课件比赛-临床微生物检验标本的采集-血液标本

第二章临床微生物检验标本的采集第二节血液标本采集第二章临床微生物检验标本的采集第二节血液标本采集主要内容

主要内容

一、标本采集（一）引言（二）采血指征（三）采集方法（四）标本运输与接收（五）检出率的重要影响因素（六）结果报告（七）结果解释之污染问题whywhenHow一、标本采集（一）引言whywhenHow

（一）引言正常人的血液是无菌的。菌血症（bacteremia）：当少量细菌侵入血液循环，为一过性，不繁殖或很少繁殖，不引起或仅引起轻微的炎症反应者称为菌血症。败血症（sepsis）：败血症是指有全身性炎症反应的表现。血流感染是一种危重的全身感染，对其进行病原菌的检验，提供病原学的诊断极为重要。

why（一）引言正常人的血液是无菌的。why

（二）采血指征一般患者出现以下一种体征时可作为采血的重要指征发热（≥38℃）或低温（≤36℃）；寒战；白细胞增多（计数大于10.0×109/L，特别有“核左移”时）；皮肤粘膜出血，休克；昏迷；多器官衰竭，血压降低，CRP升高及呼吸快；特殊患者出现粒细胞减少,血小板减少等。when（二）采血指征一般患者出现以下一种体征时可作为采血的重要指

（二）采血指征同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症应采集血液培养。

新生儿可疑菌血症，应该同时做尿液和脑脊液培养。对入院危重感染患者应在未进行抗菌药物治疗之前，及时做培养。（二）采血指征同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症应采（三）血液标本的采集方法

（三）血液标本的采集方法

1.采血部位静脉,非动脉。不同部位多次采血。不应从留置导管内取血。如果血培养是通过静脉植入管采集的，不用弃去起始部分的血液，应同时自外周静脉采集血液进行血培养，以协助判读血培养阳性结果

。（三）血培养标本采集How1.采血部位（三）血培养标本采集How

（三）血培养标本采集2.皮肤消毒程序严格执行以下三步法:70%酒精30秒1%～2%碘酊30秒or10%碘伏消毒60秒70%酒精脱碘60秒之前应消毒血培养瓶的橡皮塞子：70%酒精60秒（三）血培养标本采集2.皮肤消毒程序严格执行以下三（三）血培养标本采集3.静脉穿刺和培养瓶接种程序在穿刺前或穿刺期间，不可接触穿刺点用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头，直接注入血培养瓶。血标本接种培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。立即送检，切勿冷藏。

（三）血培养标本采集3.静脉穿刺和培养瓶接种程序在穿刺前或穿课件比赛-临床微生物检验标本的采集——血液标本课件比赛-临床微生物检验标本的采集——血液标本4.采血量血培养中采集血液的量，是影响细菌血症或真菌血症的侦测最重要的因素。研究表明：血液量增加1ml血量，阳性率增加3%～5%。血液量由2ml增加到20ml时，血培养的阳性率增加30%～50%。对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量的1％。在此前提下，增加采血量也会增加阳性率。自动化仪器要求成人采血量是8～10ml/瓶，儿童1～5ml/瓶。（三）血培养标本采集4.采血量（三）血培养标本采集9%+14%+9%+11%+发热高峰前12-2.5小时发热高峰前2.5-0.5小时发热高峰期间发热高峰后1-12小时166病人105病人199病人258病人Thomsonetal.1991.ASCP.MayoClinicStudy5.血培养的时机

（三）血培养标本采集细菌通常在寒战和发烧前1小时进入血流考虑到方便操作上的原因，建议常规血培养应于病人寒战和发烧时，于30-60分钟内采集2-3套血培养；除非有怀疑感染性心内膜炎可采用间隔式采血法。9%+14%+9%+11%+发热高峰前12-2.5小（三）血培养标本采集6.血培养的数量※一套血培养/一份血培养标本：一次静脉穿刺获得的血液被分配到相应的几个血培养瓶，该几个培养瓶/统称为一套血培养。解释为一份血培养标本。（三）血培养标本采集6.血培养的数量※一套血培养/一份血培（三）血培养标本采集理由1：血培养组合的累积敏感性

DetectionofBloodstreamInfectionsinAdults:HowManyBloodCulturesAreNeeded.

