂ABSTRACTNowdrugsmadefromHawthornaredroppingbehind.MostofthemonlycomposedbytheFlavonoids.Sothecurativeeffectsofthedrugsisnotgetthebest.Inthestudies,flavonoidsandtriterpenicacidsinHawthornareusedtomakeanewdrug.TheFlavonoidsoftheleaves(FEL)andthetriterpenicacidsoftheberries(TAEB)wereextracted,isolatedbymacroporousresin,acid,alkali,etc.ThenadroppingpillwasmadefromflavonoidsandtriterpenicacidsinHawthorn.Theflavonoidswereextrcatedbyethanolandisolatedbymacroporousresin.ThemaininfluencefactorsofethanolextractionweredefinedbyUniformdesign.Foundouttheoptimumextractionprocessfortotal-FlavonoidsofHawthorn.Forthefirsttime,studiesonthemechanismandfactorsofisolatingFlavonoidsbymacroporousresin.Thetriterpenicacidswereextractedbyethanolandisolatedbyacidandalkali.Themaininfluencefactorsofethanolextractionweredefinedbyorthogonaldesign.Theconcentrationsofacidandalkaliweredefined.Themethodsofcolorimetrytodeterminingflavonoids’contentusingaluminiumnitrate,triterpenicacids’contentusingaceticacid-vanillinwereestablished.TheflavonoidswereidentifiedbyTLC.Hyperosideandvitexin-2”-o-rhamnosidewerequantitativelyanalyzedbyHPLC.Ursolicacidwerequantitativelyanalyzedbydual-wavelenghtTLCscan.MoreoversandsftheflavonoidsandtriterpenicacidsinHawthornwereexplored.ThestabilitiesoftheflavonoidsandtriterpenicacidsinHawthornandinteractionswithmaterialswerestudied.Finallytheprescriptionsofthedrugweredetermined,thepreparationprocessesweredefinedbyorthogonaldesign.TherehasasystematicalreasearchoftheflavonoidsandtriterpenicacidsinHawthorn.Anewdosageformwasmadebytheflavonoidsandtriterpenicacids.ThestudiesimprovedthetechnicallevelsofdrugsmadefromHawthorn.Keyresin目 录前 言 1第一章综 述 2山楂的研究概述 2山楂来源 2山楂的化学成分 3山楂的药理作用 4山楂总黄酮类研究 7滴丸研究的概述 8高脂血症的药物研究概述和研究展望 10高脂血症概述 10目前临床上常用的药物简述如下： 10中药的研究展望： 12本文主要研究工作和创新点 12第二章指标性成分测定方法的研究 14山楂叶黄酮的薄层色谱法鉴别 14试验仪器和药品 14溶液的制备 14薄层层析 14比色法测定山楂叶总黄酮的含量 15实验仪器和药品 16实验方法 16实验条件的优选 162.2.4结论 21反相高效液相色谱法测定山楂叶黄酮中的有效成分含量 21仪器与试药 21色谱条件 21对照品溶液的制备 23线性关系的考察 23供试品溶液的制备 24方法学考察 242.3.7讨论 26比色法测定山楂果中总三萜酸提取物的含量 27实验仪器和药品 27对照品溶液的配制 27供试品溶液的配制 27测定波长选择 27显色剂用量及条件优选 27样品的测定方法 29线性关系的考察 29精密度试验： 29重复性试验： 30稳定性考察 30回收率试验 312.4.12结论 32薄层色谱扫描法测定山楂三萜酸提取部位中熊果酸的含量 32试验仪器与药品 32对照品溶液的制备 32展开剂的选择 32提取条件的优选 32扫描条件的选择 33供试品的测定方法 33方法学的考察 342.5.8讨论 37本章结论 37第三章有效部位的提取精制工艺研究 39山楂叶中总黄酮的提取精制工艺研究 39试验仪器和药品 39山楂叶药材中总黄酮含量的测定。 39山楂叶总黄酮提取精制工艺的初步选择 39山楂总黄酮乙醇提取工艺影响因素的考察 39山楂总黄酮提取工艺优化 41树脂吸附性能的考察 44工艺的验证 503.1.8讨论 50山楂果中总三萜酸部位提取工艺的研究 50提取工艺优选 51提取工艺的验证 543.2.3讨论 54本章结论 55第四章制剂处方前的研究 56材料和仪器 56方法与结果 56山楂黄酮提取物和山楂三萜酸提取物表观溶解度测定 56粉体学基本性质的测定 57指标性成分化学稳定性考察 61药物在基质中的分散程度考察 644.3讨论 65第五章滴丸制备工艺的研究 66试验仪器和药品 66聚乙二醇基质的初步优选 66滴丸的处方设计 67因素水平设计 67数据处理方式 67正交试验结果 68滴制条件的优化 695.5结果 715.6验证 715.7讨论 71第六章结论与展望 726.1结论 726.2展望 73参考文献 74前 言心血管疾病是目前威胁我国人民健康的重大疾病之一，而由脂质代谢紊乱所致的高脂血症是动脉粥样硬化(AS)及冠心病(CAD)的重要致病因素。高血脂还（TC（TG（LDL－C的水平降血脂药物需要长期服用，患者对药物的副作用较为敏感，几种西药均有久的使用历史，其安全性和对脂质代谢紊乱的调节作用得到了广泛的认可。山楂中降血脂的主要有效成分被认为有山楂黄酮和三萜酸两类[1]部位组方，制成新制剂。当使用两种有效部位组方时，需要考察为何选择这两种有效部位组方和两(3:3.5)组方[2]，制成单方制剂。但考虑到山楂果中黄酮类含量较低，提取成本取的黄酮代替从果实中的黄酮作为原料进行制剂。山楂中黄酮类成分和三萜酸类成分均为脂溶性成分，在水中溶解度低。目－中药滴丸，使其增加生物利用度，提高疗效。第一章综 述山楂的研究概述100017（2000定中药山楂原植物为北山楂（Crataeguspinnatifida）和山里红（C.pinnatifidaVarMajor）制、药理及临床研究都有较大发展。近几十年来，更广泛用于治疗心血管疾病。山楂来源山楂在我国供药用者8种[3]。其名称和分布如表1-1。