凯氏定氮仪原理及操作步骤

凯氏定氮仪原理及操作步骤凯氏定氮仪原理：蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸镂。然后碱化蒸储使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。.有机物中的胺根在强热和CuSO4浓H2SO4作用下，硝化生成(NH4)2SO4反应式为：2NH2+H2S04+2H(NH4)2S04(其中CuSO4故催化剂).在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸储释放出NH3,收集于H3BO3溶液中反应式为：(NH4)2SO4+2NaOH2NH3+2H2O+Na2SO42NH3+4H3BO3(NH4)2B4O7+5H2O.用已知浓度的H2SO4或HCI)标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量反应式为：(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2ONH4)2SO4+4H3BO3(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O2NH4C1+4H3BO3凯氏定氮仪操作步骤：（一）消化、准备6个凯氏烧瓶，标号。1、2、3号烧瓶中分别加入适当浓度的蛋白溶液1.0mL,样品要加到烧瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶颈上。再依次加入硫酸钾-硫酸铜接触剂0.3g,浓硫酸2.0mL,30%过氧化氢1.0mL。4、5、6号烧瓶作为空白对照，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质，对样品测定进行校正。4、5、6号烧瓶中加入蒸储水1.0mL代替样液，其余所加试剂与1、2、3号烧瓶相同。、将加好试剂的各烧瓶放置消化架上，接好抽气装置。先用微火加热煮沸，此时烧瓶内物质炭化变黑，并产生大量泡沫，务必注意防止气泡冲出管口。待泡沫消失停止产生后，加大火力，保持瓶内液体微沸，至溶液澄清后，再继续加热使消化液微沸15min。在消化过程中要随时转动烧瓶，以使内壁粘着物质均能流入底部，以保证样品完全消化。消化时放出的气体内含SO2具有强烈刺激性，因此自始自终应打开抽水泵将气体抽入自来水排出。整个消化过程均应在通风橱中进行。消化完全后，关闭火焰，使烧瓶冷却至室温。（二）蒸储和吸收蒸储和吸收是在微量凯氏定氮仪内进行的。凯氏定氮蒸储装置种类甚多，大体上都由蒸气发生、氨的蒸储和氨的吸收三部分组成。1、仪器的洗涤仪器安装前，各部件需经一般方法洗涤干净，所用橡皮管、塞须浸在10%NaOH液中，煮约10min,水洗、水煮10min,再水洗数次，然后安装并固定在一只铁架台上。仪器使用前，微量全部管道都须经水蒸气洗涤，以除去管道内可能残留的氨，正在使用的仪器，每次测样前，蒸气洗涤5min即可。较长时间未使用的仪器，重复蒸气洗涤，不得少于三次，并检查仪器是否正常。仔细检查各个连接处，保证不漏气。首先在蒸气发生器中加约2/3体积蒸储水，加入数滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影响结果，并放入少许沸石（或毛细管等），以防爆沸。沿小玻杯壁加入蒸储水约20mL让水经插管流入反应室，但玻杯内的水不要放光，塞上棒状玻塞，保持水封，防止漏气。蒸气发生后，立即关闭废液排放管上的开关，使蒸气只能进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾，蒸出蒸气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却，在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。从定氮球发烫开始计时，连续蒸煮5min,然后移开煤气灯。冲洗完毕，夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接橡胶管，由于气体冷却压力降低，反应室内废液自动抽到反应室外壳中，打开废液排出口夹子放出废液。如此清洗2〜3次，再在冷凝管下换放一个盛有硼酸-指示剂混合液的锥形瓶使冷凝管下口完全浸没在溶液中，蒸储1〜2min,观察锥形瓶内的溶液是否变色。如不变色，表示蒸储装置内部已洗干净。移去锥形瓶，再蒸储1〜2min,用蒸储水冲洗冷凝器下口，关闭煤气灯，仪器即可供测样品使用。2、无机氮标准样品的蒸储吸收由于定氮操作繁琐，为了熟悉蒸储和滴定的操作技术，初学者宜先用无机氮标准样品进行反复练习，再进行有机氮未知样品的测定。常用巳知浓度的标准硫酸镂测试三次取洁净的100mL锥形瓶五只，依次加入2%月酸溶液20mL次甲基蓝-甲基红混合指示剂（呈紫红色）3〜4滴，盖好瓶口待用。取其中一只锥形瓶承接在冷凝管下端，并使冷凝管的出口浸没在溶液中。注意：在此操作之前必须先打开收集器活塞，以免锥形瓶内液体倒吸。准确吸取2mL硫酸镂标准液加到玻杯中，小心提起棒状玻塞使硫酸镂溶液慢慢流入蒸储瓶中，用少量蒸储水冲洗小玻杯3次，一并放人蒸储瓶中。然后用量筒向小玻杯中加入10mL3册NaOH容液，使碱液慢慢流入蒸储瓶中，在碱液尚未完全流入时，将棒状玻塞盖紧。向小玻杯中加约5mL蒸储水，再慢慢打开玻塞，使一半水流入蒸储瓶，一半留在小玻杯中作水封。关闭收集器活塞，加热蒸气发生器，进行蒸储。锥形瓶中的硼酸-指示剂混合液由于吸收了氨，由紫红色变成绿色。自变色时起，再蒸储3〜5min,移动锥形瓶使瓶内液面离开冷凝管下口约lcm,并用少量蒸储水冲洗冷凝管下口，再继续蒸储1min,移开锥形瓶，盖好，准备滴定。在一次蒸储完毕后，移去煤气灯，夹紧蒸气发生器与收集器间的橡胶管，排除反应完毕的废液，用水冲洗小玻杯几次，并将废液排除。如此反复冲洗干净后，即可进行下一个样品的蒸储。按以上方法用标准硫酸镂再做两次。另取2mL蒸储水代替标准硫酸镂进行空白测定二次。将各次蒸储的锥形瓶一起滴定。3、未知样品及空白的蒸储吸收将消化好的蛋白样品三支，空白对照液三支，依次作蒸储吸收。加5mL热的蒸储水至消化好的样品或空白对照液中，通过小玻杯加到反应室中，再用热蒸储水洗涤小玻杯3次，每次用水量约3mL洗涤液一并倒入反应室内。其余操作按标准硫酸镂的蒸储进行。由于消化液内硫酸钾浓度高而呈粘稠状，不易从凯氏烧瓶内倒出，必须加入热蒸储水5mL稀释之，如果有结晶析出，必须微热溶解，趁热加入玻杯，使其流入反应室。止匕外，还应当注意趁仪器洗涤尚未完全冷却时立即加入样品或空白对照液，否则消化液通过冷却的管道容易析出结晶，造成堵塞。（三）凯氏定氮仪滴定样品和空白蒸储完毕后，一起进行滴定。打开接受瓶盖，用酸式微量滴定管以0.0100mol/L的标准盐酸溶液进行滴定。待滴至瓶内溶液呈暗灰色时，用蒸储水将锥形瓶内壁四周淋洗一次。若振摇后复现绿色，应再小心滴入标准盐酸溶液半滴，振摇观察瓶内溶液颜色变化，暗灰