检验科PCR室作业指导书

PCR文件编号：ABCD-3-PR-01~31第A生效日期：20XXXXABCD人民医院检验科编制说明本分册文件可以作为单独申请卫生部PCRISO15189PCR200688目 录序号 主题内容PCRPCRPCRPCRPCRPCRPCRPCR基因扩增检测及结果分析临床标本的保存操作程序标本的采集运送接收程序PCRPCRPCRPCRPCRPCRPCRPCRPCR核酸扩增荧光仪操作维护规程干式恒温器操作维护规程离心机操作维护规程冰箱操作维护规程

代 页ABCD-3-PR-0 7ABCD-3-PR-0 8ABCD-3-PR-0 9ABCD-3-PR-0 10ABCD-3-PR-0 12ABCD-3-PR-0 13ABCD-3-PR-0 14ABCD-3-PR-0 17ABCD-3-PR-0 18ABCD-3-PR-1 21ABCD-3-PR-1 22ABCD-3-PR-1 24ABCD-3-PR-1 25ABCD-3-PR-1 26ABCD-3-PR-1 28ABCD-3-PR-1 30ABCD-3-PR-1 31ABCD-3-PR-1 33ABCD-3-PR-1 35ABCD-3-PR-2 36ABCD-3-PR-2 37ABCD-3-PR-2 43ABCD-3-PR-2 45ABCD-3-PR-2 47生物安全柜操作维护规程移液器操作维护规程沙眼衣原体核酸扩增荧光检测乙肝病毒核酸扩增荧光检测丙肝病毒核酸扩增荧光检测结核杆菌核酸扩增荧光检测高速冷冻离心机操作维护规附录 表格检验科基因检测实验室平面图实验室主要负责人简历表PCR实验室工作人员一览表PCR拒收标本记录本PCR试剂购买记录表试剂验收记录表PCR普通耗材验收记录表室间质评记录表PCR室内质控图PCR冰箱温度质控图仪器使用记录表仪器设备维护和校准记录表紫外消毒车消毒记录表应急处理登记表

ABCD-3-PR-2 49ABCD-3-PR-2 51ABCD-3-PR-2 54ABCD-3-PR-2 56ABCD-3-PR-2 58ABCD-3-PR-3 60ABCD-3-PR-3 62ABCD/001ABCD/002ABCD/003ABCD/004ABCD/005ABCD/006ABCD/007ABCD/008ABCD/009ABCD/010ABCD/011ABCD/012ABCD/013ABCD/014ABCD/015ABCD/016ABCD/017ABCD/018ABCD/019PCR垃圾处理记录表PCR耗材进购记录表试剂耗材供应商一览表

ABCD/020ABCD/021ABCD/022ABCD/023ABCD/024ABCD/025修订页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期1234567891011121314151617181920PCR实验室的设置及管理目的：可靠性。适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。负责人：细则：相关科研工作。本实验室采用实时荧光定量PCR、标本处理区（第二区、扩增分析区（三区。每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。各区标签颜色：红色（第一区、白（第二区（第三区（第一区（第二区、蓝色（第三区。标本的接收则在检验科标本接收处进行。不可混用。各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP不得逆向进入前一工作区。非本实验室工作人员，未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。实验完毕后做好清洁消毒工作。1.实验室设计平面图PCR实验室工作制度目的：防止差错、事故及纠纷的发生。