讲基因工程操作程序课件推选优秀ppt

讲基因工程(jīyīngōngchéng)操作程序课件第一页，共30页。目的(mùdì)基因的检测与鉴定基因工程(jīyīngōngchéng)的基本操作程序的步骤：目的(mùdì)基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞第二页，共30页。阅读(yuèdú)与思考1、什么是目的基因？2、获取(huòqǔ)目的基因的方法有哪些？其操作过程分别是怎样的？第三页，共30页。一、目的基因(jīyīn)的获取1、目的(mùdì)基因概念：主要指的是编码蛋白质的结构基因。也可以是一些具有调控作用的因子。2、目的(mùdì)基因获取方法：从基因文库中获取目的(mùdì)基因利用PCR技术扩增目的(mùdì)基因化学方法直接人工合成第四页，共30页。从基因文库中获取目的(mùdì)基因基因文库：将含有某种生物不同(bùtónɡ)基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同(bùtónɡ)基因，称为基因文库。基因文库

基因组文库(wénkù)部分基因文库（如cDNA文库）第五页，共30页。基因文库的构建(ɡòujiàn)过程基因组文库(wénkù)限制酶供体细胞的全部DNA大量DNA片段拼接到载体上导入受体细胞扩增第六页，共30页。基因文库的构建(ɡòujiàn)过程mRNA单链DNA

双链DNA逆转录cDNA文库(wénkù)第七页，共30页。如何(rúhé)从基因文库中找到所需要的基因？依据目的基因(jīyīn)的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列(xùliè)基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性。从基因文库中获取目的基因第八页，共30页。第九页，共30页。一段有特殊结构的DNA片段。利用PCR技术(jìshù)扩增目的基因聚合酶链式反应基因文库的构建(ɡòujiàn)过程目的基因是否翻译出蛋白质目的(mùdì)基因的获取目的(mùdì)基因的获取聚合酶链式反应四、目的基因的检测与鉴定目的基因(jīyīn)的检测内容和方法DNA复制使目的基因能够(nénggòu)表达和发挥作用。基因组文库(wénkù)大肠杆菌的转化(zhuǎnhuà)过程:第二十一页，共30页。目的(mùdì)基因的获取利用PCR技术扩增目的(mùdì)基因PCR的全称(quánchēnɡ)：聚合酶链式反应PCR的原理：DNA复制PCR技术扩增目的基因的前提条件：要有一段已知的目的基因的核苷酸序列。第十页，共30页。模板(múbǎn)原料引物酶控制温度利用(lìyòng)PCR技术扩增目的基因——目的(mùdì)基因DNA——四种脱氧核苷酸——如单链DNA分子片段——耐热的DNA聚合酶——PCR仪自动调控PCR的条件：第十一页，共30页。PCR的过程(guòchéng)：利用PCR技术(jìshù)扩增目的基因变性(biànxìng)(90-95℃)复性(55-60℃)(退火）延伸(70-75℃)第十二页，共30页。基因组文库(wénkù)基因文库的构建(ɡòujiàn)过程目的基因(jīyīn)的检测内容和方法基因文库的构建(ɡòujiàn)过程DNA复制四、目的(mùdì)基因的检测与鉴定第二十五页，共30页。依据目的基因(jīyīn)的有关信息。利用PCR技术(jìshù)扩增目的基因繁殖(fánzhí)快，多为单细胞，遗传物质相对较少。三、目的(mùdì)基因导入受体细胞用化学(huàxué)方法直接人工合成条件(tiáojiàn)：基因(jīyīn)较小，核苷酸序列已知。第十三页，共30页。二、基因表达载体的构建(ɡòujiàn)—核心用切目的(mùdì)基因相同的限制性内切酶切割质粒第十四页，共30页。二、基因(jīyīn)表达载体的构建—核心第十五页，共30页。二、基因表达载体(zàitǐ)的构建—核心目的(mùdì)基因第十六页，共30页。二、基因(jīyīn)表达载体的构建—核心1、基因(jīyīn)表达载体的组成目的基因启动子:终止子:标记(biāojì)基因、复制原点等一段有特殊结构的DNA片段。位于基因的首端。一段有特殊结构的DNA片段。位于基因的尾端。第十七页，共30页。启动子的作用(zuòyòng)：二、基因表达载体的构建(ɡòujiàn)—核心终止子作用(zuòyòng)：使转录在所需要的地方停止。标记基因作用：是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来，如青霉素基因。

是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。第十八页，共30页。二、基因(jīyīn)表达载体的构建—核心2、基因表达(biǎodá)载体的构建目的：a.使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。b.使目的基因能够(nénggòu)表达和发挥作用。第十九页，共30页。三、目的(mùdì)基因导入受体细胞1、什么是转化？2、目的基因导入植物细胞(xìbāo)常用的方法是什么？具体过程是怎样的？3、目的基因导入动物细胞(xìbāo)常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？4、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？第二十页，共30页。转化(zhuǎnhuà)目的基因进入(jìnrù)受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。三、目的(mùdì)基因导入受体细胞第二十一页，共30页。1.目的基因导入植物(zhíwù)细胞常用的方法:农杆菌转化法、基因枪法、花粉(huāfěn)管通道法农杆菌的特点(tèdiǎn):a.易感染双子叶植物和祼子植物。b.具有趋化性。c.Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上三、目的基因导入受体细胞第二十二页，共30页。三、目的(mùdì)基因导入受体细胞1.目的(mùdì)基因导入植物细胞农杆菌(gǎnjūn)转化法的导入过程:构建基因表达载体转入农杆菌植物细胞导入稳定维持和表达第二十三页，共30页。２.目的(mùdì)基因导入动物细胞常用的方法:显微(xiǎnwēi)注射技术操作程序：三、目的(mùdì)基因导入受体细胞a.先提纯含目的基因的表达载体b.从动物体内取出卵(受精卵）c.显微注射仪进行显微注射d.将含目的基因的受精卵移植到输卵管或子宫中发育成新个体第二十四页，共30页。3.目的(mùdì)基因导入微生物细胞原核生物的特点:繁殖(fánzhí)快，多为单细胞，遗传物质相对较少。大肠杆菌的转化(zhuǎnhuà)过程:用Ca2+处理细胞增加细胞壁的透性，与细胞膜无关三、目的基因导入受体细胞→

感受态细胞重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA分子第二十五页，共30页。四、目的(mùdì)基因的检测与鉴定1、导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？2、什么是DNA分子探针？检测时的DNA探针通过什么原理来检测目的基因和相应(xiāngyīng)的mRNA？3、利用抗体－抗原杂交检测的原理是什么？第二十六页，共30页。1.目的(mùdì)基因是否插入受体细胞染色体的DNA上目的基因的检测内容(nèiróng)和方法检测(jiǎncè)方法:DNA分子杂交技术DNA探针：用放射性同位素等作标记的含有目的基因的DNA片段。四、目的基因的检测与鉴定第二十七页，共30页。DNA分子杂交(zájiāo)技术基因探针：核酸分子探针是指特定的已知核酸片段，能与互补核酸序列退火杂交，用于对待测核酸样品中特定基因顺序的探测(tàncè)。满足：（1）必须是单链，（2）带有容易被检测出来的标记物。第二十八页，共30页。2.目的(mùdì)基因是否