月季的花药培养3

种子有果皮包被着，（胚珠有子房壁包被着）被子植物裸子植物种子无果皮包被着，（胚珠无子房壁包被着）种子花的结构被子植物的有性生殖是在花里进行的，雌蕊和雄蕊是进行有性生殖的主要部分。雌蕊雄蕊雌蕊的结构花粉粒花粉管精子(2个)卵细胞极核（一）、被子植物的花花粉发育花丝花药：囊状结构，内有很多花粉粒雄蕊：一、基础知识药隔：由薄壁细胞构成，内有维管束花药花粉囊（4或2）囊壁花粉粒药隔药隔花粉囊囊壁花粉是小孢子母细胞胞经过减数分裂而形成的，因因此，花粉是是单倍体的生殖细胞②花粉粒的形成成①经历时期：：四分体时期、、单核期、双双核期四分体时期(小孢子)有丝分裂单核靠边期(小孢子)单核居中期(小孢子)花粉母细胞（小孢子母细胞）减数分裂精子精子有丝分裂花粉管细胞核核生殖细胞核生殖细胞营养细胞双核期两个精子和一一个营养细胞胞的基因型相相同1个花粉母细细胞4个小孢子减分有分4个花粉管细细胞核4个生殖细胞胞核有分8个精子(二)、产生生花粉植株的的两条途径（三）、影响响花药培养的的因素1、材料的选选择①时期－－－初初花期②选择合适的的花粉发育时期期是－－提高诱导导成功率的重重要因素只有某一个时时期对离体刺刺激敏感。最适合花药培培养的小孢子子发育时期为为单核靠边期措施？？2、培养基的的组成花药培养所采采用的培养基基因植物的不不同而有所变变化3、其他因素素亲本植株的生生长条件、材材料的低温预预处理以及接接种的密度等等对诱导成功功都有一定的的影响六、实验操作作（一）材料的的选取②某些植物的的花粉细胞核核不易着色，，需采用焙花青-铬矾矾法，这种方法能将将花粉细胞核染染成蓝黑色。。①最常用的方方法有醋酸洋红法1、方法①醋酸洋红法法染色机理醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞胞内有染色体体，染色体主主要成分是DNA和蛋白白质,易被碱性染料料着色染成红色。②醋酸洋红的的配置2、醋酸洋红红法将体积分数45％的醋酸酸100ml煮沸，缓缓缓加入1g洋洋红，在加热热回流8h，，冷却至50℃，过滤即即可。将花药放在载载玻片上，加加一滴质量分分数1％的醋醋酸洋红，用用镊柄将花药药捣碎，盖上上盖玻片在显显微镜下检查查。③染色操作3、焙花青——铬钒法将无水酒精与与冰醋酸按体体积比为3：1的比例混匀①卡诺氏固定定液的配制方方法将5g铬明矾矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水水中，溶解后后加入0.1g焙花青，，混匀并加热热至沸腾，煮煮沸5分钟后后冷却至室温温，过滤，加加蒸馏水定容容至100ml。②焙花青—铬铬钒溶液的配配制方法花药应该在卡诺氏固定液液中固定20min，，然后取出放放在载玻片上上，加焙花青—铬铬钒溶液染色色，盖上盖玻片后后在显微镜下下检查。③染色操作（二）材料的的消毒1、酒精处理理①花蕾用体积积分数为70%的酒酒精浸泡30秒，，立即取出。。②无菌水清洗洗③无菌吸水纸纸吸干花蕾表表面的水分2、消毒液处处理①放入质量分数为0.1%的氯氯化汞溶液中2~4分钟（也可可质量分数为1%的次氯氯酸钙溶液或或饱和漂白粉粉溶液）②无菌水冲冲洗3~5次次用于培养花药药，实际上多多数未熟，由由于它的外面面有花萼、花花瓣或颖片保保护，通常处于无菌菌状态，所以以只要将整个个花蕾或幼穗穗消毒即可。。（三）接种和和培养在无菌条件下下除去萼片和和花瓣用镊子子取出花药②要彻底去除除花丝，因为与花丝相相连的花药不不利于愈伤组组织或胚状体体的形成1、剥取花药药①勿损伤花药，，以免诱导出出非花粉愈伤伤组织注意：立即将花药接接种于培养基基上，通常每每瓶接种花药7-10个。2、接种①培养条件：：温度控制在在25℃左右，，不需要光照照。幼小植株形成成后才需要光光照。3、培养②培养：一般般经过20-30天培养养后，会发现现花药开裂，，长出愈伤组组织或释放出出胚状体长出愈伤组织织则将愈伤组组织及时转移移到分化培养养基上，以便便进一步分化化出再生植株株③注意：如果果花药开裂释释放出胚状体体，则一个花花药内就会产产生大量幼小小植株，必须在花药开开裂后尽快将将幼小植株分分开，分别移植到新新的培养基上上，否则这些些植株将很难难分开。在花药培养中中，特别是通通过愈伤组织织形成的花粉粉植株，常常常会出现染色色体倍性的变变化（主要原原因是营养核和生殖殖核融合造成的）4、鉴定和筛筛选5、植物组织织培养技术与与花药培养技技术的异同点点：项目相同点不同点植物组织培养技术离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。外植体为体细胞，染色体数无需加倍。花药培养技术取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。谢谢观看/欢迎下载BYFA