Weinsteinetal.JClinMicrobiol.2007;45:3546-3548（三）血培养标本采集理由1：血培养组合的累积敏感性

Dete（三）血培养标本采集败血症vs.“污染的”血培养MayoClinicStudy%阳性心内膜炎菌血症皮肤定植细菌血培养套数理由2：区分血培养的真实阳性和污染（三）血培养标本采集败血症vs.“污染的”血培养May（三）血培养标本采集目前的指南推荐采集2-3套血培养从不建议操作单套的血培养在采取血培养后的2-5天内，不需要再重复采取血培养，因为采取治疗后的2-5天血液中的感染细菌不会马上消失。

6.血培养的数量（三）血培养标本采集目前的指南推荐采集2-3套血培养6.血培（三）血培养标本采集AnaerobicBottlesareStillImportantinBloodCultureSets.P.Khanna,P.Collignon.EurJClinMicrobiolInfectDis.2001Mar;20(3):217-9.

Clinicalvalueofanaerobicbloodculture:aretrospectiveanalysisofpositivepatientepisodes.PeterAJames，KhalidMAl-Shafi.J.Clin.Pathol.2000;53;231-233需氧血培养瓶和厌氧血培养瓶

这些研究中，使用“配对需氧/厌氧血培养瓶”比用“两个需氧血培养瓶”复现出更多的金葡、肠杆菌科细菌和厌氧菌。Anaerobicbloodcultures:usefulintheICU?ByrdRPJr,RoyTM.Chest.2003Jun;123(6):2158-9……（三）血培养标本采集AnaerobicBottlesar（三）血培养标本采集

绝大多数需氧的致病菌都是兼性厌氧菌。双倍的血培养血量；一些兼性厌氧菌在厌氧环境中得以更快的生长出来。

结论：推荐常规血培养包括配对的需氧/厌氧血培养瓶。当抽得的血少于推荐血量时，应该首先接种需氧瓶；剩余血液接种厌氧瓶。注意：对于那些仅用需氧瓶的实验室来讲，每次采血必须注入2个需氧瓶中以确保足够的采血量。需氧血培养瓶和厌氧血培养瓶（三）血培养标本采集绝大多数需氧的致病菌都是兼

血培养瓶应立即被送往实验室，任何延误送入自动连续监测血培养仪的行为，将会延误或阻止检测细菌的生长。如不能立即送检，应该置于室温下，不得被冷藏或冷冻,且不超过数小时。装载到培养箱前应进行特殊标记，以便随后的结果分析。

1.血培养标本的转运（四）标本转运与接收血培养瓶应立即被送往实验室，任何延误送入自动连续监1.血培

2.不合格血培养标本的处理（四）标本转运与接收(1)拒收培养瓶卷标错误或未贴标签的血培养瓶破损的或渗漏的血培养瓶血液凝固的血培养瓶(2)补做培养瓶血标本采集后放置12h以上(手工法除外)用不适当类型的培养瓶收集标本用过期的培养瓶收集标本采血量不足2.不合格血培养标本的处理（四）标本转运与接收(1)拒收（五）检出率的重要影响因素血量孵育条件血液-肉汤比例添加剂培养基（五）检出率的重要影响因素血量孵育条件血液-肉汤比例添加剂培

（五）检出率的重要影响因素1.血液送检量？成人血液中每毫升的菌落形成单位(CFU)很低，因此增

加送检血液量可以提升检出率。儿童的血液中每毫升的菌落形成单位(CFU)高于成人，因此送检血量应参照总血容量和年龄。当送检的血量少于推荐量时，监控血培养的送检量和提供临床反馈是实验室质量保证计划的一项重要指标。（五）检出率的重要影响因素1.血液送检量？成人

正常人的血液中含有某些物质，可以抑制血液中细菌的生长。因此血液与肉汤的比例须适当，以便稀释和减少这些物质的抑制细菌作用。推荐的血液与肉汤的比例是1:5-1:10。儿童的血培养须采用专用儿童瓶，以符合儿童的采血量的血液与肉汤的比例要求。（五）检出率的重要影响因素2.血液与肉汤的比例正常人的血液中含有某些物质，可以抑制血液中细菌的生长。（五

