圆二色光谱仪原理应用

圆二色性光谱及其应用(CircularDichroism,CD)光学活性分子对左、右圆偏光的吸收率的差值1、自然光*光具有波、粒二象性，是横电磁波。只有横波才有偏振现象:光矢量的振动方向与光的传播方向垂直，在垂直于光传播方向的平面内，有不同的振动方向。*由于感光作用都是E引起的,因而，将E作为光矢量。-*振动面:E与光传播方向组成的平面。从统计规律上说，自然光的光振动:在垂直于光速的平面上遍布所有方向，沿各方向振动的光矢量呈对称分布，相应光矢量的振幅(光强度)相等。超高压短弧血E：在高压纯净蛊气中放电发光。(1)高亮度的点光源；日光色。色温接近6000K；在可乳光区连续光谱:高显色性，显色指数>95；在整个寿命期内维持光色特性；高电弧稳定性；热重启能力:启动后即能达到接诉最大光输出:电弧光斑小、易聚光。El梯BI偏旅*I2、光的偏振双折射现象：一束光射入各向异性晶体后有两束折射光。尼科耳棱镜。在生物样品中，肌肉纤维、骨骼和牙齿等具有各向异性，淀粉粒、染色体和纺锤体等具有双折射性，因此被用于组织细胞的化学研究OrdinaryRayOrdinaryRayNicolPolarizingPrism名称折射定律折射率传播方向

寻常光（0光）遵守对于晶体一切方向都具有相同的折射率在入射面内非常光不遵守折射率随方向而变化不定在入射面内（e光）o光和e光光的吸收和圆二o光和e光光的吸收和圆二irculardichroism,CD）、n、、n、n轨道）。如果电子吸收了外界的能量，它就从基态跃迁到激发态能级。如果所有的跃迁仅在基态的最低振动能级和第激发态之间，吸收光谱将是很狭窄而不连续的谱线。由于分子的价电子跃迁总伴随着振动和转动能级的跃迁，所以，紫外分光光度计测定物质的吸收光谱，虽然有一最大吸收峰值，但都是具有波长宽度并相对平滑的曲线。宀氨基幽期・可见光区:各种氨基酸都没有光吸收。-紫外光区:只有芳香族色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸有吸收。-氨基酸分子内的紫外生色基团:U引喙基、酚径基、苯基、二硫键肽的圆二色谱*活性肽构象与其生理功能的关系•肽的构象也是蛋白质构象的一种模型。*肽的圆二色性为研究肽在溶液中的构象提供了重要信息。Far-UV(250-170nm)SecondaryStructure:a-helix,P-sheet,P-turn,randomTertiaryStructureClass:all-a,a+B,a/B,all-®,all-pilNear-UV但20・250nm)：aromaticsidechainNear-UV~Near-infrared但00-1000nm)：、咪哇基和竣基等。coloredproteins芳香氨基酸残基及二硫键处于不对称微环境时，在近紫外区表现出CD信号丄苯丙氨酸（phenylalanine，Phe）：255、261和268nm附近；丄酪氨酸（tyrosine，Tyr）:277nm左右；丄色氨酸（tryptophan，Trp）:279、284和291nm附近；MainCDfeaturesofprotein2ndarystructures-band(nm)+band(nm)a-helix222192208B-sheet216195B-turn220-230(weak)180-190(strong)205polyproIIhelix190210-230weakRandomcoil2002123、估算蛋白质二级结构含量仅适合含量较高的蛋白质！%aHehx=一⑷込-°°°°33000十4000未知结构的蛋白的CD信号•将测得的CD曲线与标准曲线拟合。xa+xb+xc=1.0qt=xaqa+xbqb+xcqc

•改变xa、xb和xc，使qt与样本曲线最佳拟合（最小二乘法，leastsquaresminimization）•CDsignalofaproteindependsonits2ndarystructure(MagneticCircularDichroism,MCD)•磁性材料对