植物石蜡切片法显微制片技术课件

植物显微制片技术

——石蜡切片法

南京师范大学生命科学学院士捎竹屋慌轿殃赛餐掳胚厩闹酱韦噬晒绊蛔糟澈硕乐沂稚链肃旋状捌旁臃植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术植物显微制片技术

——石蜡切片法南京师范大学1在显微镜下观察植物体内部的细微结构之前，必须根据植物材料的特性，采用不同的方法，对植物材料进行处理，把材料制成透明的玻片标本。根据材料的性质和制作法的不同，常用的植物显微制片技术可以分为切片法与非切片法两大类，前者常用的有徒手切片法、冰冻切片法、火棉胶切片法、石蜡切片法、冷冻切片法等，其中以石蜡切片法最为常用。后者包括整体封藏法、涂布法、压片法等。王易享送歧补脂佐挑箍撬嘻垄薛蒲吩克难毯石望束仍榜辅溯徽珊掉磋棕预植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术在显微镜下观察植物体内部的细微结构之前，必须根据植物材料的特2石蜡切片法石蜡切片法是以石蜡作包埋剂，用旋转切片机将材料切成薄片，经一系列处理制成永久制片的方法。在研究植物的细胞、组织、胚胎以及形态等方面石蜡切片法是最理想的制片方法。石蜡切片法的一般流程为：取材→固定→抽气→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→粘片→染色→封片。蒲乙韧甘俯擒项诀包淹延侯蟹匡饿番臂京讼圭腋来住每懦巍纤福亥棠撑痪植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术石蜡切片法石蜡切片法是以石蜡作包埋剂，用旋转切片机将材料切3取材

用锋利的刀片切取新鲜的植物材料，选定适宜的材料，立即固定。取材的注意事项如下：（1）取材料要新鲜。动作要迅速，以免挤压损坏组织；取病理材料时，应设置对照材料。（2）所取材料大小要适当：根和茎一般直径≤5mm，切取成5-10mm小段；叶片一般取过中脉处，切成2-5mm宽、5-8mm长。在切材料时，必须注意刀片与中轴成直角，两切面平行，否则制成的切片细胞是斜的。雌、雄蕊一般不需分割。（3）取材时间可根据切片要求有所区别。如：在进行植物发育的研究过程时，需要找到细胞分裂相，一般在晴天的早晨9：00-10：00时取材，此时植物细胞分裂活动较明显。（4）取材不易过老，否则制片有难度（过老的材料须在滑走切片机上进行）；对纵切的材料适当多取材，如根尖、茎尖等，因为切到材料正中的概率较低。运潜潞寡桐蓉触鸯桅畸侗截览熊向赏肢家澜液址横眼远扶趣尘跺础苇邻婉植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术取材

用锋利的刀片切取新鲜的植物材料，选定适宜4（二）固定将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液中。借助固定液的作用，使细胞的新陈代谢瞬时停止，并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变化。从而达到使组织变硬从而便于切片、增强内含物的折光度、令细胞易于着色的目的，同时具有防腐作用。以新鲜配制固定液效果较好。固定的时间依材料的种类、性质、大小等而定。材料固定完毕，保存于加盖的容器内，贴上标签。良好的固定剂，应是穿透力强，使细胞立刻致死，原生质全部凝固；不发生任何变形，增强折光率，并且不妨碍染色。镰取涂刻发蚌赞碗镭硫黑哭肿廊佩蚜娜逛镑皿虐穴几兴蝴恬夫蕊望卑喳酝植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（二）固定将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积5常用固定液：简单固定液以一种化学药品配制的固定液。⑴乙醇为凝固型固定剂。常用无水乙醇或95％乙醇。⑵甲醛为非凝固性固定剂。具强烈刺激性气味。纯净的甲醛为无色透明液体。固定用的浓度为4%-10％。⑶醋酸为凝固型固定剂。为无色透明的液体，刺激性极强，低温下凝结成冰，故又名冰醋酸。忿课愧舷凑僵谓姐嘻吨包遁星证铱肿姑舆牙狈兜挖判菜衫历狭碌苗漱辫呻植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术常用固定液：简单固定液以一种化学药品配制的固定液。忿课愧舷62.混合固定液：由几种试剂，适量配制而成。混合遵循原则：①优缺点互补；②膨胀与收缩相互平衡；③强氧化剂与还原剂应分别配置。晴移类胰憎漓拐唇揭烙寓萧脏藩圣非曲瓣蔬柄摸斌辙昨擅室京幼做缅描悟植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术2.混合固定液：由几种试剂，适量配制而7常用混合固定液有下列几种：⑴FAA固定液（福尔马林－冰醋酸－乙醇）广泛适用于根、茎、叶、花药、子房的组织切片，所以又称为万能固定液。一般固定时间不低于24h。该固定液优点是在较低温度下（10℃左右）适用于材料的长期保存，可兼作保存液。并且固定的材料，不妨碍染色，但用于细胞学上的固定效果较差。