表1-1山楂品种表Tab.1-1Crataegusspecies序号 品 种山楂(Crataeguspinnatifids)，山海关以南称山楂，主产东北、河北、内蒙、河南、山东、山西、陕西等省。朝鲜和苏联西伯利亚亦有分布。山里红(C.pinnatifidavarMajor)，产地同山楂。野山楂(C.cuneatasiebetzuse)，产于河南、湖南、湖北、江西等省。云南山楂(C.seabrifolia)，产于云、贵、川等省。湖北山楂(C.hupehensis)，产于湖北、湖南、江苏、浙江、江西、四川、陕西等省。甘肃山楂(C.kansuensis)，产于甘肃、山西、河北、陕西、贵州、四川各地。华中山楂(C.wilsonii)，产地同甘肃山楂.桔红山楂(C.aurantia古也有分布。山楂的化学成分2050[8]。关于山楂化学成分的研究有报道[2]分离出儿茶酚精、槲皮素、金丝桃苷、枸橼酸及其单甲酯、二甲酯以及苹果酸、氯原酸、咖啡酸、苦杏仁苷、皂苷、维生素C、核黄素、胡萝卜素鞣酸，及三萜类成分山楂酸、熊果酸、齐墩果酸21CuNiMnCrTiZnCd、Li、Na、Be、Mg、Sr、Ba、B、Al、Sn、P、Pt、Ag、Mo，山楂还含有丰富的氨基酸、磷酸丝氨酸、牛磺酸、天冬氨酸、蛋氨酸亚砜、谷酰胺、苏氨酸、谷氨酸、肌氨酸、脯氨酸等。山楂中黄酮类成分主要有金丝桃苷、芦丁、牡荆素－2”-O-鼠李糖苷等。三萜酸类成分主要有熊果酸（Ursolicacid、齐墩果酸（Oleanolicacid山楂酸（Crateagolicacid、桦皮醇、桦皮酸等。研究表明山楂果实中总黄酮与果实大小、果肉薄厚呈正相关，山里红及云值[5]3倍[36]。刘霞[10]等也认为叶中总黄酮含量高于果实。相反陈坚[11]望的替代品，近年来引起了较多的关注。Nikolov.N10[6][7]山楂属植物晚秋鲜叶中类黄酮的含量较高，为3.16%左右，而鲜果中的含量则1.65%左右[9]。山楂的药理作用山楂的心血管作用(1)降血脂作用：学者对山楂黄酮调节脂质代谢作用进行了大量研究[3]：山楂及山楂黄酮能（MDA(GSH－Px)胆固醇饲料大鼠血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白—胆固醇(LDL－C)和ApoB浓度，显著升高高密度脂蛋白—胆固醇(HDL－C)ApoAl(RT－PCR)LDLR(低密度脂蛋白受体)mRNALDLRLDLRLDLR叶希韵[20]在山楂叶总黄酮防治鹌鹑动脉粥样硬化的试验研究过程中认为：山植叶总黄酮对鹌鹑血液中含量的上升均有很明显的抑制作用同时与动脉粥样硬（Atherosclerosis 组相比其含量有明显的提高在降血脂方面与脂必妥对照组的效果相近，而在抗脂质过氧化方面比脂必妥效果更好。说明山植叶总黄酮可通过降低血脂，抗脂质过氧化损伤，达到防治AS形成的作用。钱伟平等[19]认为山楂叶制剂益心酮有降血清胆固醇作用，在五天内，山楂15%，9.2%，5.8酮，使动物廓清速度加快，廓清时间缩短。张赛璐[21]认为山楂可能具有抑制β－羟基βA蛋白，有利于清除外周组织中过多的胆固醇，从而改善体内的脂质代谢。其它研究还包括林启云[23]用95%的乙醇提取了广西大果山楂，预试验认为其可以降低大鼠的胆固醇和甘油三酯。葛志英[24]33三脂的作用，结果均低于对照组。陈红宾[25]山楂和山楂属植物山里红则没有降胆固醇作用。邓国刚[26]成的软脉降脂方喂服兔高脂血症模型，做了预防和治疗实验，9(P<0.05)，且本药无损害肝功的不良副作用。王树立[27]HMGR，HMGR[29]用山楂核醇提物喂服鹌鹑，并设立了对照组。观察了血清总胆固醇、HDL-胆固醇以及动脉壁粥样硬化处的总胆固醇、游离胆固醇的含量，结果表明山楂度脂蛋白，低于对照组，两者有显著差异(P<0.01)，HDL-(2)降压作用：较小剂量注射对麻醉兔、小鼠有降压作用。山楂乙醇浸出物静脉给药，能3h10mg/kg5～10min20～40mg/kg25mg/kg(3)舒张血管作用：山楂总黄酮可增加冠脉流量抗实验性心肌缺氧，抗心率失常等作用，山楂提取液无论体内或体外给药均可显著抑制家兔血小板凝集性，这对冠心病等心血管疾病的防治显然是有益的[30]。(4)抗心率失常作用：山楂浸膏对垂体后叶素引起的心率不齐，有一定的抑制作用。日本用山楂使剂量很小，也能较快地恢复由乌头碱引起的心律不齐，无副作用[18][31]。(5)抗氧化作用：山楂叶乙醇提取物对羟自由基和超氧阴离子的生成有清除和抑制作用，其作用随提取物的百分比浓度增加而增加。山楂叶的抗氧化作用的活性物质是山楂叶中的主要成份黄酮，因为黄酮是公认最具抗氧化潜力的一类化合物[32]。三萜酸类的药理作用多数的研究表明山楂黄酮类成分具有降压、增加冠脉血流量、降血脂、强心和抗心律失常的药理作用。也应注意到，近年来的研究同时表明，山楂中的三萜酸类成分也是降血脂的主要有效成分之一。三萜类成分有降低高脂模型小鼠血脂的作用。孙晓飞[28]用山楂核的提取物TCHHDL/TCHSOD[33]质的分解和代谢，以保护血管内皮。助消化作用山楂中脂肪酸可促进脂肪分解，山楂酸等可提高蛋白分解酶的活性，有助消化[18]。抗癌作用N-提取物对体内合成苄基亚硝胺及其诱癌的阻断作用。山楂提取物对人胚肺细胞及诱癌细胞的抑制作用。这些报道提示山楂的抗癌作用[2]。提高机体免疫力100%进作用[19～20][34]。抗菌作用山楂煎剂和乙醇提取液对福氏痢疾杆菌、宋内氏痢疾杆菌、变形杆菌、大肠杆菌有抗菌作用[35]。止痛作用山楂能使血管舒张，有助于解除局部瘀血状态，并有收缩子宫、促进子宫复原的作用[3]。山楂总黄酮类研究总黄酮的提取分离冯宝树[37]的聚酰胺精制，便可得到山楂总黄酮含量高于80%3.943%[37]60℃60%4h[38][17]。其中常用的提取方法概述如下[13]：（1）水煮浸提法：流程为：山楂叶→水浸煮（2次）→滤液浓缩→沉淀→过滤→干燥。本方法收率不高，产品总黄酮仅为6%～12%。（2）溶剂萃取法：流程为：山楂叶→用70%乙醇提取→减压回收乙醇→水分散→用正丁醇萃取→回收正丁醇→总黄酮。本方法成本高，使用有机溶剂，不便于生产使用。（3）聚酰胺分离法：流程为：山楂叶→用70%乙醇提取→回收乙醇→加入聚酰胺粉→用乙醇梯度洗脱→收集各级洗脱液→合并浓缩。实验室经常使用聚酰胺分离方法，由于消耗大量的聚酰胺，所以不适于工业化生产。（4）树脂吸附法：流程为：山楂叶→浸渍→回收乙醇→过滤→树脂分离→回收乙醇→干燥是现在最常用的方法。单成分的分离山楂叶乙醇提取物经聚酰胺柱层析分离即可得到牡荆素[13]。丁杏苞等人[12]则用80%乙醇回流提取山楂叶粗粉，提取液浓缩至糖浆状，用热水萃取数次，合并萃取液，减压浓缩，硅藻土拌料，依次用乙醚、丙酮与乙醇回流提取。其中丙酮提取物经硅胶柱层析，氯仿—甲醇—水梯度洗脱，薄层层析检控，相同部分合并，分别得到槲皮素、金丝桃苷、牡荆素、牡荆素鼠李糖苷、盐酸二乙胺等化合物。成分的测定研究人员利用高效液相色谱和薄层色谱测定山楂叶黄酮[39]。其中液相色谱是利用乙酸：甲醇（57：43）C18350nm以乙酸乙酯：甲乙醚：水：丙酮：甲酸（50：70：30：10：15）350nm法国研究者利用反相高效液相色谱检测出C.laevigata（1%C.monogyna4”-乙酰-2”-糖苷和牡荆素-2”-（1%量的如斯多苷（Rustoside）即山奈素-3-葡萄糖木糖呋喃糖苷[40～42]。滴丸研究的概述Nernst－Noyes—Whitney因：dCDS(C

