IVF实验室的基本操作课件

IVF实验室的基本操作实验室操作原则

防止污染配子标本的标记；受精、胚胎移植；

两人核对毒性测试；培养液、耗材的使用；实验室的质量控制和管理无误无菌无毒辅助生殖技术基本操作配子、胚胎培养系统1配子的收集和处理2体外受精技术3胚胎培养和移植4胚胎冷冻和解冻5培养液的准备取卵前一日下午进行原则：高效、方便、安全、经济四孔培养皿—卵处理精液所需培养液微滴培养—受精卵、胚胎胚胎移植液37℃，5%或6%CO2培箱内平衡过夜卵母细胞的获取注射hCG后36-38小时取卵阴道超声探头引导下经阴道穿刺抽吸卵泡核对姓名解剖显微镜下辨认卵冠丘复合物OCCC37℃,5－6%CO2

培养操作迅速，避光精液处理正常精液：同IUI极度少精：增加离心力死精症：低渗肿胀实验附睾穿刺精子：睾丸穿刺或活检精子：

1ml注射器针头挑碎组织，离心悬液附睾、睾丸精子的冷冻常规受精

取卵后4-8h

适应症：精液正常，轻度少、弱精症受精率：65－80％（MII卵）受精时间：长受精、短受精卵母细胞浆内单精子显微注射适应症：严重少弱精、梗阻性无精、畸精症、既往IVF常规受精失败史、某些不明原因不孕等时间：取卵后2小时剥卵：利用透明质酸酶（80mIU/ml)和机械法剥除颗粒细胞卵母细胞浆内单精子显微注射操作滴的准备：7％PVP加精装针显微注射受精率：70％非男性因素不孕ICSI治疗结局非男性因素不孕症，ICSI未显现出优势检查受精时间：受精后15－18小时机械法除去颗粒细胞及放射冠正常受精：两个原核，两个极体合子形态评价原核的大小、位置及方向核仁前体的数目、大小、分布胞浆的外观早期卵裂情况异常受精－多PN发生率：IVF5-8%ICSI1%发生机制：

2精子进入第2极体滞留双倍体卵母细胞未见原核－未受精可能机制

卵母细胞未成熟卵母细胞染色体异常卵裂率<10%

染色体二倍体率3%优胚率低(12/38)囊胚形成(0/12)(Noyes2008)

胚胎培养胚胎质量评价胚胎评价标准细胞数碎片:无碎片碎片<10%

碎片10－30％碎片30－50％碎片>50%

卵裂球均匀程度

2AA5AA4BA4CC胚胎移植操作选择需要移植的胚胎,移入移植滴内

35岁以下，首次移植的病人移植2枚胚胎

35岁以上，或非首次移植的病人移植3枚胚胎确认核对患者姓名D3orD5移植？移植液移植液移植液和胚胎气～20μl 气胚胎移植操作胚胎的冷冻:慢速冷冻室温15min室温5min室温15minPBS1.5M丙二醇1.5M丙二醇0.1M蔗糖慢冻速融法冷冻程序

20℃→－7℃3℃/min-7℃人工植冰

-7℃→－30℃0.3℃/min-30℃→－120℃30℃/min胚胎复苏12340.5M丙二醇0.2M蔗糖

5min0.2M蔗糖

5minPBS5min1.0M丙二醇0.2M蔗糖5min预防冰晶的再形成复苏程序：室温40s→30℃水浴1min胚胎冻融损伤复苏胚胎评价：>50%卵裂球完整存活复苏率>90%无损伤胚胎着床率高部分损伤胚胎着床能力下降玻璃化冷冻原理条件：高浓度冷冻保护剂极快的降温速度载体：开放式密闭式适应症：卵母细胞囊胚优点：复苏率高其他技术-IVM未成熟卵母细胞体外成