适用范围：所有本实验室人员。负责人：细则：本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作各区的用品不得混用。试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作（见相关SOP。 应管和测定RNAcDNA（见相关SOP。DNAcDNAPCR（见相关SOP。力求准确、可靠。实验完毕，做好清洁、整理及分析统计等工作。定期进行保养与维修。爱护医院财产，注意安全；离开实验室前应关好门窗，检查水、电等。PCR实验室内务管理制度目的：保证实验室日常内务管理及清洁工作顺利进行。适用范围：实验室相关人员及医院相关清洁工人。负责人：细则：非本室工作人员未经允许不得进入实验室。各区的用品不得混用。实验人员要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、早退。向走动。所有仪器（PCR）验人员必须熟悉仪器性能后方允许操作，并严格遵守操作规程。带出本实验室。合格使用。行处理。注意保持实验室卫生整洁，严禁在室内抽烟、吃零食，非实验操作4.10负责检查实验室的仪器、设备。PCR实验室人员的配置及管理目的：员。适用范围：适用于实验室人员配置、管理、培训及考核。负责人：细则：人员要求以上技术职称或专科以上学历。实验室工作人员应参加卫生部或省临检中心举办的PCR训，并取得合格证。对于新进入本室的人员，如尚未取得PCR在实验室有培训合格证的上级技术人员的指导下进行实验工作人员配置21展需要，会适当增加工作人员。各级技术人员履行相应的工作职责。人员培训及考核实验室负责人或负责人指定人员参加每年卫生部PCR结会。1～21次PCR级继续教育项目，参加相关学术交流会议。安排未取得上岗培训合格证的工作人员在合适的时间内参加技术培训。科室不定期组织实验室内部实验人员学习、更新核酸扩增方面的a)日常工作质量b)c)d)在抱怨处理中的表现a)b)有科研能力,并有一定数量和质量的论文发表c)有独创性工作成果,经鉴定认可者d)受到有关部门或群众嘉奖者有下列情况者将受到惩处:a)工作质量问题较多，质控测评成绩不合格；b)不遵守规章制度并造成一定影响；c)不求上进。及有关部门批准后执行。人员管理表论文、研究成果、培训等相关材料复印件。1档案随时更新。本文涉及以下表格实验室主要负责人简历表PCR培训记录表人员档案卡PCR实验室清洁程序目的：保证实验室环境的整洁，防止污染。洁消毒工作。负责人： 操作人：细则：碍。低的物品放置到储存处，常用的物品要容易寻找到。抽屉、柜子、文件类物品要作好标记，以方便识别。2%7517515实验过程中如发生标本或试剂外溅，应立即用2%上半小时，然后用酒精擦洗，并用移动紫外灯消毒。开启30～60待紫外灯消毒时间足够后，依次关闭各区紫外灯并记录。混用，注意按照单一方向流程的原则来进行清洁。处理好各区废弃物，交医院集中处理。本文涉及以下表格实验室清洁消毒记录表垃圾处理记录表PCR标本唯一标识编号规则目的：保证标本编号的唯一性，也是准确发放报告的基础。适用范围：病毒、丙型肝炎病毒、结核杆菌、沙眼衣原体。负责人： 操作人：程序：按检测日期分类标记根据标本送检的日期，每天的标本对应标记一种唯一的代号。如当天为200531050301。按检测类型分类标记病毒标记为B，丙型肝炎病毒标记为HC，结核杆菌标记为TC。按验单接收顺序编号B01B02，第三个检测结核的验单编为B03特殊标本的编号其它医院送来的单和本医院的单要区分开等。编号步骤目对应一个唯一的编号（如050301T0。用笔在每张检验申请单和对应的样品管上作好相同的标记。医院、科室、送检医生、患者姓名、性别、年龄、标本类别、标本状态、送标本者、接收人、检验单号、标本唯一统编号等。