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文档简介
卫生化学实验二紫外分光光度法测定蛋白质的含量一、实验目的了解紫外-可见分光光度计的基本结构；掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理；熟悉紫外分光光度法实验技术。二、实验原理280nm左右。在一定实验条件下，蛋白质溶液的吸Lambert–Beer定律，据此可对蛋白质进行定量分析。三、实验仪器与试剂UV-2450紫外-可见分光光度计。石英比色皿，胶头吸管，比色管，烧杯，容量瓶。生理盐水，蛋白质标准溶液（l，未知蛋白质溶液。四、实验步骤吸收光谱曲线的绘制：以生理盐水作参比，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，从200～400nm血清白蛋白的吸收曲线并找出最大吸收波长（λ。标准曲线的绘制：5.00mg/ml0.000.501.001.502.00ml，10ml比色管中，用生理盐水稀释至刻度，摇匀。以生理盐水作参比，在λmax未知蛋白质溶液的测定：10mlmax波长下测定吸光度。五、实验结果通过吸收光谱的测定与绘制得到最大吸收波长λmax。在278nm波长下，各浓度的标准蛋白溶液的吸光度结果见附件图1。278nm0.6410.973mg/ml。根据公式得出待测蛋白质溶液浓度为：Cx=C×稀释倍数=0.937×10÷4=2.342mg/ml其中Cx为待测蛋白质溶液的质量浓度；C为由标准曲线确定的被测溶液蛋白质的质量浓度六、注意事项pHpH要一致。280nm的吸光系数也不同。样品280nm260nm算蛋白质的浓度。蛋白
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