多种商业化的培养基配方，可用于人工及自动化血培养系统。含不同改良配方的商用培养基，可以改善检出率。3.培养基（五）检出率的重要影响因素因为没有一种培养基可以检出所有的细菌、真菌及分支杆菌；故结合使用多种不同配方的培养基，可以提升病原菌检出率。质控检查多种商业化的培养基配方，可用于人工及自动化血培养系统。3.抗凝剂0.025-0.05％SPS（聚茴香脑磺酸钠）是最常用抗凝剂。

其他血液抗凝剂，如：肝素，EDTA和枸橼酸则对微生物有毒，因此不能被用于血培养。SPS抑制奈瑟菌的生长！4.培养基添加剂（五）检出率的重要影响因素

抗生素吸附剂：树脂及活性碳有助于已接受抗生素治疗病人血培养的病源菌，及部分葡萄球菌与酵母菌的检出率。抗凝剂4.培养基添加剂（五）检出率的重要影响因素抗生

温度：35-37℃适合的环境时间推荐自动化血培养系统采用5天的孵育周期。摇动有助于需氧瓶内病原菌的检出率监测的间隔传统方法VS自动化系统5.孵育条件（五）检出率的重要影响因素温度：35-37℃5.孵育条件（五）检出率的重要影响因素1血培养已开单但未收到标本。2血培养标本已收到。3检测中，尚无结果。4

24小时无菌生长。5

48小时无菌生长。6

72小时无菌生长，建议可送第二套血培养。7阳性报警，分离培养和药敏进行中，并报告初步涂片染色结果。8阳性培养结果（细菌鉴定和药敏试验的最终结果）。

（六）结果报告

由于血培养结果的重要性，无论阴性或阳性状态，提倡有效、持续地向临床报告培养状态。有条件的医院应充分利用实验室信息系统（LIS）和医院信息系统（HIS），让临床医生随时掌握血培养检测的进展情况，包括如下情况：1血培养已开单但未收到标本。（六）结果报告分级报告制度+一级报告二级报告三级报告分级报告制度+一级报告二级报告三级报告如果皮肤定植的细菌没有被杀死，这些细菌将通过针头被吸入血培养瓶并在瓶中生长。污染问题（七）结果解释之1.产生如果皮肤定植的细菌没有被杀死，这些细菌将通过针头被吸入血培养污染细菌

血培养污染定义为在几次血培养中单个血培养下列细菌阳性:凝固酶阴性葡萄球菌棒状杆菌微球菌丙酸杆菌芽孢杆菌等某些细菌(主要为凝固酶阴性葡萄球菌)引起导管相关性败血症。医生不能将真的凝固酶葡萄球菌感染和皮肤定植菌“污染”相区分，因此他们很可能会用万古霉素治疗患者。污染问题2.细菌污染细菌血培养污染定义为在几次血培养中单个血培一个污染的血培养结果会导致不必要的抗菌药物治疗，延长住院时间，提高治疗费用。目前发现每个假阳性结果会导致：延长患者住院时间4.5天；增加抗菌药物使用达39%；额外支出4400美元。万古霉素不必要使用引起万古霉素耐药肠球菌(VRE)和潜在的万古霉素耐药金黄色葡萄球菌的增加然而，即使遵循正确的血液采集步骤，2%的污染率还是不可能避免的。可接受的污染概率在3％以下。污染问题3.危害一个污染的血培养结果会导致不必要的抗菌药物治疗，延长住院时间实验室必须采用标准的血培养采集步骤，以有效的将污染降至最低。增加70％异丙基酒精消毒步骤。整个采集血液过程严格遵从无菌操作，除非有戴无菌手套，否则不允许在消毒后按压静脉。许多研究表明：采血后与接种是否需要换针头，并无明显的污染率差异。污染问题4.解决主要内容