C)

公式（1-1）dt V s tdC/dt面积，Cs，Ctt对难溶性药物Ct较小，Cs>>Ct，且对某一药物来说，D/Vδ＝k所dC/dt＝kSCs 公式（1-2）CskS物能够形成高能状态的结晶，这些亚稳态分子扩散能量高，溶出快。滴丸中药物分散状态的鉴别是质量检查的首要项目。差示扫描量热法是常用的考察药物的分散状态的方法。差示扫描量热法（differentialscanning同环境中，用补偿器测量使两者的温度差保持为零所必须的热量对温度（或时间DSC得到的dH/dt－T曲线中出现的热量变化峰或基线突变的温度与测试物的转变温度相对应。差动分析仪与差热分析仪的结构相似。固体分散体中若有药物晶体存在，则有吸热峰存在；药物晶体存在越多，吸热峰总面积越大。由于滴丸剂具有溶出快、生物利用度高、疗效好、药物稳定性好及制备简便、质量易控等优点，因此受到医药界广泛的重视。1958年国内有人用滴制法制备酒石酸锑钾滴丸[47]。中药滴丸的研制始于2070开展了生物有效性研究，表明该滴丸有效剂量小，起效快等优点[48]。备成强心灵滴丸4000蜡为基质，将雷公藤乙酸乙酯提取物制备为肠溶滴丸，可减少胃肠道刺激[51]张恩娟等[52]40006000用滴丸；孙昕等[53][54]6000黄芩耳用滴丸。中药滴丸往往不是单一成分，难以从理论上推出适当的工艺条件，因此在工艺研究中多借助正交试验、均匀设计等方法优选最佳工艺。比如林亚平等[55]用均匀设计法优选了咽立爽滴丸和米槁心乐滴丸[56]的制剂工艺条件，而侯世祥等[57]用正交试验法优选了四逆汤滴丸的制备工艺，何群等研究了麻杏石甘汤改成滴丸工艺中提取物的制备方法[58]及用正交试验法对其成型工艺的优选[59]，马云淑等亦用正交试验法研究了黄连解毒滴丸成型的较优工艺条件[60]。其中对外观质量判断尚无统一标准，因人而异。例如，侯世祥等[57]以成型性、外形和硬度在内的外观质量用10分制进行评分。郭麟端等[61]以肉眼观察和从30°4总之，滴丸载药量小，中药制备要求精细，因而成分明确，质量易于控制。滴丸的质量研究中，郭建平等[62]作了葛根黄酮滴丸体外释放度的研究，何国熙等[63]作了明胶基质含水量对牡荆油滴丸质量的研究，认为基质含水量控制在50%萃取-分光光度法[64]，牙科用中药滴丸盐酸小檗碱用薄层-比色法[65]。高脂血症的药物研究概述和研究展望高脂血症概述心血管疾病是目前威胁我国人民健康的重大疾病之一，而由脂质代谢紊乱所致的高脂血症是动脉粥样硬化(AS)及冠心病(CAD)116CAD(TG)CADTGCADCADTGTGCAD(LDL－C、血胰岛素水HDL－C2%～3%。HDL[43]。调脂治疗是心血管病药物防治的重要内容之一。采用合适的药物降低血脂，不仅有利于减少冠心病的危险因素，降低冠心病的发病率，而且可起到稳定动脉粥样硬化斑块、防止动脉粥样硬化斑块破裂的作用，对于防止急性冠状动脉综合征(acutecoronarysyndrome，ACS)的发生，减少心血管事件的发生具有重要意义。调脂治疗还有一定的促使动脉粥样硬化病变逆转的作用[44]。目前临床上常用的药物简述如下：171000疗现状的最新调查，其临床用药位居首位的是他汀类，占调脂处方总数的(3.9%)及烟酸类(1.7%)等。他汀类A(HGM-CoA)HGM-CoAHGM-CoA活性而导致机体内源性胆固醇合成减少，显著降低血清总胆固醇(TC)脂蛋白胆固醇(LDL-C)(TG)白胆固醇(HDL-C)2090剂对照临床试验，特别是北欧辛伐他汀生存研究(4S)，TCTC（SGPT横纹肌溶解症（CK，严重时导致急性肾功能衰竭[45]。贝丁酸类临床常用的有非诺贝特、苯扎贝特、吉非罗齐等。此类药物可增加脂蛋白TGTC、LDL-C(VLDL)，HDL-CTGTG(ISI)呈明显负相关。目前临床上非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)TG其他常用药物(1)多烯脂肪酸类[45]常用的有月见草油胶丸、鱼油烯康丸等，为不饱和脂肪酸制剂。鱼油制剂VLDL(CM)TGHDL-C(2)烟酸类[45]TG(3)在降脂治疗中可配合使用抗氧化维生素等[45]。常用降血脂中药降胆固醇为主的中药有生姜、人参、大黄、短毛五加、葛根、麻仁、徐长卿、接骨木、泽泻、茵陈等；降甘油三酯为主的中药有赤阳子、银杏叶、哈蟆中药的研究展望：随着近年来深入的研究,认为中药制剂具有疗效肯定,毒副作用少,药物食中药。研究表明有降脂作用的中草药有几十种，其中山楂是其中研究较多，效果120（LDL对肝的低密度脂蛋白受体具有正向调节作用，降解胆固醇而使胆汁酸的形成增加及抑制胆固醇的合成等[46]。因此山楂是极有前途的降血脂中药。本文准备选择山楂作为原料，提取精制其中的有效成分，制成现代剂型，开发新药。本文主要研究工作和创新点料、工艺过程和制剂的质量。主要创新点如下：的水平。艺。确保了山楂黄酮提取部位的质量。结合三萜酸类的性质，选择山楂三萜酸的提取精制工艺，使用乙醇提取－酸碱处理的方法，减少了有机溶剂对药品的污染，提高了山楂三萜酸类有效部位的含量。本文进行的其它研究工作如下：建立了山楂中黄酮类成分的薄层色谱鉴别方法，能同时在色谱中鉴别金乙腈－四氢呋喃－水－甲酸（55：45：400：1.5）为流动相，在相同色谱条件下测定了山楂黄酮提取部位中的金丝桃苷和牡荆素-2”-O-纹性较强，为进一步建立指纹图谱垫定基础。量，展开剂为环已烷—氯仿—醋酸乙酯—甲酸(20：5：8：0.1)。均匀设计方法考察了提取过程中影响因素，优选了乙醇提取的工艺条件。及对药物在基质中的分散状态进行了初步研究。优选滴丸的处方组成和制剂过程中的工艺条件。第二章指标性成分测定方法的研究山楂叶黄酮的薄层色谱法鉴别建立山楂黄酮提取部位中芦丁、金丝桃苷的TLC鉴别方法。试验仪器和药品硅胶G薄层板，烟台化工研究所；甲醇、甲酸，丁酮，乙酸乙酯均为分析纯溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品3mg，加甲醇10mL使溶解，定容，即为芦丁对照品溶液。精密称取金丝桃苷对照品1mg，加甲醇10mL使溶解，定容，即为金丝桃苷对照品溶液。供试品溶液的制备：取山楂总黄酮提取物0.02g，加甲醇5mL溶解定容，作为供试液。阴性对照溶液制备：按山楂滴丸制备方法，除山楂总黄酮外，取其它原辅料制做阴性对照药，同供试品溶液制备方法制备，即得阴性对照溶液。薄层层析G365nm2－1图2－1山楂叶黄酮薄层色谱图Fig.2-1TLCcharacteristationofFEL1、芦丁；6、金丝桃苷；3、4、5、7、8、样品液；2、阴性对照1、rutin；6、hyperoside；3、4、5、7、8、sample；2、emptyREF.上面和近前沿处是一个亮蓝色荧光斑点。