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文档简介

生物化学实验——免疫学目录兔抗人γ-球蛋白抗血清的制备抗血清效价的检测兔抗人γ-球蛋白抗血清的制备实验原理：免疫球蛋白是机体受抗原刺激后产生的，其主要作用是与抗原起免疫反应，生成抗原-抗体复合物，从而阻断病原体对机体的危害。本实验以人血清γ-球蛋白为抗原免疫家兔，从而制备兔抗人γ-球蛋白抗血清。实验器材与试剂：健康家兔3-5只完全福氏佐剂不完全福氏佐剂γ球蛋白（10-15mg/ml，按照上述方法置备的γ球蛋白），以生理盐水配制小玻璃瓶一次性注射器兔抗人γ-球蛋白抗血清的制备实验步骤兔抗人γ-球蛋白抗血清的制备健康家兔四足脚掌皮下多点注射（抗原2mg），完全福氏佐剂0.4ml

10天后，背部皮下多点注射（抗原2mg），不完全福氏佐剂0.4ml

10天后，背部皮下多点注射（抗原2mg），不完全福氏佐剂0.4ml

实验步骤兔抗人γ-球蛋白抗血清的制备10天后，双向免疫扩散法检测抗血清效价，方法见后如果抗血清效价低于1：32继续免疫如果抗血清效价高于1：32颈动脉取血收集抗血清冷冻保存以备用注意事项使抗原与佐剂充分乳化动物健壮兔抗人γ-球蛋白抗血清的制备返回抗原抗体反应免疫球蛋白的结构抗原抗体反应多价抗原：抗原可结合多个抗体分子（半抗原不能形成网状结构）抗体：必须二价以上（单克隆抗体不能用沉淀法检测）目的要求：学习并掌握双向免疫扩散的实验原理掌握双向免疫扩散的实验方法实验一免疫双向扩散实验实验器材与试剂：生理盐水（0.9%）琼脂人血清兔抗人γ-球蛋白抗血清载玻片湿盒实验一免疫双向扩散实验实验步骤用生理盐水配制1.5%琼脂糖，微波炉将其加热、融化实验一免疫双向扩散实验冷却至30℃左右，将琼脂糖平铺在载玻片上，厚2-3mm实验步骤实验一免疫双向扩散实验俯视图侧面图打孔

5μl人血清加入中央孔不同稀释倍数的兔抗人血清5μl加入周围孔实验步骤实验一免疫双向扩散实验效价：抗血清效价为64实验结果实验一免疫双向扩散实验注意事项铺板后，琼脂凝胶均匀，切忌凸凹不平；实验一免疫双向扩散实验琼脂凝胶温度30℃左右时，铺板。温度过高或过低均不能得到理想凝胶板。实验原理（间接法检测抗体）：实验二酶联免疫吸附(ELISA)实验A抗原吸附在固相载体表面（酶标板凹孔）B加抗体，形成抗原抗体复合物C加酶标抗抗体D加底物，底物降解量=抗体量ABCD目的要求：掌握ELISA的实验原理和方法实验二酶联免疫吸附(ELISA)实验掌握酶标仪的使用方法实验步骤：实验二酶联免疫吸附(ELISA)实验显色封闭包被洗涤加抗血清洗涤加酶标抗抗体洗涤终止酶标仪测OD值(在450nm/630nm双波长下)实验二酶联免疫吸附(ELISA)实验酶标仪

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