实验室必须采用标准的血培养采集步骤，以有效的将污染降至最低。二、血液中常见的病原体

种类病原菌G+球菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌、草绿色链球菌、肠球菌G+杆菌结核分枝杆菌、产单核李斯特菌G-球菌脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布兰汉菌G-杆菌大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、克雷伯杆菌、肠杆菌、变形杆菌、沙雷菌、沙门菌、不动杆菌、嗜肺军团菌、嗜血杆菌真菌念珠菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌厌氧菌拟杆菌、产气荚膜梭菌二、血液中常见的病原体种类病原菌G+球菌金黄色葡萄课件比赛-临床微生物检验标本的采集——血液标本三、血液感染的临床意义葡萄球菌菌血症由MRSA/MRCNS引起的逐年增多。肠球菌菌血症常见泌尿生殖道、消化道和腹腔感染的病人。易并发心内膜炎。此菌可对多种抗生素耐药，病情较重。G-杆菌菌血症主要侵犯免疫功能低下的病人。常源于泌尿生殖道、胃肠道、胆道及呼吸道感染。L型菌感染菌血症使用抑制细胞壁的抗生素，由缺损细胞壁的细菌感染所致。厌氧菌菌血症常合并需氧菌感染，症状重而复杂。真菌血症常由条件致病性真菌引起，有念珠菌/曲霉/毛霉等。多数伴有细菌感染。三、血液感染的临床意义葡萄球菌菌血症由MRSA/MRCNS引三级报告制度？标本的正确选择、采集和运送是实验室工作准确和有效的前提，是保证实验室质量的重要环节。小结三级报告制度？标本的正确选择、采集和运送是实验室工作准确和有主编：Brooks等主编:P.R.默里等参考文献微生物之家：/主编：Brooks等主编:P.R.默里等参考文献微生物之家：ThankYou！ThankYou！第二章临床微生物检验标本的采集第二节血液标本采集第二章临床微生物检验标本的采集第二节血液标本采集主要内容

主要内容

一、标本采集（一）引言（二）采血指征（三）采集方法（四）标本运输与接收（五）检出率的重要影响因素（六）结果报告（七）结果解释之污染问题whywhenHow一、标本采集（一）引言whywhenHow

（一）引言正常人的血液是无菌的。菌血症（bacteremia）：当少量细菌侵入血液循环，为一过性，不繁殖或很少繁殖，不引起或仅引起轻微的炎症反应者称为菌血症。败血症（sepsis）：败血症是指有全身性炎症反应的表现。血流感染是一种危重的全身感染，对其进行病原菌的检验，提供病原学的诊断极为重要。

why（一）引言正常人的血液是无菌的。why

（二）采血指征一般患者出现以下一种体征时可作为采血的重要指征发热（≥38℃）或低温（≤36℃）；寒战；白细胞增多（计数大于10.0×109/L，特别有“核左移”时）；皮肤粘膜出血，休克；昏迷；多器官衰竭，血压降低，CRP升高及呼吸快；特殊患者出现粒细胞减少,血小板减少等。when（二）采血指征一般患者出现以下一种体征时可作为采血的重要指

（二）采血指征同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症应采集血液培养。

新生儿可疑菌血症，应该同时做尿液和脑脊液培养。对入院危重感染患者应在未进行抗菌药物治疗之前，及时做培养。（二）采血指征同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症应采（三）血液标本的采集方法

（三）血液标本的采集方法

1.采血部位静脉,非动脉。不同部位多次采血。不应从留置导管内取血。如果血培养是通过静脉植入管采集的，不用弃去起始部分的血液，应同时自外周静脉采集血液进行血培养，以协助判读血培养阳性结果

。（三）血培养标本采集How1.采血部位（三）血培养标本采集How

（三）血培养标本采集2.皮肤消毒程序严格执行以下三步法:70%酒精30秒1%～2%碘酊30秒or10%碘伏消毒60秒70%酒精脱碘60秒之前应消毒血培养瓶的橡皮塞子：70%酒精60秒（三）血培养标本采集2.皮肤消毒程序严格执行以下三（三）血培养标本采集3.静脉穿刺和培养瓶接种程序在穿刺前或穿刺期间，不可接触穿刺点用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头，直接注入血培养瓶。血标本接种培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。立即送检，切勿冷藏。