比色法测定山楂叶总黄酮的含量间等较为关键，需要考察。实验仪器和药品岛津2401紫外分光光度计；容量瓶；秒表芦丁标准品：购自中国药品生物制品检定所，批号：0080-9705；乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝等均为分析纯；聚酰胺，100目实验方法聚酰胺的处理取适量聚酰胺，装柱，使用适量乙醇冲洗后，改用60％乙醇处理，即以60％乙醇充分洗涤后，烘干，备用。对照品溶液的配制105℃60％60％50mL，25mL60％（1mL0.4mg。供试品溶液的制备精密称取山楂总黄酮提取物0.02g，加入10mL60％乙醇分散溶解，加入0.3g0.3g100mL60％50mL瓶中，定容，作为供试品溶液。实验条件的优选测定波长选择吸取芦丁标准品溶液，按下述的标准曲线制备方法显色，用紫外-可见分300～600nm510nm2－2。0.350.3吸收度A0.25吸收度A0.050400 450 500 550 600波长（nm）2－2Fig.2－2theUV-VISspectraofrutin显色剂用量的选择0.412mg/mL5mL，5％NaNO210％Al（NO3）30.4、0.4mL；0.8、0.8mL；1.2、1.2mL；1.6、1.6mL；2.0、2.0mL显色测定。其它按下述的标准曲线制备方法显色。结果见表2-1表2-1不同显色剂用量的考察结果Tab.2-1therelationsbetweenamountoftheNaNO2、Al（NO3）3andabsorbtion加入量（mL）1.62.0吸收度0.3410.6220.76507640.7685mL（最大量）1.2mL1.2mL显色完全，并且吸收度不随显色剂用量的增加而增加。显色后时间的选择1mol/LNaOH2min、5min、10min15min、20min、25min、40min、60min、90min2-2表2-2显色后不同时间的吸收度变化情况Tab.2-2therelationsbetweentimeandabsorption时间（min）2510152025406090芦丁0.3400.3190.3080.3030.3030.3020.3020.3010.301样品0.3760.3530.3410.3380.3370.3370.3370.3360.3351515～90min之间，吸收度值一直稳定，可以进行含量测定。供试品的测定工艺10mL60％乙0.3g0.3g100mL60％乙醇溶解50mL25mL60％5mL，5％NaNO21.2mL，6min，10％Al（NO3）31.2mL，6min，1mol/LNaOH16mL，1.6mL，15min，510nm线性关系的考察精密吸取芦丁对照品液(0.412mg/mL)0mL1mL2mL3mL4mL25mL60％5％NaNO26min，10％Al（NO3）31.2mL，6min，1mol/LNaOH16mL，1.6mL，15min，510nm3853x-0.0022(r=0.9999)0～2.06mg2－3。1吸收度0.8吸收度00 0.5 1 1.5 2 2.5标准品量（mg）图2－3芦丁标准品硝酸铝显色法线性关系Fig.2－3thestandardcurveofrutin精密度试验6，RSD％0.505％2－3。表2－3精密度试验Tab.2－3repeatability序号吸收度平均值RSD（％）10.35320.352340.3530.3540.3540.50550.35760.355重复性试验6RSD％0.86％2－4。序号含量（％）序号含量（％）平均值（％）RSD（％）173.5272.13473.172.673.00.86573.8672.7加样回收率试验915mg、20mg、25mg33.12mg/mL5mL，0.3g2－5。序号样品含黄酮量序号样品含黄酮量标准品加入量测得量回收率平均回收率RSD（mg）（mg）（mg）（％）（％）（％）114.7115.6030.1098.63214.9315.6030.4999.74315.0415.6030.3197.88420.1915.6035.7299.57520.5915.6036.23100.2598.771.03621.6215.6036.7897.16725.1715.6040.5298.39824.8615.6040.1497.94924.3915.6039.8999.35结论中注意严格控制反应时间、显色剂的用量等试验条件。反相高效液相色谱法测定山楂叶黄酮中的有效成分含量RP-HPLC方法测定山楂总黄酮中代表性成分金丝桃苷和牡荆素-2”-O--2”-O-了同时测定金丝桃苷和牡荆素-2”-O-鼠李糖苷的反相高效液相方法。仪器与试药实验仪器和药品日本岛津LC－10AVP高效液相色谱仪（包括在线脱气机、二元泵、SPD－M10VP二极管阵列检测器，－VP5.03软件；Metler十万分之一电子分析天平；超声清洗仪。（（Fluca>98.0%453344/2其他试剂为分析纯色谱条件色谱柱为 intersil ODS－3 C18柱（5μm， 250×4.6mm）（（；1.0mL/min255nm；柱温：25℃。在上述色谱条件下，金丝桃苷和牡荆素-2”-O--2”-O-7000，28min，理论塔板数以6000。abc时间t/mintimet/min2－4金丝桃苷（a、牡荆素-2”-O-鼠李糖苷（b、山楂提取物（c）HPLCchromatogramsofhyperoside(a)、vitexin-2”-o-rhamnoside(b)、materialofHawthornflavonoids(c)对照品溶液的制备25mL0.45μm精密称取干燥至恒重的牡荆素-2”-O-鼠李糖苷的对照品L0.45μm的滤膜滤过，即得对照品溶液Ⅱ。线性关系的考察25mL1、2、3、4、5mL10mL，混匀。再经微Y＝1714968X－20498.5，r＝0.9999。结果表明，金丝桃苷进样量在0.1232～0.616μg与峰面积线性关系良好。见图2－5。峰面积积分值峰面积积分值00 0.2 0.4 0.6 0.8金丝桃苷标准品量（μg）图2－5金丝桃苷标准曲线Fig.2－5thethestandardcurveofhyperoside精密称取牡荆素-2”-O-6.85mg25mL容量瓶中，加12345mL10mL，10μL，按上述色谱条件操作。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，进行线性回归，得回归Y＝1312124X－32467.4，r＝0.9999-2”-O-鼠李糖苷0.2740～1.370μg2－6。