处理好样品、点样后，将反应管放入扩增仪上开始扩增。f）果填入相应申请单。g）发放检验报告单。本文涉及以下图表：PCRPCR基因扩增实验室的要求目的：规定在各区内所进行的工作及其操作。适用范围：所有在本区内进行的工作。负责人： 操作人：程序：实验室分四区:标本接收区；试剂贮存、准备区；标本制备区；扩增区。进入各区严格按照单一方向进行，即试剂贮存、准备区——标本接收区——标本制备区——扩增区。各区及其设备、物品必须有明确的标记，严禁混用。进入PCR（含卫生员PCRPCR本室。尤其不得为找人，而逆向误入PCR总则PCR实验室工作人员应具备医学检验、微生物检验基本知识PCRPCR（笔等，不得混用，须贴上标签予以区别。实验室技术人员必须严格按照PCR仪器使用和废弃物处理等。（鞋，勤换洗工作服，以及遵守实验室的唯一流向的规定，严禁反向流动。进入PCRPCR煤气和门窗。定期校准和维修PCR备。标本接收区性手套。的记录本、纸和笔，每项记录，书写工整详细。垃圾袋，将垃圾带出实验室。每次实验结束后，清洁实验台及地面打开紫外灯消毒30记录紫外灯使用情况。试剂贮存、准备区细。准备好的试剂送入下一区，还原实验台面，将本区所有废弃带出实验室。白色工作服留在本区。本区维持相对正压状态（开启缓冲区的排气扇30标本制备区验室干、湿度，绘制冰箱温度图。情况。细。台内加样，记录标本的处理过程。记录仪器使用时间和运行状态。10％84验结束后方丢入垃圾袋，患者样品应按有生物传染性危险品对待。的垃圾袋，将垃圾带出本区。将蓝色工作服留在本区。30扩增产物检测区实验人员进入该区须在缓冲区更换专用粉色工作服及拖鞋。记录实验室干、湿度，绘制冰箱温度图。细。将传入本区加样后的试剂上机扩增。时间和运行状态。的垃圾袋，然后将垃圾带出实验室。将粉色工作服留在本室再离开实验室严禁本区物品带至其他区，该区需维持负压状态，排气扇24录紫外灯使用情况。本文涉及以下表格PCR冰箱温度质控图实验室清洁消毒记录表垃圾处理记录表紫外消毒车消毒记录表PCR废弃物的处理程序目的：保证实验室、实验人员和外部环境的安全。核酸扩增荧光检测实验室常用化学试剂EDTA乙醇、生理盐水等、实验室废弃物的处理；负责人： 操作人：细则：断传播途径中的重要性，并要求严格执行。（黑色）及生物污染垃圾袋（黄色102～4一次性塑料痰盂，用2%戊二醛液浸泡2～4小时后，放入黄色垃圾袋内交医院集中处理。废弃标本如血、尿、胸水、腹水、脑脊液、唾液、胃液、肠液、关节腔液等用10%的84液浸泡2～4小时后，交医院集中处理。盛标本的容器，若为一次性使用的纸质容器及其外面包被的废纸，15102～4压力蒸汽灭菌后备用。废弃标本及其容器装入黄色垃圾袋内、封闭，交医院污物处理中心处理。日常生活垃圾如纸屑等按一般垃圾交医院处理。本文涉及以下表格PCR基因扩增检测实验及结果分析1、目的：保证扩增及结果分析的标准化、规范化。适用范围：适用于本室使用的普通离心机。负责人：肖静操作人：胡可存蒋艺勤4、标准程序：基因扩增检测标准程序：扩增反应前须先在样本输入模板上按照性对照、阳性对照、室内质控品各一份，一组阳性标准品08106105104。打开电脑电源开关，进入WindowsNT接着打开PCR5双击电脑桌面的ABIPrism5700SDSSoftware设置界面。单击“文件”菜单中的（“新建”按扭OK。应用检测管理程序，并将其添加到样品板文档中。检测反应管，：应按以下步骤进行：全部曲线——阴性对照——阳性对照——阳性室内质控品——阳性标准品——逐个分析（标出阳性标本和可疑标本）——发报告。整体曲线的观察：将所有曲线选中进行整体观察1）观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染意大量曲线在同一Ct值出现上涨的情况。2）线。