（三）血培养标本采集3.静脉穿刺和培养瓶接种程序在穿刺前或穿课件比赛-临床微生物检验标本的采集——血液标本课件比赛-临床微生物检验标本的采集——血液标本4.采血量血培养中采集血液的量，是影响细菌血症或真菌血症的侦测最重要的因素。研究表明：血液量增加1ml血量，阳性率增加3%～5%。血液量由2ml增加到20ml时，血培养的阳性率增加30%～50%。对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量的1％。在此前提下，增加采血量也会增加阳性率。自动化仪器要求成人采血量是8～10ml/瓶，儿童1～5ml/瓶。（三）血培养标本采集4.采血量（三）血培养标本采集9%+14%+9%+11%+发热高峰前12-2.5小时发热高峰前2.5-0.5小时发热高峰期间发热高峰后1-12小时166病人105病人199病人258病人Thomsonetal.1991.ASCP.MayoClinicStudy5.血培养的时机

（三）血培养标本采集细菌通常在寒战和发烧前1小时进入血流考虑到方便操作上的原因，建议常规血培养应于病人寒战和发烧时，于30-60分钟内采集2-3套血培养；除非有怀疑感染性心内膜炎可采用间隔式采血法。9%+14%+9%+11%+发热高峰前12-2.5小（三）血培养标本采集6.血培养的数量※一套血培养/一份血培养标本：一次静脉穿刺获得的血液被分配到相应的几个血培养瓶，该几个培养瓶/统称为一套血培养。解释为一份血培养标本。（三）血培养标本采集6.血培养的数量※一套血培养/一份血培（三）血培养标本采集理由1：血培养组合的累积敏感性

DetectionofBloodstreamInfectionsinAdults:HowManyBloodCulturesAreNeeded.

Weinsteinetal.JClinMicrobiol.2007;45:3546-3548（三）血培养标本采集理由1：血培养组合的累积敏感性

Dete（三）血培养标本采集败血症vs.“污染的”血培养MayoClinicStudy%阳性心内膜炎菌血症皮肤定植细菌血培养套数理由2：区分血培养的真实阳性和污染（三）血培养标本采集败血症vs.“污染的”血培养May（三）血培养标本采集目前的指南推荐采集2-3套血培养从不建议操作单套的血培养在采取血培养后的2-5天内，不需要再重复采取血培养，因为采取治疗后的2-5天血液中的感染细菌不会马上消失。

6.血培养的数量（三）血培养标本采集目前的指南推荐采集2-3套血培养6.血培（三）血培养标本采集AnaerobicBottlesareStillImportantinBloodCultureSets.P.Khanna,P.Collignon.EurJClinMicrobiolInfectDis.2001Mar;20(3):217-9.

Clinicalvalueofanaerobicbloodculture:aretrospectiveanalysisofpositivepatientepisodes.PeterAJames，KhalidMAl-Shafi.J.Clin.Pathol.2000;53;231-233需氧血培养瓶和厌氧血培养瓶

这些研究中，使用“配对需氧/厌氧血培养瓶”比用“两个需氧血培养瓶”复现出更多的金葡、肠杆菌科细菌和厌氧菌。Anaerobicbloodcultures:usefulintheICU?ByrdRPJr,RoyTM.Chest.2003Jun;123(6):2158-9……（三）血培养标本采集AnaerobicBottlesar（三）血培养标本采集

绝大多数需氧的致病菌都是兼性厌氧菌。双倍的血培养血量；一些兼性厌氧菌在厌氧环境中得以更快的生长出来。

结论：推荐常规血培养包括配对的需氧/厌氧血培养瓶。当抽得的血少于推荐血量时，应该首先接种需氧瓶；剩余血液接种厌氧瓶。注意：对于那些仅用需氧瓶的实验室来讲，每次采血必须注入2个需氧瓶中以确保足够的采血量。需氧血培养瓶和厌氧血培养瓶（三）血培养标本采集绝大多数需氧的致病菌都是兼

血培养瓶应立即被送往实验室，任何延误送入自动连续监测血培养仪的行为，将会延误或阻止检测细菌的生长。如不能立即送检，应该置于室温下，不得被冷藏或冷冻,且不超过数小时。装载到培养箱前应进行特殊标记，以便随后的结果分析。