峰面积积分值2000000峰面积积分值150000000 0.5 1 1.5标准品量（μg）图2－6牡荆素-2”-O-鼠李糖苷标准曲线Fig.2－6thethestandardcurveofvitexin-2”-o-rhamnoside供试品溶液的制备7030mL10min70％丙酮溶液反复洗3～450mL，摇匀。再经微孔滤膜滤过，即得。方法学考察精密度试验取同一份山楂黄酮提取物的供试液连续重复进样，测定金丝桃苷的峰面SD2％（n＝，同时测定牡荆素-2”-O-鼠李糖苷峰面积，其D％（n＝－6表2－6精密度试验结果Tab.repeatability序号123456金丝桃苷峰面积206866320614862076218208759020861472091575牡荆素峰面积351672235045293529571354889835464453555673重复性试验精密称取9份同一批山楂黄酮提取物，其中15mg、20mg、25mg各3份，按3.5所述方法制备供试品溶液，采用HPLC分别检测，测定金丝桃苷和牡荆素-2”-O-鼠李糖苷含量，其RSD为0.63%和0.78%。数据见表2－7。序号取样量序号取样量金丝桃苷峰面积牡荆素峰面积金丝桃苷含量牡荆素含量10.01592260765443300.55.15%11.39%20.01588261076443829.25.17%11.43%30.015772543804324465.08%11.23%40.01952325092552656.45.16%11.42%50.01997332945566006.55.16%11.42%60.01997336427571925.95.21%11.53%70.02399402808684773.65.15%11.39%80.02398408101693771.75.21%11.54%90.02398402415684105.55.14%11.39%稳定性试验HPLC-2”-O-鼠李糖苷峰面RSD0.900.942－8。时间（h）金丝桃苷峰面积牡荆素峰面积0322375时间（h）金丝桃苷峰面积牡荆素峰面积0322375548037.11318424541325.82327101556061.74321900545221.28326140554438.814324190552137.524322612548340.3回收率试验0.01g0.5530mg/mL0.8mL1.0mL1.2mL。按供试品溶液的制备项下方法操作，采用HPLC分别检测。金丝桃苷的平均回收率为101.7%、RSD0.77%，牡荆素-2”-O-101.5%、RSD0.88%2－9。序 取样量金丝桃苷含量牡荆素含量序 取样量金丝桃苷含量牡荆素含量金丝桃苷加入量牡荆素加入量金丝桃苷测得量牡荆素测得量金丝桃苷牡荆素回号 /g回收率/%收率/%/mg/mg/mg/mg/mg/mg1 0.010420.53771.19000.44240.97440.45040.9929101.8101.92 0.010410.53711.18870.44240.97440.44460.9793100.5100.53 0.010320.53231.17810.55301.2180.56791.2485102.7102.54 0.010390.53601.18630.55301.2180.56021.2326101.3101.25 0.010490.54121.19780.66361.46160.67491.4704101.7100.66 0.010540.54371.20330.66361.46160.67951.4981102.4102.5讨论对于山楂叶总黄酮提取物中金丝桃苷和牡荆素-2”-O-鼠李糖苷的含量直接使用甲醇超声提（（％丙酮超声提取，挥干后，甲醇溶解定容等方法。通过比较色谱峰的峰面积、分离度70255nm处有较强的吸收，同时牡荆素-2”-O-鼠李糖苷的吸收度也较强。在此波长下检测，可于同一色谱中显示其他黄酮类成分的保留时间、峰面积等参数，在测定金丝桃苷和牡荆素-2”-O-可增加色谱的指纹性。比色法测定山楂果中总三萜酸提取物的含量醛、高氯酸比色对山楂总三萜酸进行测定，并对其相关条件进行考察。实验仪器和药品岛津2401紫外分光光度计；容量瓶；水浴锅；温度计110704-200216；对照品溶液的配制1.5mg10mL容量瓶中加无水乙醇溶解，并定10mL，作为对照品溶液。供试品溶液的配制50mL容量瓶中加无水乙醇溶解，50mL，滤过，续滤液作为供试品溶液。测定波长选择经紫外扫描在548nm有最大吸收，空白无干扰。显色剂用量及条件优选香草醛—冰醋酸液用量的优选取熊果酸对照品(0.15mg/mL)2.0mL5份，805%香草0.25mL0.50mL0.75mL1.00mL2.0mL，60155.0mL摇匀，补加冰醋酸至25mL定容，在548nm处测定吸收值，结果见表2-10。表2-10不同5%香草醛—冰醋酸用量结果Tab.2-10therelationsbetweenamountofaceticacid-vanillinandabsorption5％香草醛－冰醋酸用量（mL）0.250.500.751.001.25吸收值0.4370.4660.4690.4840.478结果表明5%香草醛-冰醋酸用量为1.00mL最佳。高氯酸的用量的优选取熊果酸对照品(0.15mg/mL)2.0mL5805%香1.00mL1.0mL1.5mL2.0mL2.5mL3.0mL60155.0mL25mL定容，在548nm处测定吸收值，结果见表2－11。表2－11 不同量高氯酸测定结果Tab.2-11therelationsbetweenamountofHClO4andabsorption高氯酸用量（mL）1.01.52.02.53.0吸收值0.3300.3910.4640.4880.485结果表明，高氯酸用量为2.5mL时最佳。显色后水浴的温度的考察取熊果酸对照品(0.15mg/mL)2.0mL615分钟，2－12。表2－12 不同温度考察结果Tab.2-12therelationsbetweentemperatureandabsorption显色水浴温度（℃）5060708090100吸收值0.4580.4750.4950.5420.5630.6526060℃。样品的测定方法经过以上实验的优选，确定最终的实验工艺为：精密吸取供试样品液5%2.5mL，60155.0mL25mL定548nm处测定吸收值。按标准曲线法计算。线性关系的考察精密吸取熊果酸对照品无水乙醇液(0.15mg/mL)0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL2.5mL5%1.0mL，2.5mL，60155.0mL25mL548nm75～450μg2-6。吸收度吸收度