阴性对照的分析阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标本。作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。阳性对照的分析阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阳性标本。作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。室内质控品的分析质控品。作用：用以监控日常实验的精密度。阳性标准品的分析1）阳模稀释可能存在问题，提示实验中存在较大人为误差。2）观察各曲线的Ct值是否在平日的正常位置。1：若出现低拷贝标准品做不出，而各曲线Ct断是否为试剂扩增效率下降（如试剂过期或保存条件不合格。2：出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝曲线Ct提示可能存在低拷贝阳性标准品的降解情况。104104出现Ct1（25Ct）2～8（是否有三期特征DeltaRn、CtNumberRn这三种扩增图形式下分析数据。低而显示的假阴性。发放报告：及时登记检测结果记录，发放临床报告。实验结果无效的判断标准：出现下述四种情况中的任何一种或多种，当次实验结果不可发，查找原因，重做实验。阴性对照出现扩增。阳性对照无扩增。大批甚至所有的标本都扩增了。见室内质控标准操作程序。实验结果有效的判断标准：达到下列要求后，当次实验有效，可以发放结果。阴性对照没有扩增，阳性对照扩增。数的数值均在范围内。室内质控血清检测结果处于在控状态，具体标准详见5.本文涉及以下表格室间质评记录表PCR室内质控图临床标本的保存操作程序目的：临床标本正确保存，以便必要时复查。适用范围：分子诊断室的所有临床检测标本。负责人： 操作人：程序：处理前的标本保存aHB4（24h内（血浆-20℃下。HCV1200μl，20uRnasin-20尽可能快的提取RNA。TBTB4℃下-20℃下。CT：标本短期（24h）420℃下。报告发出后的标本保存：4-20告发出后第二天丢弃。/-20℃11/负责管理。特殊标本的处理：对暂不检测的项目和规定时间外收到的零散样本，要随时登记和交班，以免漏检，遗失和延误检验。对特殊样本或特殊病人的样本，实行“首接”负责制，所谓特殊样本是指难于采集的样本，以及特殊病人的样本一律实行“首接”负责制，无论那位工作人员，一旦收到样本后，均须负其责任，不得以任何借口推托，及时和正确保管和转送样本到有关实验室或有关人员，同时作交班记录和双签名。对于做长期病情动态考察的病人标本一律置于-20℃下长期保存，使用时再按需取出检测。本文涉及以下图表：PCR拒收标本记录本标本超低温保存记录表临床标本的采集、运送、接收程序目的：规范临床待检标本的正确采集、送检和处理。适用范围：分子诊断室的所有临床检测标本。负责人： 操作人：程序：标本的采集知识培训的医护人员采集并送至实验室。标本采集要求a）血液标本：用2ml2（HCV采用EDTA（检验单与标本一道）后用一次性吸管吸取血清或血浆加入经消毒的的离心管中，编号。b）（对于45℃100g/LNaCl标本在室温下保存不能超过24小时。c）生殖道拭子：尿道或阴道分泌物由医生用专用取样拭子（灭菌，一次性采集样本，及时送检。采集生殖道拭子标本，要求男性病人在采样前22～3cm，转动一周以获得上皮细胞。d）尿液：由病人自留尿液于无菌封闭的杯中送检。e）注意：所有上述用于临床标本采集的容器如试管或离心管，均应使用前高压灭菌和密封。标本的运送标本采集后，密闭、标（贴）姓名，应尽可能快的送至检测实验室，如运送时间需2小时以上，必须用冰盒送至实验室。标本中如加入了适当的稳定剂，如用于RNA测定加入4mol/L异硫氰酸胍盐（GITC）的血清（浆）DNAEDTA运送或邮寄。接收不符合要求的样本一律退回，并有书面记录。分类验证一般内容联号，住院号，病区床号，项目等。对不符合要求者应作记录，并及时通知采样科室，正确及时地补采样，以免延误病人的检测结果报告。对书写不清楚的申请单，当事者要及时与病房联系(可电话)，明确受检者按检测项目验证标本a）HBV凝剂，用EDTA-K存。