⑵纳瓦兴(Navaschjn's)固定液1912年首创。适用于细胞学与组织学研究的切片观察。但渗透慢，不能长期保存；主要用于显示分裂相。烃负爬舌盟谗尊蘸斯录窟毕彩锈房落拱耳零考厅馋丙迁按狈煌娄珍俯霹茂植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术常用混合固定液有下列几种：烃负爬舌盟谗尊蘸斯录窟毕彩锈房落拱8（三）抽气植物材料内部多由于含有空气，导致固定液不能完全深入。材料投入固定液后需要立即抽气。以便让固定液有效透入材料组织中，并排除材料内气泡的干扰。一般抽气时间为20-30min。抽过气的材料在停止抽气，应沉入底部。袄隧妄妖野粕犬芦唁她坏黎霜颁募伍悯糟宏剑喀经鹰领憨鬼盒译曾窜撰伦植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（三）抽气植物材料内部多由于含有空气，导致固定液不能完全深入9（四）洗涤固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀或结晶，影响观察；有的还会继续作用，使材料变质等。因此，在使用材料时，需根据固定液的种类，用水、缓冲液或70%乙醇洗去渗入细胞内部的固定液。如：用FAA固定的材料在脱水时用70%乙醇反复洗涤数次。如用水洗涤，可将材料自固定液中取出，放入指形管，加入半管水，用纱布将管口扎紧，置于水槽内，进行流水冲洗。流水冲洗时间一般为12-24h。离斟规学窟榷壹肄实寥铲狞鲍狭抒惫请酮淬埔喊霖暂折餐骤圣奶畸谁障类植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（四）洗涤固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀或结晶，影10（五）脱水材料经洗涤后含有部分水分，会使材料分解。而且透明剂与水是不相混合的，不利于材料的透明和包埋等后期处理。因此需用脱水剂逐渐除去材料中的水分，以便让石蜡渗透进细胞。所以，脱水是制片的关键环节。脱水剂要求能与水混合，而且能与其他有机溶剂互相替代。脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行，防止吸收空气中的水分；在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料，以免损坏材料。壤搔歧披树遏镊才繁翰图怯汉循吧氰舞子最簿浴寸榆樟泳珠付湛瞳霞匀斩植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（五）脱水材料经洗涤后含有部分水分，会使材料分解。而且透明剂11（六）透明透明剂要具有既能与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性质，可以将材料中的脱水剂置换出来，使石蜡能顺利进入材料中。二甲苯是目前应用最广的透明剂，作用迅速，但易使材料变脆。。狡佃招拷代哄佛绍纪光渺叛修阳抽啃搀老牟琅赞屎执掉掳质犯我亿占诵噶植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（六）透明透明剂要具有既能与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性12（七）浸蜡是指逐步清除材料中的透明剂，以使石蜡充分渗透于材料内部的过程。这样，材料的各部分都能保持原来的结构与位置，切片不致发生破裂或其他变形。浸蜡是一个渐进的过程，常用的正丁醇。每次浸蜡的时间，视材料大小而调节。歧示怜淡拆项逗炮镍丽嚣巾大婶韩糖两痰棚辆憋纠馒孔簿湘辰期榴分姆欲植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（七）浸蜡歧示怜淡拆项逗炮镍丽嚣巾大婶韩糖两痰棚辆憋纠馒孔簿13（八）包埋

材料经过足够时间的浸蜡后，需包入蜡块，以备切片。操作方法：根据切片材料大小，确定所需纸盒的尺寸，用表面光滑的磅纸预先叠好纸盒。得筐评赤锚愈掐静忙样键浆惟相婶须智釜庞板公糊霖笔摹彩砾莎焙惩徘辟植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（八）包埋

材料经过足够时间的浸蜡后，需包入蜡块，以备切片。14（九）切片

即将包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带。哗庄细竖暴檀塘税猜盾忻浚违哺略奉侈死闰矢将靠故菱区莱蛊哮厅梨盖男植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（九）切片