0.145

0.282

0.425

0.562

0.697

0.8380 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5熊果酸的取样量（mg）图2-7熊果酸标准品线性关系Fig.2-7thethestandardcurveofursolicacid精密度试验：5据所得吸收度值计算，RSD1.222－13。表2－13精密度试验Tab.2-13repeatability序号吸收度平均值RSD％10.40720.41030.4050.4101.2240.41250.418重复性试验：6RSD1.932－14。表2－14重复性试验Tab.2-14reproducibility序号 总三萜酸含量

（％）

RSD％160.3262.2160.3262.2359.8461.9561.2663.0稳定性考察0.15mg/mL2.0mL按标准曲线的方法操作，并分0～1800～5分钟内不稳定，RSD14.1%；5～60RSD0.98%；60～180分钟稳定性开始下降，RSD为6.5％。结果见表2-15。表2-15稳定性考察表Tab.2-15stability时间(min)吸收度平均值标准偏差RSD(%)00.59810.52620.4730.4930.06914.130.43940.43150.429100.425200.4210.4230.00410.98400.423600.418800.4061000.4031200.3910.3830.0256.51500.3621800.351回收率试验9769%2-16。序号样品中相当于熊加入熊果酸的测定熊果酸的量回收率序号样品中相当于熊加入熊果酸的测定熊果酸的量回收率平均回收RSD果酸含量（μg）量（μg）（μg）（％）率（％）（％）131373125619997.98230023125603997.183428673204312531255973631299.3999.4698.570.91530023125609098.82630853125618399.14结论测定方法。薄层色谱扫描法测定山楂三萜酸提取部位中熊果酸的含量描法测定熊果酸含量。试验仪器与药品日本岛津CS－9301型双波长薄层扫描仪10742-200212G甲酸、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇、环己烷等均为分析纯。对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品适量2.5mg，置5mL容量瓶中，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。展开剂的选择（（正丁醇—氯仿—醋酸乙酯（20：5：8）等展开剂进行优选，认为环已烷—氯仿—醋酸乙酯—甲酸(20：5：8：0.1)效果最佳，在本展开剂的展开条件下，熊果酸斑点显色清晰，附近没有干扰。提取条件的优选12345342－17表2－17不同提取时间的熊果酸含量Tab.2-17thecontentsofursolicacidoffiveextractiontimes提取时间（h）12345熊果酸含量（％）35777扫描条件的选择经对显色后分别在熊果酸对照品及供试品色谱斑点处和空白处扫描紫外吸收光谱，熊果酸显色后色谱斑点最大吸收峰在530～540nm之间。比较后确定使用双波长扫描，扫描方法为反射式锯齿扫描，波长为λs＝535nm，λr＝700nm，狭缝1.2×1.2mm，SX=3，灵敏度中等。见图2－7。图2－8熊果酸的薄层扫描图Fig2-8TheTLCchromatogramofursolicacid供试品的测定方法4小时，提取液回收乙醚至干，残渣用石油醚（30～60℃）浸泡15l（2分钟，倾去石油醚。残渣加适量无水乙醇―氯仿（3：2）25ml匀，作为供试品溶液。（200010ul，2ulG10％硫1055～7（附录ⅥB薄层扫描法方法学的考察线性关系的考察2.04.06.08.010.0μL对照品溶液(0.54mg/ml)，点于同一Gy=-477.31+1546.6x，r=0.9997(y为吸收度积分值；x为对照品量)，线性范围为：1.08～5.40μg2－8。色谱峰面积色谱峰面积00 2 4 6熊果酸的量（μg）图2－9熊果酸的线性关系Fig.2-9thethestandardcurveofursolicacid稳定性试验4μLG0.511.5234662－18。表2－18稳定性试验结果Tab.2-18stability时间（h）吸收度积分值平均值RSD（％）0.52875.2412935.381.52918.0422865.322909.371.6632861.7942912.0762997.73精密度试验G52－19。52－19。序号（吸收度积分值）同板精密度不同板精密度179069.83序号（吸收度积分值）同板精密度不同板精密度179069.8379069.83278274.8880374.58375222.5774954.92477639.2575028.33574592.9074997.80平均值76959.8976885.09RSD％2.5383.422从表2-19可以看出本法精密度良好。重现性试验52－20。序号熊果酸含量（％）序号熊果酸含量（％）平均含量（％）RSD％17.2427.35347.117.037.231.9257.3967.28结果表明本法重现性良好。加样回收率试验(，9份，精密加入熊果酸对照品溶液(0.494mg/mL)适量，按样品含量测定方法制备供试品溶液并测定熊果酸的含量，计算回收率，测得熊果酸的平均100.32%，RSD=2.14%2－21。已知量加入量已知量加入量测得量回收率平均回收率序号（mg）（mg）（mg）（％）（％）13.5202.7176.19998.6023.4272.7176.176101.2033.4942.7176.277102.4043.5073.4586.85596.8053.5363.4587.004100.30100.322.1463.4403.4586.83698.2073.4274.1997.62099.8783.4664.1997.774102.6093.5074.1997.827102.87讨论条件，均未能使熊果酸和齐墩果酸成功分离，包括甲醇－水(88：12)、甲醇－磷酸盐缓冲液（9：1、24－乙腈(30：70)、甲醇－水－冰醋酸(33：67：0.2)等。和齐墩果酸的含量之和。薄层色谱方法受实验操作、仪器、环境的影响较大，测定熊果酸的含量测定方法有待于进一步改进。本章结论的指标性成分测定方法。G（基酮）－乙酸乙酯（10：10：30：50）为展开剂，展开，取出晾干，喷以AlCl3365nm3.C18为流255nm、柱温：25℃的色谱条件，同时测定了山楂黄酮提取部位中的金丝桃苷和牡荆素-2”-O-立指纹图谱垫定基础。2.5mL，80℃水溶5%1.0mL2.5mL，6015分5.0mL25mL548nm处测定吸收值。按标准曲线法计算。G％硫酸乙醇溶液显色。第三章有效部位的提取精制工艺研究山楂叶中总黄酮的提取精制工艺研究定物质基础。试验仪器和药品CrataeguspinnatifidaBgemajorN.E.Br的析纯山楂叶药材中总黄酮含量的测定。1000.5g，加入40mL60％乙醇，6030min3次，合并10mL600.3g0.3g100mL60％50mL2.2的测定。山楂叶总黄酮提取精制工艺的初步选择少了有机溶剂的污染，并在此基础上进一步开展了工艺优选研究。山楂总黄酮乙醇提取工艺影响因素的考察乙醇浓度对山楂总黄酮提取率的影响精密称取山楂叶粗粉（20目）25g共4份，分别加0，30，60，95％乙醇500mL1.5h中含有量相比，按公式（－－1提取率％＝提取物中黄酮量100％药材中黄酮量

