实验一 培养基的配制与灭菌课件

实验一

植物培养基的制备与灭菌一、实验目的1、学习和了解培养基母液的配制方法。2、掌握培养基的配制方法。3、学习和了解培养基、器皿和相关设备的灭菌方法。二、主要实验用具和仪器设备烧杯（1000ml、500ml、100ml、50ml）、量筒（2000ml、1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、25ml、10ml）、容量瓶（1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、25ml）、试剂瓶（1000ml、500ml、200ml、100ml、50ml）、玻璃棒、油性标记笔、移液枪（5ml、1ml、200µl、100µl）、对应的枪头、培养基瓶（1000ml、500ml、200ml）等。电子天平（感量为0.1mg、10mg）、pH计、灭菌锅、微波炉、磁力搅拌器、电磁炉、超净工作台等。三、实验药品

按培养基配方准备。1NNaOH、1NHCl。四、实验内容（一）MS培养基母液的配制1、大量元素母液的配制（配1L）无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大10倍，分别用50ml烧杯称量，用蒸馏水溶解，必要时加热。溶解后，倒入1000ml容量瓶中，最后用蒸馏水定容。在混合定容时，必须最后加入氯化钙，因为氯化钙与磷酸二氢钾能形成难溶于水的沉淀。将配好的混合液倒入细口试剂瓶中，贴好标签。配制培养基时，每配1000ml培养基，取大量元素母液100ml。2、微量元素母液的配制（配0.5L）无机盐中微量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大100倍，分别用50ml烧杯称量，用蒸馏水溶解，必要时加热。溶解后，倒入500ml容量瓶中，最后用蒸馏水定容。化合物名称每升培养基用量（mg/L）扩大100倍称量（mg/0.5L）备注MnSO4●4H2O22.31115每升培养基取母液10mlZnSO4●7H2O8.6430H3BO36.2310KI0.8341.5Na2MoO4●2H2O0.2512.5CuSO4●5H2O0.0251.25CoCl2●6H2O0.0251.253、铁盐母液的配制（配0.5L）目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。常常配成200倍母液，溶解时可加热。化合物名称每升培养基用量（mg/L）扩大200倍称量（g/0.5L）备注Na2EDTA37.253.725每升培养基取母液5mlFeSO4●7H2O27.852.7854、有机物母液的配制（配0.5L）MS培养基中，有机物为甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫氨素（V-B1）、盐酸吡哆素（V-B6），常常配成1000倍或100倍母液。本实验将有机物配成100倍母液。化合物名称每升培养基用量（mg/L）扩大100倍称量（mg/0.5L）备注Glycine（甘氨酸）2.0100每升培养基取母液10mlThiamine-HCl（VB1）0.420Pyridoxine-HCl(VB6)0.525Nicotinicacid(烟酸)0.525Inositol（肌醇）10050005、植物生长调节剂（激素）母液的配制配制生长素类，如2,4-D、萘乙酸、吲哚乙酸等，应先用少量（1-2ml）的乙醇溶解，然后用蒸馏水定容；配制细胞分裂素时，先用少量的1NHCl或1NNaOH溶解，然后用蒸馏水定容。最终各种激素母液浓度应均为1mg/ml。

以上各种母液必须用蒸馏水配制，然后保存在冰箱（4℃）中，一般可保存几个月，当发现沉淀或霉团时，则不能继续使用。培养基配制：药品名称母液倍或母液浓度（mg/ml）配制1L培养基所需母液量(ml)或直接称量量（g）MS1MS2MS3大量元素10倍液100ml

100ml

100ml

微量元素100倍液10ml10ml10ml铁盐200倍液5

ml5

ml5

ml有机物质100倍液10ml

10ml

10ml

2,4-D1.0mg/ml1ml——

1ml

NAA1.0mg/ml——0.2ml

——

KT1.0mg/ml0.1ml

1.0ml——

蔗糖30g30g30g30g琼脂8g8g8g——pH值5.85.85.85.82、配培养基时大量体积的溶液可以用量筒（选择合适的量程），少量的用移液枪，用完后调回最大量程；每取完一种母液必须换枪头，防止交叉污染。3、每10人1组，每组选择配1种培养基，每种培养基配1L。以上培养基pH值在灭菌前调至5.8。五、作业要求：完成实验报告，回答下面的思考题1、根据以下所给母液浓度、蔗糖和琼脂量，配制烟草愈伤组织诱导和培养的培养基（MS1），按MS配方（MurashigeandSkoog,1962）计算各种母液吸取量或药品的直接称量量。2、简述高压蒸气灭菌的步骤；培养基采用高压蒸气灭菌应注意哪些事项？

药品名称母液倍或母液浓度（mg/ml）配制1L培养基所需母液量(ml)或质量（g）配制0.25L培养基所需母液量(ml)或直接称量量（g）MS1MS2MS3大量元素10倍液

微量元素100倍液

铁盐200倍液