自身免疫病的检验课件

自身免疫病的检验一、自身免疫病的概述二、自身抗体的检测及临床意义广医临床免疫教研室徐霞主讲1自身免疫病的检验一、自身免疫病的概述1自身耐受与自身免疫Self-tolerance:

正常情况下，机体免疫系统对自身抗原物质不产生免疫应答或只产生极微弱的免疫应答Autoimmunity:

机体对自身组织成分产生自身抗体或自身免疫效应T细胞

Autoimmunedisease,AID由自身免疫应答引起的疾病称为自身免疫性疾病。2自身耐受与自身免疫Self-tolerance:2自身免疫病的基本特征多数病因不清患者以女性居多有遗传倾向血液中可检出高滴度的自身抗体和（或）与自身组织起反应的致敏淋巴细胞疾病的重叠现象病程较长，多迁延为慢性患病组织器官的病理特征为免疫炎症免疫抑制剂治疗可取得一定疗效用相同抗原在某些试验动物中可复制出相似的疾病模型3自身免疫病的基本特征多数病因不清3自身免疫病的发病机制1.隐蔽抗原的释放2.自身组织的改变3.共同抗原诱导4.遗传因素5.免疫调节失常4自身免疫病的发病机制1.隐蔽抗原的释放4

部分自身免疫病与HLA的相关性自身免疫病抗原相对危险值类风湿关节炎DR44.2

强直性脊柱炎B2763.1

系统性红斑狼疮DR35.8

桥本甲状腺炎DR53.2

毒性甲状腺肿DR33.0

多发性硬化症DR23.85部分自身免疫病与HLA的相关性5自身免疫病的分类器官特异性自身免疫病指自身免疫应答反应特异地作用于某器官引起相应的损害，可检出特异性的自身抗体非器官特异性自身免疫病指自身免疫应答反应非特异地出现在全身多系统、多器官和组织中，造成全身性病理改变，并可检出多种非特异性的自身抗体6自身免疫病的分类器官特异性自身免疫病6重症肌无力（myastheniagravis,MG）患者体内存在抗乙酰胆碱受体的自身抗体，引起以骨骼肌运动无力为特征的自身免疫病。毒性弥漫性甲状腺肿（Gravesdisease）患者血清中存在抗促甲状腺激素受体（TSHR）的IgG型自身抗体。以上两种疾病的免疫损伤机制均属II型超敏反应7重症肌无力（myastheniagravis,MG）7系统性红斑狼疮（SLE）是一种累及多器官、多系统的小血管及结缔组织疾病，好发女性，疾病呈渐进性，缓解与复发交替，体内存在多种自身抗体。类风湿关节炎（RA）本病特征以手脚小关节发病，向心对称性发展，血清和关节滑膜液中出现抗变性IgG抗体，即类风湿因子（rheumatoidfactor，RF）以上两种疾病发病机制属III型超敏反应。8系统性红斑狼疮（SLE）8自身抗体的检测及临床意义抗核抗体：Anti-nuclearantibody,ANA

是以真核细胞的核成分为靶抗原的器官非特异性自身抗体的总称ANA的性质主要是IgG,少数为IgM和IgA，无器官和种属特异性风湿性疾病：红斑狼疮、硬皮病、皮肌炎与多发性肌炎、类风湿关节炎、干燥综合症、混合结缔组织病等9自身抗体的检测及临床意义抗核抗体：Anti-nuclearANA类型1.抗核蛋白抗体2.抗DNA抗体抗双链DNA(dsDNA)抗体抗单链DNA(ssDNA)抗体3.抗ENA抗体10ANA类型1.抗核蛋白抗体10一、免疫荧光抗核体Immunofluorescenceanti-nuclearantibody,IFANA以Hep-2（人喉癌上皮细胞株）细胞为抗原基质+待测血清+荧光抗人Ig荧光显微镜下观察荧光核型11一、免疫荧光抗核体Immunofluorescencean1212常见核型：周边型：是抗dsDNA或抗脱氧核糖核蛋白（dsDNA+组蛋白，DNP）的形态学反应。高滴度周边型核荧光多见于SLE均质型：抗DNP或抗组蛋白抗体，也可是多种自身抗体高度密集的形态表现。多见于活动期SLE、药物性狼疮等。13常见核型：13颗粒型：抗ENA抗体。核仁型：抗核小体抗体，多见于硬皮病、皮肌炎及类分关等着丝点型：染色体区线状排列荧光（不超过46点），仅见于硬皮病（尤其是CREST综合症阳性率可达80%）14颗粒型：抗ENA抗体。14