1.血培养标本的转运（四）标本转运与接收血培养瓶应立即被送往实验室，任何延误送入自动连续监1.血培

2.不合格血培养标本的处理（四）标本转运与接收(1)拒收培养瓶卷标错误或未贴标签的血培养瓶破损的或渗漏的血培养瓶血液凝固的血培养瓶(2)补做培养瓶血标本采集后放置12h以上(手工法除外)用不适当类型的培养瓶收集标本用过期的培养瓶收集标本采血量不足2.不合格血培养标本的处理（四）标本转运与接收(1)拒收（五）检出率的重要影响因素血量孵育条件血液-肉汤比例添加剂培养基（五）检出率的重要影响因素血量孵育条件血液-肉汤比例添加剂培

（五）检出率的重要影响因素1.血液送检量？成人血液中每毫升的菌落形成单位(CFU)很低，因此增

加送检血液量可以提升检出率。儿童的血液中每毫升的菌落形成单位(CFU)高于成人，因此送检血量应参照总血容量和年龄。当送检的血量少于推荐量时，监控血培养的送检量和提供临床反馈是实验室质量保证计划的一项重要指标。（五）检出率的重要影响因素1.血液送检量？成人

正常人的血液中含有某些物质，可以抑制血液中细菌的生长。因此血液与肉汤的比例须适当，以便稀释和减少这些物质的抑制细菌作用。推荐的血液与肉汤的比例是1:5-1:10。儿童的血培养须采用专用儿童瓶，以符合儿童的采血量的血液与肉汤的比例要求。（五）检出率的重要影响因素2.血液与肉汤的比例正常人的血液中含有某些物质，可以抑制血液中细菌的生长。（五

多种商业化的培养基配方，可用于人工及自动化血培养系统。含不同改良配方的商用培养基，可以改善检出率。3.培养基（五）检出率的重要影响因素因为没有一种培养基可以检出所有的细菌、真菌及分支杆菌；故结合使用多种不同配方的培养基，可以提升病原菌检出率。质控检查多种商业化的培养基配方，可用于人工及自动化血培养系统。3.抗凝剂0.025-0.05％SPS（聚茴香脑磺酸钠）是最常用抗凝剂。

其他血液抗凝剂，如：肝素，EDTA和枸橼酸则对微生物有毒，因此不能被用于血培养。SPS抑制奈瑟菌的生长！4.培养基添加剂（五）检出率的重要影响因素

抗生素吸附剂：树脂及活性碳有助于已接受抗生素治疗病人血培养的病源菌，及部分葡萄球菌与酵母菌的检出率。抗凝剂4.培养基添加剂（五）检出率的重要影响因素抗生

温度：35-37℃适合的环境时间推荐自动化血培养系统采用5天的孵育周期。摇动有助于需氧瓶内病原菌的检出率监测的间隔传统方法VS自动化系统5.孵育条件（五）检出率的重要影响因素温度：35-37℃5.孵育条件（五）检出率的重要影响因素1血培养已开单但未收到标本。2血培养标本已收到。3检测中，尚无结果。4

24小时无菌生长。5

48小时无菌生长。6

72小时无菌生长，建议可送第二套血培养。7阳性报警，分离培养和药敏进行中，并报告初步涂片染色结果。8阳性培养结果（细菌鉴定和药敏试验的最终结果）。

（六）结果报告

由于血培养结果的重要性，无论阴性或阳性状态，提倡有效、持续地向临床报告培养状态。有条件的医院应充分利用实验室信息系统（LIS）和医院信息系统（HIS），让临床医生随时掌握血培养检测的进展情况，包括如下情况：1血培养已开单但未收到标本。（六）结果报告分级报告制度+一级报告二级报告三级报告分级报告制度+一级报告二级报告三级报告如果皮肤定植的细菌没有被杀死，这些细菌将通过针头被吸入血培养瓶并在瓶中生长。污染问题（七）结果解释之1.产生如果皮肤定植的细菌没有被杀死，这些细菌将通过针头被吸入血培养污染细菌

血培养污染定义为在几次血培养中单个血培养下列细菌阳性:凝固酶阴性葡萄球菌棒状杆菌微球菌丙酸杆菌