大学本科生物化学实验理论相关问题

细胞破碎机械法，酶法，化学法，物理法有机溶剂法破碎细胞原理，常用的有机溶剂有哪些有机溶剂溶解细胞壁并使之失稳。比如笨、甲苯、氯仿、二甲苯及高级醇等酶分解作用反复冻融法破碎细胞原理通过反复将细胞放在低温下突然冷却和室温下融化达到破壁作用层析技术什么叫层析技术？常用的层析技术有哪些？层析技术是利用混合物中各组分理化性质的差别（分子亲和力、吸附力、分子的形状和大小、分配系数等以不同程度分布在两个相，其中一个是固定相，另一个是流动相，从而使各组分以不同速度移动而使其分离的方法。常用技术有分配层析，离子交换层析，凝胶过滤层析，亲和层析，吸附层析指出常用层析技术的应用范围。凝胶层析法：⑴脱盐；⑵用于分离提纯；⑶测定高分子物质的分子量；⑷高分子溶液的浓缩SephadexG-100大小不同的分子经过的路线长短不同而达到分离作用4.SephadexG25810万的蛋白质能否在SephadexG-75将分子量分别为（9000b（4500c（11000）将它们按被洗脱下来的先后排序。c、a、b离子交换层析较高。离子交换层析的原理？根据自交换树脂对需要分离的各种离子的亲和力不同而达到分离主要依赖电荷间的相互作用,利用带电分子中电荷的微小的差异进行分离如果样品中只有Ala和His(AlapI=6.0,HispH4CM（阳离子交换剂结合的紧密？如果用pH4-7Ala用水灌注、不能有气泡说说离子交换层析中洗脱液的选择原则①阴离子交换剂选用阳离子缓冲液（Tris等，阳离子交换剂选用阴离子缓冲液（盐等，以防缓冲离子参与交换过程，降低交换剂的交换容量。②缓冲液pH值的选择要使被分离物质的电荷与平衡离子电荷的正负性相同。③选用的缓冲系统对分离过程无干扰。④要确定一定的离子强度。电泳原理常见的凝胶电泳有哪几种？说明其主要用途，并比较其主要优缺点。A．醋酸纤维素薄膜电泳。用于血清蛋白，血红蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋白，甲胎蛋白，类固醇及同工酶的分离分析中。优点是操作简单、快速、廉价缺点是它的分辨力不够高。 （比聚丙酰胺凝胶电泳低）B．DNA或者RNA分子的分离，酶谱法等。优点是操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分离的DNA片段。C．从分离原理和实际应用两方面简单说明SDSPAGE最主要的有以下几点：凝胶的配置中非变性凝胶不能加入SDS，而变性凝胶的有SDS。电泳载样缓冲液中非变性凝胶的不仅没有SDS，也没有巯基乙醇。SDS关。SDS胶电泳中碱性蛋白通常是在微酸性环境下进行，蛋白带正电荷，需要将阴极和阳极倒置才可以电泳。5.因为是非变性凝胶电泳，所有的电泳时候电流不能太大，以免电泳时产生的热量太多导致蛋白变性，而且步骤都要在0-4度的条件下进行，这样才可以保持蛋白质的活性，也可以降低蛋白质的水解作用。这点跟变性电泳也不一样。所以与SDS电泳相比，非变性凝胶大大降低了蛋白质变性发生的机率3.影响蛋白质电泳分辨率的主要因素有哪些？系统的pH值；.电场强度；.温度；电渗作用4.聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白时，使用的电泳缓冲液PH＝8.3，那么样品应点在哪端？为什么？在负极。因为电泳缓冲液PH＝8.3后，才能向正极移动，彼此才能分开（PH）蛋白质含量测定紫外吸收法与Folin紫外吸收法优点：简单快速，灵敏度高。缺点：核酸干扰若样品中含有核酸类杂质，应如何校正？校正:计算待测蛋白质溶液的OD280/OD260(mg/ml)=F×1/d×OD280×D计算该溶液的蛋白质浓度；比色杯的厚度（cm）试说明考马斯亮蓝G250考马斯亮蓝G250当该染料与蛋白质结合后为青色，在波长595nm度高0-1000g/mL，是常用的微量蛋白质快速测定法。缺点TritonX-10SDS等严重干扰测定。2min1h离心技术30，000×g，10cm,求转速r/min（rpm）?（两种方法）制备离心机有哪几种类型？比较它们的特点和用途。A．普通离心机；特点型号很多，容量不同，转速不同，控制不精密；用途固液沉淀分离。B．高速离心机；特点型号较多，转速不同，有控温装置，控制精密（时间、转速的分离。C．DNARNA白质分离提纯等。在离心场中物质沉降的速度与哪些因子有关颗粒的沉降速度不仅与离心力有关，而且与颗粒大小、密度以及介质黏度有关。差速区带离心法和等密度离心法的区别是什么？差速区带离心法：根据分离样品颗粒的不同沉降速度而分层；等密度区带离心法：根据微粒的不同密度而分层。常用密度梯度的材料有哪些？糖类（蔗糖、无机盐（氯化铯、硅溶胶Ludo、有机碘化物。几种离心技术的特点？A．为固液分离法。使用普通离心机。B．差速分级离心：在均匀介质中，利用各种物质粒子沉降速度的不同而分批分离的方法。C．不同粒子处于不同位置，则得到了分离。