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1616二、抗DNA抗体1.双链DNA(dsDNA)抗体对SLE有很高特异性2.单链DNA(ssDNA)抗体缺乏特异性，在各种感染、自身免疫病中均存在检测方法:免疫荧光法、放免分析法（Farr法）、滴金免疫测定法、ELISA17二、抗DNA抗体17三、抗可提取核抗原（Extractablenuclearantigen,ENA）抗体ENA是指小牛胸腺或兔胸腺在盐溶液中可提取的一部分核抗原1.抗Sm抗体是SLE的标记抗体,仅在SLE患者中能检测到,有很高的特异性,但只在1/3患者中出现.18三、抗可提取核抗原（Extractablenuclear2.抗核糖核蛋白(RNP)抗体高滴度的抗RNP抗体,尤其是抗U170000RNP抗体阳性对诊断MCTD有重要意义3.抗SSA(Ro)和SSB(La)抗体对干燥综合症(sjoergrensyndrome,SS)诊断有意义,尤其是SSB抗体具有特异性192.抗核糖核蛋白(RNP)抗体194.抗SCL-70抗体约40%的系统性硬皮病和70%的弥漫性硬皮病中SCL-70抗体阳性5.抗Jo-1抗体该抗体具有高度的肌炎特异性,多见于PM(45%)和DM(5%)6.抗rRNP抗体(抗核糖体抗体)

在10%的SLE中出现,具有此抗体时中枢NS病变率高204.抗SCL-70抗体20免疫印迹技术（Immunoblotting,IBT）检测ENA抗体的原理和流程ENA经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，各种抗原性多肽按分子量大小分离，电转移至硝酸纤维膜固定后，患者血清中的自身抗体即可通过酶连免疫反应与相应的蛋白多肽结合，在硝酸纤维膜上呈现特异性显色条带，参照各种已知阳性血清在膜上留下的显色区带的位置特征及显色区带对应的蛋白多肽抗原的分子特征，即可检测和识别多种自身抗体。21免疫印迹技术（Immunoblotting,IBT）检测EN

动物胸腺提取ENASDS

电转移至硝酸纤微膜加标本加酶标抗体

判断结果22动物胸腺提取ENA222323

2424方法特点：高分辨率、高灵敏度易于操作、长期保存从靶抗原蛋白多肽水平上检测和识别自身抗体一次可完成七种自身抗体的检测25方法特点：25国际上抗核抗体检测技术的发展趋势将特异性抗原基因转染Hep-2细胞以过度表达特定抗原，增强相应抗体检测的特异性及敏感性是IFANA最新的发展方向国际上开展以基因工程原理制备重组核抗原为基质建立自身抗体检测方法26国际上抗核抗体检测技术的发展趋势26类风湿因子（RF）是抗变性IgG的自身抗体，主要为IgM,也可见IgG,IgA。检测方法：胶乳颗粒凝集试验（只能检出IgM类RF），ELISA法（可检出各类RF）RF阳性支持早期RA的倾向性诊断27类风湿因子（RF）是抗变性IgG的自身抗体，主要为IgM,也其他自身抗体抗甲状腺球蛋白及微粒体抗体乔本氏甲状腺炎抗乙酰胆碱受体抗体重症肌无力抗平滑肌抗体肝、胆自身免疫病抗胃壁细胞抗体恶性贫血28其他自身抗体抗甲状腺球蛋白及微粒体抗体28自身免疫病的检验一、自身免疫病的概述二、自身抗体的检测及临床意义广医临床免疫教研室徐霞主讲29自身免疫病的检验一、自身免疫病的概述1自身耐受与自身免疫Self-tolerance:

正常情况下，机体免疫系统对自身抗原物质不产生免疫应答或只产生极微弱的免疫应答Autoimmunity:

机体对自身组织成分产生自身抗体或自身免疫效应T细胞

Autoimmunedisease,AID由自身免疫应答引起的疾病称为自身免疫性疾病。30自身耐受与自身免疫Self-tolerance:2自身免疫病的基本特征多数病因不清患者以女性居多有遗传倾向血液中可检出高滴度的自身抗体和（或）与自身组织起反应的致敏淋巴细胞疾病的重叠现象病程较长，多迁延为慢性患病组织器官的病理特征为免疫炎症免疫抑制剂治疗可取得一定疗效用相同抗原在某些试验动物中可复制出相似的疾病模型31自身免疫病的基本特征多数病因不清3自身免疫病的发病机制1.隐蔽抗原的释放2.自身组织的改变3.共同抗原诱导4.遗传因素5.免疫调节失常32自身免疫病的发病机制1.隐蔽抗原的释放4