公式（3－1）表3－1乙醇浓度对山楂黄酮提取率的影响Tab.3-1comparisionofFELextractionratesbyfourcontentsofalcohol乙醇浓度(%) 0 30 60 95提取率(%) 25.1 49.9 73.1 63.6由表3－1可知，以60%乙醇为溶媒山楂总黄酮提取率最高。提取时间对山楂总黄酮提取率的影响精密称取山楂叶粗粉（20目）25g560500mL，1h5，20，30，40，60min，滤过，残渣用少量溶媒洗涤，合量，与药材中含有量相比，按公式(3－1)3－2。表3－2提取时间对山楂总黄酮提取率的影响Tab.3-2comparisionofFELextractionratesbyfiveextractiontimes时间(min) 5 20 30 40 提取率(%) 5.1 48.7 62.1 63.9 71.4由表3－2可知，山楂总黄酮提取率随时间的延长而提高。溶剂用量对山楂总黄酮提取率的影响（20目60500mL1h60min，滤过，残渣用少量溶媒洗涤，合并滤液，减压干燥，得粗粉。按上述总黄酮测定方法操作，测定山楂总黄酮含量，与药材中含有量相比，按公式（－－。表3－3溶剂用量对山楂总黄酮提取率的影响Tab.3-3comparisionofFELextractionratesbyfouramountsofsolvent溶剂用量(mL) 125 250 375 500提取率(%) 34.1 49.9 57.1 73.1由表3－3可知，山楂总黄酮提取率随60％乙醇用量的增加而提高。提取温度对山楂总黄酮提取率的影响（20目6040、60、80、10090min，滤过，残渣用少量溶3－4。表3－4提取温度对山楂总黄酮提取率的影响Tab.3-4comparisionofFELextractionratesbyfourextractiontemperatures温度(℃)406080100提取率(%)32.562.768.775.3由表3－4可知，温度对山楂总黄酮提取率有显著的影响，40～60℃之间提取率增大显著，而在60～100℃之间提取率增加趋缓。山楂总黄酮提取工艺优化3－5U10（10×53）均匀设计表安排3－6。g（0目2得粗粉。按上述总黄酮测定方法操作，测定山楂总黄酮含量，用公式计算提取率。水平溶剂用量*水平溶剂用量*乙醇浓度(%)温度(℃)加热时间(min)1560404027655560397070804117585100513801001206157178199211023*：溶剂用量为原料重量的倍数(mL).表3－6均匀设计的试验安排和结果Tab.3-6Experimentaldesignandresultsbytheuniformdesign因素序号溶剂用量(倍)乙醇浓度(%)温度(℃)加热时间(min)提取率(%327708512055.839804010026.3411607010055513651008067.761575408039.171780706050.9819601006093.392170554069.5102375854090.6表3－6中数据用spss10.0(step-upforward-entryprocedure)y(选入变量的影响后)对y考虑剔除。最终确定方程如下：Y=9.022+4.659x1-0.868x2+0.181x3+0.700x4+0.0184x1x3-0.0427x1x4式中：y：提取率，x1：溶剂用量，x2：乙醇浓度，x3：提取温度，x4：加热时间，x1x3、x1x4：因素的交互作用。R＝0.9975，S＝2.585，F＝98.953，P<0.00155，方程有显著意义。bYb（转换公式如下：

i）的bb

公式（3－2）i iliixilyy3－7表3－7回归方程的标准偏回归系数Tab.3-7Standardcoefficientofregressiveequation因素x1x2x3x4x1x3x1x4标准偏回归系数1.340-0.3070.1930.9910.521-0.36070x1、x43－1236070℃，加热时间40min295.109％。按此工艺安393.9有提取率高、生产成本低的优点，更适合工业生产。图3－1提取率与溶剂用量、加热时间的关系Fig.3-1relationsbetweenextrationratesandamountsofsolvent,extrationtimes树脂吸附性能的考察树脂的预处理大孔吸附树脂（40～60目）48h，装柱。254nm再用蒸馏水洗至无醇味，备用。装柱0.2g馏水浸泡，备用。D101型大孔吸附树脂吸附率和解吸率的比较（72.4％）200mL，放入恒温（30℃）18h，充分吸附后，滤过。测定溶液中剩余山楂总黄酮含量，按公式（3-3）计算：吸附量＝溶液体积吸附前溶液浓度－吸附后溶液浓度树脂重量（干）