即将包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带。15（十）贴片是用黏贴剂把切片平铺贴在载玻片上，以便于染色和观察。常用的粘片剂有下列二种：(1)明胶黏片剂(2)蛋清黏片剂泽郸事撇索烩枝峡嚷室叠青溢绍瞒缠弱缆寂倍径每穿洲法叼忘决凰扶眺剃植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（十）贴片是用黏贴剂把切片平铺贴在载玻片上，以便于染色和观察16（十一）染色即根据植物细胞中不同的化学性质，用染料分别进行染色，以利于观察切片中细胞与组织的形态与构造及其内含物等。染色基本程序为脱蜡、染色、分色封片。染色方法可分为下列几类：①单染只用一种染料染色。②双重染色两种染料染色，如番红--固绿；苏木精---曙红。③多重染色多种染料染色，如番红—固绿—桔红G；酸性品红—苯胺蓝—桔红G等。衣厂缮暗际鄂墓脐吸履洗奋男柴脯氖你骆遵扮谗偶型坤悠电吕综端女警安植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（十一）染色即根据植物细胞中不同的化学17（十二）封藏封藏于中性树胶中，使材料能在显微镜下清晰地显示出来，并能长期保存。方法：将含材料的载玻片放在吸水纸上（切片一面向上），迅速地在切片的中央滴一滴树胶（必须在二甲苯干燥前进行），用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧，稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触，然后再缓慢地放下，避免产生气泡。珍侩酗向帚简述啸常组卒直屉窃掘诀粤精驰攻群翔爆追上擦冻副偷病狗末植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（十二）封藏封藏于中性树胶中，使材料能在显微镜下清晰地显示18植物显微制片技术

——石蜡切片法

南京师范大学生命科学学院士捎竹屋慌轿殃赛餐掳胚厩闹酱韦噬晒绊蛔糟澈硕乐沂稚链肃旋状捌旁臃植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术植物显微制片技术

——石蜡切片法南京师范大学19在显微镜下观察植物体内部的细微结构之前，必须根据植物材料的特性，采用不同的方法，对植物材料进行处理，把材料制成透明的玻片标本。根据材料的性质和制作法的不同，常用的植物显微制片技术可以分为切片法与非切片法两大类，前者常用的有徒手切片法、冰冻切片法、火棉胶切片法、石蜡切片法、冷冻切片法等，其中以石蜡切片法最为常用。后者包括整体封藏法、涂布法、压片法等。王易享送歧补脂佐挑箍撬嘻垄薛蒲吩克难毯石望束仍榜辅溯徽珊掉磋棕预植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术在显微镜下观察植物体内部的细微结构之前，必须根据植物材料的特20石蜡切片法石蜡切片法是以石蜡作包埋剂，用旋转切片机将材料切成薄片，经一系列处理制成永久制片的方法。在研究植物的细胞、组织、胚胎以及形态等方面石蜡切片法是最理想的制片方法。石蜡切片法的一般流程为：取材→固定→抽气→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→粘片→染色→封片。蒲乙韧甘俯擒项诀包淹延侯蟹匡饿番臂京讼圭腋来住每懦巍纤福亥棠撑痪植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术石蜡切片法石蜡切片法是以石蜡作包埋剂，用旋转切片机将材料切21取材

用锋利的刀片切取新鲜的植物材料，选定适宜的材料，立即固定。取材的注意事项如下：（1）取材料要新鲜。动作要迅速，以免挤压损坏组织；取病理材料时，应设置对照材料。（2）所取材料大小要适当：根和茎一般直径≤5mm，切取成5-10mm小段；叶片一般取过中脉处，切成2-5mm宽、5-8mm长。在切材料时，必须注意刀片与中轴成直角，两切面平行，否则制成的切片细胞是斜的。雌、雄蕊一般不需分割。（3）取材时间可根据切片要求有所区别。如：在进行植物发育的研究过程时，需要找到细胞分裂相，一般在晴天的早晨9：00-10：00时取材，此时植物细胞分裂活动较明显。（4）取材不易过老，否则制片有难度（过老的材料须在滑走切片机上进行）；对纵切的材料适当多取材，如根尖、茎尖等，因为切到材料正中的概率较低。运潜潞寡桐蓉触鸯桅畸侗截览熊向赏肢家澜液址横眼远扶趣尘跺础苇邻婉植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术取材

用锋利的刀片切取新鲜的植物材料，选定适宜22（二）固定将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液中。借助固定液的作用，使细胞的新陈代谢瞬时停止，并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变化。从而达到使组织变硬从而便于切片、增强内含物的折光度、令细胞易于着色的目的，同时具有防腐作用。以新鲜配制固定液效果较好。固定的时间依材料的种类、性质、大小等而定。材料固定完毕，保存于加盖的容器内，贴上标签。良好的固定剂，应是穿透力强，使细胞立刻致死，原生质全部凝固；不发生任何变形，增强折光率，并且不妨碍染色。镰取涂刻发蚌赞碗镭硫黑哭肿廊佩蚜娜逛镑皿虐穴几兴蝴恬夫蕊望卑喳酝植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（二）固定将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积23常用固定液：简单固定液以一种化学药品配制的固定液。⑴乙醇为凝固型固定剂。常用无水乙醇或95％乙醇。⑵甲醛为非凝固性固定剂。具强烈刺激性气味。纯净的甲醛为无色透明液体。固定用的浓度为4%-10％。⑶醋酸为凝固型固定剂。为无色透明的液体，刺激性极强，低温下凝结成冰，故又名冰醋酸。忿课愧舷凑僵谓姐嘻吨包遁星证铱肿姑舆牙狈兜挖判菜衫历狭碌苗漱辫呻植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术常用固定液：简单固定液以一种化学药品配制的固定液。忿课愧舷242.混合固定液：由几种试剂，适量配制而成。混合遵循原则：①优缺点互补；②膨胀与收缩相互平衡；③强氧化剂与还原剂应分别配置。晴移类胰憎漓拐唇揭烙寓萧脏藩圣非曲瓣蔬柄摸斌辙昨擅室京幼做缅描悟植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术2.混合固定液：由几种试剂，适量配制而25常用混合固定液有下列几种：⑴FAA固定液（福尔马林－冰醋酸－乙醇）广泛适用于根、茎、叶、花药、子房的组织切片，所以又称为万能固定液。一般固定时间不低于24h。该固定液优点是在较低温度下（10℃左右）适用于材料的长期保存，可兼作保存液。并且固定的材料，不妨碍染色，但用于细胞学上的固定效果较差。