部分自身免疫病与HLA的相关性自身免疫病抗原相对危险值类风湿关节炎DR44.2

强直性脊柱炎B2763.1

系统性红斑狼疮DR35.8

桥本甲状腺炎DR53.2

毒性甲状腺肿DR33.0

多发性硬化症DR23.833部分自身免疫病与HLA的相关性5自身免疫病的分类器官特异性自身免疫病指自身免疫应答反应特异地作用于某器官引起相应的损害，可检出特异性的自身抗体非器官特异性自身免疫病指自身免疫应答反应非特异地出现在全身多系统、多器官和组织中，造成全身性病理改变，并可检出多种非特异性的自身抗体34自身免疫病的分类器官特异性自身免疫病6重症肌无力（myastheniagravis,MG）患者体内存在抗乙酰胆碱受体的自身抗体，引起以骨骼肌运动无力为特征的自身免疫病。毒性弥漫性甲状腺肿（Gravesdisease）患者血清中存在抗促甲状腺激素受体（TSHR）的IgG型自身抗体。以上两种疾病的免疫损伤机制均属II型超敏反应35重症肌无力（myastheniagravis,MG）7系统性红斑狼疮（SLE）是一种累及多器官、多系统的小血管及结缔组织疾病，好发女性，疾病呈渐进性，缓解与复发交替，体内存在多种自身抗体。类风湿关节炎（RA）本病特征以手脚小关节发病，向心对称性发展，血清和关节滑膜液中出现抗变性IgG抗体，即类风湿因子（rheumatoidfactor，RF）以上两种疾病发病机制属III型超敏反应。36系统性红斑狼疮（SLE）8自身抗体的检测及临床意义抗核抗体：Anti-nuclearantibody,ANA

是以真核细胞的核成分为靶抗原的器官非特异性自身抗体的总称ANA的性质主要是IgG,少数为IgM和IgA，无器官和种属特异性风湿性疾病：红斑狼疮、硬皮病、皮肌炎与多发性肌炎、类风湿关节炎、干燥综合症、混合结缔组织病等37自身抗体的检测及临床意义抗核抗体：Anti-nuclearANA类型1.抗核蛋白抗体2.抗DNA抗体抗双链DNA(dsDNA)抗体抗单链DNA(ssDNA)抗体3.抗ENA抗体38ANA类型1.抗核蛋白抗体10一、免疫荧光抗核体Immunofluorescenceanti-nuclearantibody,IFANA以Hep-2（人喉癌上皮细胞株）细胞为抗原基质+待测血清+荧光抗人Ig荧光显微镜下观察荧光核型39一、免疫荧光抗核体Immunofluorescencean4012常见核型：周边型：是抗dsDNA或抗脱氧核糖核蛋白（dsDNA+组蛋白，DNP）的形态学反应。高滴度周边型核荧光多见于SLE均质型：抗DNP或抗组蛋白抗体，也可是多种自身抗体高度密集的形态表现。多见于活动期SLE、药物性狼疮等。41常见核型：13颗粒型：抗ENA抗体。核仁型：抗核小体抗体，多见于硬皮病、皮肌炎及类分关等着丝点型：染色体区线状排列荧光（不超过46点），仅见于硬皮病（尤其是CREST综合症阳性率可达80%）42颗粒型：抗ENA抗体。14

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4416二、抗DNA抗体1.双链DNA(dsDNA)抗体对SLE有很高特异性2.单链DNA(ssDNA)抗体缺乏特异性，在各种感染、自身免疫病中均存在检测方法:免疫荧光法、放免分析法（Farr法）、滴金免疫测定法、ELISA45二、抗DNA抗体17三、抗可提取核抗原（Extractablenuclearantigen,ENA）抗体ENA是指小牛胸腺或兔胸腺在盐溶液中可提取的一部分核抗原1.抗Sm抗体是SLE的标记抗体,仅在SLE患者中能检测到,有很高的特异性,但只在1/3患者中出现.46三、抗可提取核抗原（Extractablenuclear2.抗核糖核蛋白(RNP)抗体高滴度的抗RNP抗体,尤其是抗U170000RNP抗体阳性对诊断MCTD有重要意义3.抗SSA(Ro)和SSB(La)抗体对干燥综合症(sjoergrensyndrome,SS)诊断有意义,尤其是SSB抗体具有特异性472.抗核糖核蛋白(RNP)抗体194.抗SCL-70抗体约40%的系统性硬皮病和70%的弥漫性硬皮病中SCL-70抗体阳性5.抗Jo-1抗体该抗体具有高度的肌炎特异性,多见于PM(45%)和DM(5%)6.抗rRNP抗体(抗核糖体抗体)

在10%的SLE中出现,具有此抗体时中枢NS病变率高484.抗SCL-70抗体20免疫印迹技术（Immunoblotting,IBT）检测ENA抗体的原理和流程ENA经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，各种抗原性多肽按分子量大小分离，电转移至硝酸纤维膜固定后，患者血清中的自身抗体即可通过酶连免疫反应与相应的蛋白多肽结合，在硝酸纤维膜上呈现特异性显色条带，参照各种已知阳性血清