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文档简介

一、结核分枝杆菌基础知识二、分子诊断PCR技术基础知识三、生产操作程序结核病是由结核分枝杆菌（MTB）感染引起的慢性传染病。结核菌能侵入全身各个器官，但80%发生在肺部，常称肺结核。

常见肺外结核：

淋巴结核（最常见）、结核性脑膜炎（最严重）、

结核性胸膜炎、肠结核、肾结核、

附睾结核、

女性生殖系统结核（引起不孕不育）、骨关节

结核等。结核病

中国结核病流行现状5肺结核确诊病例临床诊断病例疑似病例仅培阳肺结核肺部病变标本病理学诊断为结核病变者标本查到结核分枝杆菌5岁以下儿童TB密切接触史或PPD强阳性伴有肺结核病临床症状者3份痰标本涂片阴性,或结核中毒症状胸部影像学检查怀疑有活动性TB可能性影像符合活动性TB,PPD强阳性具有可疑症状血清免疫学检查阳性;疑似TB经诊断性治疗和/或排除类似疾病结核病诊断标准（WS288-2008）

在有DNA单链、与DNA单链互补的寡核苷酸引物、dNTPs及DNA聚合酶的情况下，当引物与单链的互补区结合后，在DNA聚合酶的催化作用下即可进行DNA单链5‘-3’合成反应。通过特殊的仪器不断满足上述条件，则DNA单链的5‘-3’合成反应可不断进行下去，直到条件不复存在。实际上是模拟天然DNA复制过程。PCR技术原理PCR技术原理基本过程1.变性：双链DNA解链成为单链DNA2.退火：部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合3.延伸：以目的基因为模板，合成互补的新DNA链可能造成的污染1.纯化限制性酶切的目标片段

2.包含目标序列的质粒DNA

3.处理PCR产物过程造成的反应后污染PCR技术原理普通PCR技术的优点及缺点优点：高灵敏度

高特异性

简便、快速缺点：对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析。无法对

起始模板准确定量。

无法对扩增反应实时检测。

开盖检测“气溶胶”污染问题。PCR技术原理分装操作程序环境：十万级洁净生产区根据生产指令领取试剂瓶、盖和规定批号的耗材。检查分装机工作状况，按《BT00-300T兰格蠕动泵标准操作规程》先调整相关的参数并进行试分装，分液量达标稳定后，按相关指令进行分装。或者用移液器吸取规定的量与试剂瓶中。实施分装，每分装完总批量的20%后，至少取一瓶进行分液量检验。如超出此范围，则刚分装过的总批量的20%应倒回原液中，并调整分装机的参数，重新分装。边分装边拧盖，并紧固瓶盖。分装完毕，清点分装数量，计算得率并记录后，装箱贴标识（注明名称、批号、批量、规格、贮存温度、分装日期和分装人及保存期限）后移入一般生产区粘贴标签，如不能及时粘贴标签，应于适当条件保存。按分装机清洁SOP

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