分子生物学考试复习题

PCRDNA复制反应，基本原理是依据细胞内DNA半保留复制DNADNADNA与人工合成的引物退DNAdNTPDNAPCRDNADNADNADNA的合成，即高温变性、低温退火、中温PCRDNA得以DNADNA?DNA?Tm70℃左右，DNA聚合酶以４种dNTP为原料，以目的DNA为模板，催化以引物３’末端为起点的5’→3’DNA链延伸DNAPCRDNA得到高效快速扩增。基因敲除的基本程序？答：通过DNA同源重组，使得胚胎干细胞特定的内源基因被破坏而造成功能丧失，然1、打靶载体2345、基因敲除胚胎干细胞注67、杂交育种获得纯合的基因敲除动物真核生物与原核生物基因表达调控的异同？（列表）答；原核基因表达调控特点：⑴RNARNA聚合酶识别特异性；⑵操纵子模型的普遍性；⑶阻遏蛋白与阻遏机制的普遍性（负性调节占主导聚合酶有三种，分别负责三种RNARNA10个亚基组成；⑵活性染色质结构发生变化；⑶正性调节占主导；⑷转录和翻译分隔进行；⑸转录后修饰、加工过程较复杂；⑹转录起始是基因表达调控的关键环节。ab表c组织器官上的表达的复杂性；与原核生物比较，真核生物基因表达调控具有自己的特点：a真核生物基因表bc转录与翻译的间断性，原核生物转录与翻译同时进行，而真核生物该两过程defRNA聚合酶种类多。4、DNA甲基化和修饰及转录调控的相关问题DNA甲基化是指胞嘧啶(C)52(m5C),是一种DNA复制后的酶促反应过程.DNA复制以后,在DNA甲基化酶的作用下,将S2(SAM)分子上的甲基转移到DNA分子中胞嘧啶残基的第5位碳原子上1随着甲基向DNA分子的引入,改变了DNA分子的构象,影响了DNA与蛋白质因子(RNA聚合)CpGCCpG二核苷酸序列出现的频率远远低于按核苷酸组成计算出的频率。由于这些CpGDNA上，因此这段序列往往被称为CpGDNA甲基化会抑制基因转录，DNADNA构想变化，从而影响了蛋白质与DNA的相互作用，抑制了转录因子与启动区DNAH1和含CCGGDNA分别形成复合体时，DNA的构型存在很大差异，甲基化达到一定程度是会发生从常规的B-DNAa-DNAa-DNA许多蛋白质赖以结合的部件缩为大沟而不利于基因转录的起始。DNAX染色体失活：哺乳动物中，雌性体细胞内存在两条x染体，而在雄性体细胞内只存在一条x染色体，这就要求必须对不同数量的x染色体进行剂量补偿，使雌性个体中的一条x染色x在看家基因启动子的Gpcx染色体失活可以防止雌性个体体内双倍xGpc岛胞嘧啶的甲基化与xGpC特异性失活转录本可以通过甲基化使来自于父方的那条染色体失活xist5x染色体中是完全甲基化的，而在失活的x染色体上则是非甲基化的，也就是说xistx染色体上转录而在活性x染色体上不转录的唯一基因，即xist基因的。5（1）乳糖操纵子（la：1、包括三个结构基因：、、A以及启动子，控制子和RNAO区中间开始，按Z-Y-A方向进行，每次转录出来的一条mRNA上都带有这三个基因，转录ZYAmRNA编码β-半乳糖苷酶，它可以将乳糖水解为半乳糖和葡萄糖；lacY：编码半乳糖苷透性3、调控方式：负调控：诱导物：实际上是异构乳糖。正调控：葡萄糖腺苷酸ATP无法转变成cAMPCAP-cAMPRNA酶无DNA上结构基因不表达、（2）基因表达，色氨酸或与其代谢有关的某种物质在阻遏过程（而不是诱导过程）中起作用。由于trp体系参与生物合成而不是降解，它不受葡萄糖或cAMP-CAP5步完成。每个环节需要一5mRNA上，分别以trpE、trpDtrpC、trpBtrpA代表，编码了邻氨基苯甲酸合成酶、邻氨基苯甲酸焦磷酸转移酶、邻氨基苯甲酸异构酶、色氨酸合成酶和吲哚甘油-3-trpE基trpL和trpa（不是trp。trp操纵子中产生阻遏物的基因是trpR，该基因距trp基因簇很远，后者在大肠杆菌染色体图上25min处，而前者则90min65min处还有一个tRNA合成酶trp的tRNATrp也参与trpLTrp存在a140RNA；当Trp7kb的mRNA，操纵子AUG在+162处。1．trptrpR基因突变常引起trpmRNA(aporepressor)除非培养基中有色氨酸，否则这个辅阻遏蛋白不会与操纵区结合。辅阻遏蛋白与色氨trpmRNA-操纵机制对色氨酸来说是一个一级开关，主管转录是否启动，相当于粗调开关。trp操纵子中对应于色氨酸生物合成的还有另一个系统进行细调控，指示已经启动的转录是否继续下去。这个细微调控是通过转录达到第一个结构基因之前的过早终止来实现的，由色氨酸的浓度来调节这种过早终止的频率。6、cDNA文库的构建cDNAmRNADNAcDNAcDNA与载体DNA重组，并转化到宿主细菌里或包装成噬菌体颗粒，得到一系列克隆群体。这样的cDNAcDNA文库可直接进行筛选目的基因，由于cDNA中不含cDNAmRNA2、cDNA3、cDNA4、cDNA与载体的连接：5DNADNA做载体，cDNA与cDNA文库。如采用噬菌体为载体，必需经过体外包装，形成噬菌体颗粒，感染宿主菌。RNA提取将用生物素标记的寡聚(dT)引物RNA(dT)7、人类基因组计划的科学意义？5因的产物及其功能。因转录与转录后调节。从整体上了解染色体结构，包括各种重复序列以及非转录“框架序列”的大小和组织，了解各种不同序列在形成染色体结构、DNA（4）研究空间结构对基因调节的作用。有些基因的表达调控序列与被调节基因从直线距离上看，似乎相距甚远，但若从整个染色体的空间结构上看则恰恰处于最佳的调节位置，因此，有必要从三维空间的角度来研究真核基因的表达调控规律。（5）DNA复制、重组等有关的序列。DNA的忠实复制保障了遗传的稳定性，DNADNA正常复制和重组有关的序列DNA突变、重排和染色体断裂等，了解疾病的分子机制，包括遗传性疾病、易感性疾病、放射性疾病甚至感染性疾病引发的分子病理学改变及其进程，为这些疾病的诊断、预（7）研究其周围序列的性质。了解有关病毒基因组侵染人类基因组后的影响，可能指导人（8）研究染色体和个体之间的多态性。这些知识可被广泛用于基因诊断、个体识别、亲子鉴定、组织配型、发育进化等许多医疗、司法和人类学的研究。此外，这些遗传信息还有助于研究人类历史进程、人类在地球上的分布与迁移以及人类与其他物种之间的比较。8、真核细胞与原核细胞在基因转录、翻译及DNA的空间结