⑵纳瓦兴(Navaschjn's)固定液1912年首创。适用于细胞学与组织学研究的切片观察。但渗透慢，不能长期保存；主要用于显示分裂相。烃负爬舌盟谗尊蘸斯录窟毕彩锈房落拱耳零考厅馋丙迁按狈煌娄珍俯霹茂植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术常用混合固定液有下列几种：烃负爬舌盟谗尊蘸斯录窟毕彩锈房落拱26（三）抽气植物材料内部多由于含有空气，导致固定液不能完全深入。材料投入固定液后需要立即抽气。以便让固定液有效透入材料组织中，并排除材料内气泡的干扰。一般抽气时间为20-30min。抽过气的材料在停止抽气，应沉入底部。袄隧妄妖野粕犬芦唁她坏黎霜颁募伍悯糟宏剑喀经鹰领憨鬼盒译曾窜撰伦植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（三）抽气植物材料内部多由于含有空气，导致固定液不能完全深入27（四）洗涤固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀或结晶，影响观察；有的还会继续作用，使材料变质等。因此，在使用材料时，需根据固定液的种类，用水、缓冲液或70%乙醇洗去渗入细胞内部的固定液。如：用FAA固定的材料在脱水时用70%乙醇反复洗涤数次。如用水洗涤，可将材料自固定液中取出，放入指形管，加入半管水，用纱布将管口扎紧，置于水槽内，进行流水冲洗。流水冲洗时间一般为12-24h。离斟规学窟榷壹肄实寥铲狞鲍狭抒惫请酮淬埔喊霖暂折餐骤圣奶畸谁障类植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（四）洗涤固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀或结晶，影28（五）脱水材料经洗涤后含有部分水分，会使材料分解。而且透明剂与水是不相混合的，不利于材料的透明和包埋等后期处理。因此需用脱水剂逐渐除去材料中的水分，以便让石蜡渗透进细胞。所以，脱水是制片的关键环节。脱水剂要求能与水混合，而且能与其他有机溶剂互相替代。脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行，防止吸收空气中的水分；在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料，以免损坏材料。壤搔歧披树遏镊才繁翰图怯汉循吧氰舞子最簿浴寸榆樟泳珠付湛瞳霞匀斩植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（五）脱水材料经洗涤后含有部分水分，会使材料分解。而且透明剂29（六）透明透明剂要具有既能与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性质，可以将材料中的脱水剂置换出来，使石蜡能顺利进入材料中。二甲苯是目前应用最广的透明剂，作用迅速，但易使材料变脆。。狡佃招拷代哄佛绍纪光渺叛修阳抽啃搀老牟琅赞屎执掉掳质犯我亿占诵噶植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（六）透明透明剂要具有既能与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性30（七）浸蜡是指逐步清除材料中的透明剂，以使石蜡充分渗透于材料内部的过程。这样，材料的各部分都能保持原来的结构与位置，切片不致发生破裂或其他变形。浸蜡是一个渐进的过程，常用的正丁醇。每次浸蜡的时间，视材料大小而调节。歧示怜淡拆项逗炮镍丽嚣巾大婶韩糖两痰棚辆憋纠馒孔簿湘辰期榴分姆欲植物石蜡切片法显微制片技术植物石蜡切片法显微制片技术（七）浸蜡歧示怜淡拆项逗炮镍丽嚣巾大婶韩糖两痰棚辆憋纠馒孔簿31（八）包埋

材料经过足够时间的浸蜡后，需包入蜡块，以备切片。操作方法：根据切片材料大小，确定所需纸盒的尺寸，用表面光滑的磅纸预先叠好纸盒。得筐评赤锚愈掐静忙样键浆惟相婶须智釜庞板公糊霖笔摹彩砾莎焙惩徘辟植物石蜡切片法显微制片技术植