，不可使用肝素。标本为全血时应及时分离出血浆保2b）HCV：同上，但标本为血清时，要在1小时内分离出血清用于检测。c）TB：晨起第一口深部痰(不能为唾液)、胸腹水、脑脊液、脓液或穿刺液。d）CT：尿道或阴道分泌物。拒收标本，登记并告知相关科室。类别1拒收原因未正确使用抗凝剂的标本造成凝血的标本2严重溶血3严重脂血4采血量不足（血清＜200uL、全血＜1mL）5检测项目TB的标本是唾液而不是晨痰6标本容器破裂，标本被污染7标本的病人姓名、年龄、性别等与检验单不相符8RNA检测，采样时间超过2小时9其他可能严重影响检验结果的原因4．5．2．4拒收程序a）对拒收的不合格标本应在拒收标本记录本上登记。b）c）必要时电话告之相关科室医生或护士。PCRPCR扩增拒收标本记录表PCR生物安全防护措施目的：预防工作人员在实验过程中被感染或污染。适用范围：适用于本室所有工作人员。负责人： 操作人：细则：立起强烈的生物防护意识。22%戊二醛溶液用量为废液缸内总液量的五分之一左右。配置消毒液时，正确量取足量的消毒剂（保证浓度，水的用量也要正确，缸体密封性良好。75%的酒精擦拭。30～60运输过程中，标本容器应完好无泄漏。皮肤沾上血液或体液标本以及试剂，应立即冲洗干净。有下列情况之一者，需另外消毒：手接触有传染性的微生物，水龙头、水池肥皂可能被消毒液。在实验过程中，病人标本（血液、体液）用清水洗。时，应立即脱下手套，尽量挤压伤处，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要时进行预防补救措施。在实验过程中病人标本（血液、体液）2%上，滤纸或纱布盖上半小时，然后用酒精擦洗，并用紫外灯消毒。实验完毕离开时，应脱下所有该实验区个人防护装备。实验完毕后应对实验室进行紫外消毒。行预防性治疗，并进行医学观察，严重者应报告院技术负责人。本文涉及以下表格PCR实验室化学试剂配制程序目的：保证实验中用到的各种溶液符合实验要求。适用范围：75剂（2%戊二醛溶液等。负责人： 操作人：程序：化学试剂的配制：250ml2000ml配制步骤：4%NaOH4NaOH250ml100mlNaOHc）摇荡三角烧瓶使NaOHd）然后缓缓倾倒入100ml塑料试剂瓶中密封保存备用。500mg/L作用。消毒剂为粉状20/袋，如配制一升的消毒剂溶液，则取5001000ml如需加大消毒力度，则有效氯浓度加大。7575%酒精由医院药剂科提供。RNA75%酒精的配制，试剂盒提供DEPC配制220ml1000mlb）980ml1000ml2000ml用。14PCR实验室记录管理制度1、目的：确保检验资料的记录、保存状态在控2、适用范围：实验过程中产生的数据、文本资料的记录3．负责人： 操作人：4、工作程序：书面记录文件的管理：本实验室的书面记录包括：001ABCDABCD/001002ABCD/002003PCRABCD/003004PCRABCD/004005拒收标本记录本 编号ABCD/005006ABCD/006007PCR试剂购买记录编号ABCD/007008试剂验收记录表 编号ABCD/008009PCRABCD/009010ABCD/010011室间质评记录表 编号ABCD/011012PCR室内质控记录编号ABCD/012013室内质控编号ABCD/013014PCRABCD/014冰箱温度质控图仪器使用记录表

