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文档简介

实验十一大肠杆菌杂交

一、实验目的了解E.coli的杂交技术.掌握细菌基因重组的特点.F+、Hfr、F细菌重组的特点：形成部分二倍体：含有一个亲体F¯全部基因组和另一亲体部分基因组的合子，其中受体的基因组叫内基因子，供体的基因组叫外基因子。外基因子转移到受体以后，只有内基因子发生双交换形成稳定的重组子。

直接混合培养选择性培养基

二、实验原理（Hfr→F-）：细菌间接触→接合管形成→单链断裂→单链DNA从供体向受体转移→DNA双链的形成（部分二倍体）→重组交换（奇偶次交换）。E.coliK12的两个菌株HfrC

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strr()F三、材料、试剂和器材器皿及培养基9cm培养皿,三角瓶(150ml),加样枪及枪头(200l,1000l),EP管,试管基本培养基Vogel50:MgSO4.7H2O10g,柠檬酸100g,NaNH4HPO4·4H2O175g,K2HPO4500g平板用MM:Vogel502ml,葡萄糖2g,琼脂2g,DW98ml,pH7.0,8磅30min培养基肉汤培养基:牛肉膏0.5g,蛋白胨1g,NaCl0.5g，DW100ml,pH7.2,15磅15min半固体M:琼脂0.4g,DW100ml,pH7.0,15磅15min2.杂交

取3支灭菌试管,每支吸入2.5ml融化的半固体培养基,保温在45℃一支试管作杂交组合,HfrCF,2支作对照对照组试管各吸F及Hfr菌液0.5ml,杂交组合各吸HfrC和F菌液0.25ml,两手搓试管,以充分混匀和保温

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