沉淀技术蛋白质沉淀的常用方法有哪些盐析沉淀法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法什么是盐析，盐析的原理，列举盐析时常用的盐一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。的。主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠简述等电点沉淀及原理通过调节溶液的pH值至某种溶质的等电点(pI)时，使其溶解度降低，沉淀析出，而与其他组分分离的方法称为等电点沉淀法。于悬浮液的过滤。什么是有机溶剂沉淀，列举常用的有机溶剂而与其他组分分离的方法称为有机溶剂沉淀法。常用的有机溶剂有乙醇、丙酮、异丙醇、甲醇等。酶的提取纯化与活力测定min30mmol是多少？（每分钟能催化1mmol底物转化成产物所需要的酶量定义为1个国际单位(IU)）从某细胞中提取的一种蛋白水解酶的粗提液300mL150mg蛋白质，总活力为3604mL0.08mg288比活力=酶活力单位数/酶蛋白质量纯化倍数=纯化后的比活力/粗抽提液比活力产率(回收率)=纯化后的总活力单位/粗抽提液总活力单位简述酶分离纯化的基本过程A．细菌，常采用加砂或加氧化铝研磨和超声波振荡方法破碎。B．（常用的浓缩方法）加中性盐或冷乙醇沉淀后再溶解，胶过滤浓缩以及超过滤浓缩法等。C．纯化：利用各种分离方法（盐析法、有机溶剂沉淀法、层析纯化法、等电点法吸附分离法）进行纯化。D结晶：浓缩液经过各种方法的纯化，可得到较纯的结晶产品。酶的制备及提取过程中应注意哪些事项常用的酶活力单位？U（指在特定条件）下，在11微摩尔底物的酶量、Kat（1。1Kat=6×107U，1U=16.67nKat比活力概念及意义比活力用每毫克蛋白所含的酶活力单位数表示。比活力=酶活力单位数/酶蛋白质量酶的比活力比活力代表酶制剂的纯度。对于同一种酶来说，比活力愈大，表示酶的纯度愈高。蛋白质电泳简述醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白基本原理。醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。带电颗粒在电场力作用下，向着与其电性相反的电极pH带正电荷而向负极移动。反之，则向正极移动。因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、分子的形状及大小有关，所以，可用电泳法将不同的蛋白质分离开来。PAGE因素有哪几种？简要说明。而提高了分辨率3.简要说明SDS原理：仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质应用：蛋白质纯度分析、蛋白质浓度测定、蛋白质水解分析、蛋白质修饰的鉴定、显示小分子多肽。影响电泳分离效果的主要因素有哪些？电泳介质PH、缓冲溶液的离子强度、电场强度的影响、电渗、支持物选择、电压浓缩效应：在进行）中由于凝胶孔径的不连续性种孔径、缓冲液离子成分(2种缓冲体系)、PH值（3种PH）成一条狭小的缝带，成为浓缩效应。电泳槽、烘干机透明液：9580ml20ml醋酸纤维薄膜电泳分离人血清实验方法中，染色液成分是什么？10B0.5g50ml15ml40ml混匀9.醋酸纤维薄膜电泳分离人血清实验方法中，漂洗液成分是什么？漂洗液：954.5ml，冰醋酸5ml50ml10.醋酸纤维薄膜电泳分离人血清实验方法中，电压正常范围是多大？电压过大会造成什么样的结果？电泳电压的大小，时间的长短与缓冲液的离子强度都有一定的关系。一般电流约0.4~0.6mA/cm’，电压110~160V，通电时间40~60min。电压高，电流大，电泳速度加快，时间缩短，但薄膜上蒸发严重，因此不能无限增大电流。维生素C的测定指出本实验采用的定量测定维生素C的方法有何优缺点？优点：简便易行，快速，比较准确。缺点：易受其它还原物质干扰，滴定终点难以确定。2,6-DA.氧化剂的作用。还原抗坏血酸。B．3.滴定管的使用洗涤、装液、计数、滴定纸层析分离氨基酸1．为什么苯丙氨酸的Rf值大于赖氨酸随着有机溶剂一起扩散，而赖氨酸正好相反。故最后苯丙氨酸走的更远些，因而使苯丙氨酸Rf较大些。2．为什么脯氨酸和茚三酮加热后是黄色斑点脯氨酸等伯胺氨基酸与茚三酮反应可生成黄色化合物。纸层析和柱层析的一般操作步骤纸层析：点样、层析、标记前沿、烘干、显色、得到层析图谱、标记色斑柱层析：装柱、平衡、上样、洗脱、收集、检测、测定双缩脲法测蛋白质含量双缩脲法定量测生物材料中蛋白质是否适合所有样品，如植物块茎等色或接近白色。故并非适用所有样品。比色测定时为什么要设计空白管？测定时常采用空白试验做参比。优点：快速，蛋白质特异性影响小。缺点：准确度差，蛋白质样品被破坏，干扰因素不易排除。淀粉酶活力的测定1．如何正确绘制和使用标准曲线?在制备标准曲线时，标准液浓度一般可选择5需要至少有三个点标准曲线才可用，绘制好的标准曲线只能供以后相同条件下操作测定相同物质时使用。2.．140℃水浴中保温的作用40°C先分别保温至最适温度，然后再进行酶反应，这样才能使测得的数据更准确。3.3