金线莲不同组织DNA提取方法比较

金线莲不同组织DNA提取方法比较

刘泊钰苏春兰陈森兰龙祥玲杨榆杨金兰苏建睦朱惠Summary：金线莲是中国传统中药，具有清热凉血、除湿解毒等功效。进行金线莲分子育种及遗传转化需获得高质量DNA，本研究比较分析3种提取方法对金线莲根茎叶DNA提取结果表明：SDS法对金线莲根茎叶DNA的提取效果不好，使用CTAB法可获得高质量的金线莲茎段DNA，使用试剂盒法可获得高质量金线莲根、叶DNA。Key：金线莲;基因组;提取方法;CTAB金线莲是兰科开唇兰属多年生草本珍稀药用植物，主要分布在热带和亚热带地区，在我国以福建、台湾、江西和浙江等省份为主。金线莲是中国传统珍贵药材，全身药用，味平，性甘，具有清热凉血、除湿解毒等功效，可治疗肺热咳嗽、风湿骨痛、糖尿病、膀胱炎等疾病，普遍用于医疗、保健、美容及饮食等方面。目前，对金线莲的研究主要集中在活性成分分析及组培快繁，在分子育种及品种改良方面研究较少。进行分子育种及品种改良研究过程中，植物DNA的提取是必不可少的一步，植物DNA的质量直接影响下一步实验的进展。因此，本研究开展以金线莲为材料的基因组提取方法研究，旨在比较分析金线莲不同部位DNA提取效果及不同提取方法对金线莲DNA提取的效果，为金线莲分子育种及遗传转化提供理论依据。1材料与方法1.1试验材料本试验所用植物材料来自玉林师范学院生物与制药学院组织培养室培养的健康金线莲组培苗。1.2试验方法植物基因组提取方法为：CTAB法，SDS法，试剂盒法。分别使用3种方法提取金线莲根、茎、叶DNA，用凝胶电泳检测DNA完整性，用Nan-oDropOne超微量分光光度计检测DNA的浓度。2试验结果2.1凝胶电泳检测结果图1为琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性的结果，由图1可知，对于金线莲的根来说，试剂盒法提取金线莲根DNA效果最好，其次是CTAB法，SDS法提取效果最差;对于金线莲茎来说，CTAB法提取的效果最好，其次是试剂盒法，SDS法能提取出少量DNA;对于金线莲叶片，试剂盒提取的效果最好，CTAB法和SDS法提取的效果都不好。在所有方法中，除了使用试剂盒法提取叶片时无RNA污染外，其余方法均有少量RNA污染。2.2分光光度计检测DNA浓度所有DNA样品经过分光光度计检测结果如表1所示，浓度最高的是CTAB法提取金线莲茎的DNA，达到611.77ng/ul;其次是试剂盒法提取的根DNA，濃度为333.51ng/ul;浓度最低的是SDS法提取的金线莲叶片DNA，仅为69.49ng/ul。纯度最高的方法是试剂盒法，其次是CTAB法;在3种方法中，SDS法的效果最差，提取的浓度低、纯度低。3讨论综上所述，CTAB法提取金线莲茎段可获得较高的DNA浓度和纯度，使用试剂盒法可快速获得高浓度金线莲叶片和根DNA，SDS法不适合金线莲根茎叶DNA提取。金线莲化学成分中多糖类物质含量较多，CTAB作为阳离子去污剂，特别对多糖的去除效果尤为明显;赵喜华等通过SDS法提取杜鹃属DNA发现，SDS法对多糖及一些次生代谢物的提取，其DNA提取效果不明显，与本研究结论一致。试剂盒法能够决速获得植物基因组