公式（3-3）9mm70测定解吸液中总黄酮含量。按公式（3-4）3－8。解吸百分率＝洗脱液的平衡浓度洗脱液的体积吸附量树脂重量（干）

公式（3-4）表3－8不同型号大孔树脂的吸附量和解吸率Tab.3-8Absorptionanddesorptionofdifferenttypemacroporeousresins型号 D-101 D-101A D-101C吸附量(mg/g) 256.5 231.4 280.2解吸率(%) 95.4 98.7 94.8由表3－8D-101CD-101AD-101型大孔吸附树脂。浓度对吸附的影响（吸附等温线）0.5g40mL不同浓度的0.8mL，在表面皿上水浴蒸去溶剂，按山楂总黄酮含量测定方法测定含量。按公式（3-3）计算吸附量。以平衡浓度为横坐标，吸附量为纵坐标，得到吸附等温线，见图3－2。吸附量(mg/g)吸附量(mg/g)00 5 10 15平衡浓度(mg/ml)图3－2山楂总黄酮在D－101型大孔树脂中的吸附等温线Fig.3-2AbsorptionisothermcurveofFELwithD-101macroporousresin3－2BrunauerD-101树脂对山楂总黄酮的Langmuir－5）表示：qqbc1bc

公式（3－5）q（/b为吸附平衡常数；q（/；C为山楂总黄酮的平衡浓度。上式可改成：c1q

1q

公式（3－6）c~c以q 作图，可得一直线，由直线的斜率可得饱和吸附量q为687mg/g。温度对吸附的影响0.5g540mL浓度5mg/mL24h，（3－3）计算吸附量。结果见图3－3。300吸附量(mg/g)250吸附量(mg/g)2001501005000

20 40 60 80温度(℃)图3－3温度对山楂总黄酮在D－101型大孔树脂吸附量的影响Fig.3-3EffectoftemperatureontheabsorptionofFELwithD-101macroporousresin3－325～65℃对山楂总黄酮吸附性能较好，55℃时吸盐离子对吸附的影响0.5g105mg/mL40mLNaClKCl0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mol/L（30℃）24h1.6.43－4吸附量(mg/g)400吸附量(mg/g)NaClKCl300NaClKCl20010000 1 2 3盐浓度(mol/L)图3－4盐离子浓度对山楂总黄酮在D－101型大孔树脂吸附量的影响Fig3-4EffectofironstrengthontheabsorptionofFELwithD-101macroporousresin山楂总黄酮的吸附曲线6BV/h2mg/mL的山楂总5mL3－5。浓度(mg/mL)2浓度(mg/mL)100 100 200 300 400体积(mL)图3－5山楂总黄酮溶液在D－101型大孔树脂上的穿透曲线Fig.3-5BreakthroughcurveofFELsolutiononD-101macroporousresin3－530倍床体积的山楂总黄酮水溶液而无穿透现260mg/g。洗脱液的考察0.5g5mg/mL20mL30％、50％、70％、9514BV/h的速度洗脱，以解吸剂的体积为横坐标，流出的解吸剂的浓度为纵坐标作图3－6。浓度(μg/mL)浓度(μg/mL)30%30% 50%70%90%00 10 20 30体积(ml)图3－6不同浓度乙醇对山楂总黄酮洗脱能力的考察Fig.3-6EffectofdifferentalcoholconcentrationonthedescorptionofFELwithD-101macroporousresin3－630507095％时，70％乙醇作为洗脱剂。洗脱剂流速的考察0.5g5mg/mL20mL7，14，21，35BV/h的流速洗脱，以洗脱液的体积为横坐标，洗脱液的浓度为纵坐标作图3－7。可见，流速为7BV/h14BV/h21BV/h35BV/h时洗脱峰钝且有拖尾现象。从缩短生产周期的角度考虑，14BV/h的流速比较合理，8BV的洗脱液可以洗脱的比较完全。7BV/h 7BV/h 14BV/h21BV/h35BV/h浓度(μg/mL)100050000 5 10 15 20洗脱液体积(mL)图3－7洗脱剂的流速对山楂总黄酮洗脱的影响Fig.3-7EffectofflowrateofeluateonthedesorptionofFEL0大孔吸附树脂吸附纯化山楂总黄酮的工艺1.0g处理过的树脂1mL1g10mL，将上述水溶液6BV/h12BV14BV/h的流速洗去杂15BV70％乙醇用同一流速洗脱。即得。工艺的验证g0L7011.5L60%1mL1g6BV/h12BV的水14BV/h15BV7065％以上。讨论60237040min，同法提取293.9%。该法具有提取率高、成本低的优点。对于D－101型大孔吸附树脂对山楂总黄酮的吸附性能和机理尚未报道。试验结果表明，D－101型、D－101A型、D－101C型三种大孔吸D－101型大孔吸附树脂吸附机理Langmuir625mg/g，动态饱和吸附量260mg/g。吸附时，温度、盐离子浓度、洗脱剂浓度及流速对山楂总黄酮的吸65％。山楂果中总三萜酸部位提取工艺的研究50提取工艺优选醇提取条件的确定3－9。表3－9因素水平表Tab.3-9FactorsandLevels乙醇浓度（％）提取时间（h）乙醇用量（倍）16041527062038082550g，加入设定浓度乙醇回流提取设定时（2小时1.1g/mL。量取适量稠膏真空干燥，精密称定，按含量测定方法测定（3－7）计算出三萜酸类的提取率作为指标。将三个因A、B、D列，C3－10。三萜酸类提取率＝干膏出膏率×总三萜酸含量 公式（3－7）表3－10正交试验安排和结果Tab.3-10Experimentaldesignandresultsbytheorthogonaldesign序号ABCD结果111112.65212222.58313331.71421232.08522312.80623122.44731322.61832131.62933212.16Ⅰ6.947.346.717.61Ⅱ7.327.006.827.63Ⅲ6.396.317.125.41R0.310.340.140.74平方和142.58142.69142.23145.40s0.14580.18360.03001.0854变差来源离差平方和自由度均方F值变差来源离差平方和自由度均方F值P值A0.145820.07294.855p<0.01B0.183620.09186.116p<0.01C0.030020.01501D1.085420.542736.154p<0.01误差0.030020.0150总和1.444880.7224通过上表可以得知，三个因素均对结果有显著性的影响，因素主次为D>B>A，A2B1D1，70％28770％酸浓度的确定200g，70％2871.1g/mL323％、6％、9％90℃223％NaOH230mL，最后用适