编号编号017ABCD/017018ABCD/018019应急处理登记表 编号ABCD/019020PCRABCD/020021垃圾处理记录编号ABCD/021022ABCD/022PCR检验报告编号ABCD/023耗材进购记录编号ABCD/024025ABCD/025验记录表严格专用，不同实验区不得混用。20035200305SYJG、200305SJXH200305SLZK，分别放于档案柜的不同25定期对保存的记录进行分析总结，形成总结报告，以便改进工作。有实验室职责、经手人、借阅人的签名方可。电脑上记录文件的管理记录文件必须保存在非系统分区中，如D找。里，如“200312Jan01”、“Feb02”，每天的实验结果就保存在当月文件夹里。实验文件保存时以当天日期命名，若某天进行了多次实验，命名时在后面abc20035820030508ab。）PCPCR应急处理程序验结果的准确性、及时，应正确采取应急措施，最大程度上避免或减轻不利影响。适用于满足核酸扩增荧光检测实验室检测需要并可能对检验结果负责人：细则： 关设备的性能、要求、维护和保养、常见故障的排除、尤其要严格按照操作规程操作。 和试剂盒的异常情况。责在第一时间检查核实应急措施的有效性。仪器设备故障误、误操作、偶发现象或确属不能立即排除的故障。用红牌故障标志标示故障仪器，以防被错误使用。有满足要求的替用设备的，启用替用设备（准用仪器仪器设备时，及时联系借用并核实该设备的使用状态。替用、借用或备用设备的使用在满足质量要求的同时，必须同时满足实验室管理措施（特别是防污染）的要求。通知供应方。供应方技术支持人员将在规定的时间内随身携带备用设备到达现场。新启用。取下红色故障标示（暂停使用，换上蓝色正常标示（正常使用。室主任须检查并随时跟踪所采取措施的有效性。联系附近的其他已得到卫生部临检中心认证的临床基因扩增检验实验室检验，以满足病人和临床或科研需求。 使用前需先作质量检测，合格后方可使用。 仪器设备故障或试剂质量问题不能得到解决，预期将会影响到检测报告的影响到检测报告发出的情况，应在应急处理记录表作记录。应急处理记录表试剂的质检标准操作程序目的：保证每批用于临床实验的试剂的质量良好，符合要求。各种用于临床实验的核酸扩增荧光检测试剂HBHCTBCT。负责人： 操作人：程序：收到试剂后，目测试剂是否处在冻存状态。核对试剂品种和数量并检查包装：外包装（；内包装（等。及时将试剂转入－20℃冰箱保存。将上述检测核对情况在记录本上登记。 进行效验实验。效验实验：品梯度104、105106108。出现如下情况中任何一种的，判断为试剂不合格，不能用于临床检测：CT重复新旧提取液阳性对照实验，确定提取液失效问题。更换提取液后该批试剂方可使用。在污染可能。单独用提取液点样上机，出现扩增，需更换提取液后方可使用该批试剂。阳性对照检出，阳性标准品未检出或扩增曲线明显系统性CT5曲线之斜率（－～－、截距（2634、相关性（﹤－）均在使用范围内，表明该批试剂良好，可以投入临床使用。将实验结果归入记录。本文涉及以下图表PCR试剂验收记录表PCR消耗品进购、质检、贮存程序1、目的：保证实验消耗品的质量、合理配用及存放2、范围：离心管、离心管、带滤芯的吸头3．负责人： 操作人：4、程序：实验人员按需提出所购耗材的品名、规格、数量，交科主任审核，报相关部门订货及购买。消耗品进购后经质检合格方可入仓，填写消耗品进购、质检记录表。无菌处理前的消耗品贮存于试剂贮存、准备区，定期领取消毒并作用量记录，消毒过的消耗品送标本制备区备用。消耗品在使用过程中发现质量问题（如畸形、离心管密闭性不好等主任，科主任报相关部门，办理退、换货手续。5、质检、离心管目测:检查离心管有无畸形、破损、不能闭盖的情况。：5020为该批离心管不符合本实验室实验要求，作退货处理。50206检测带滤芯的吸头目测：检查吸头有无畸形、破损，是否带有滤芯。实验检测：50适量液体，检查有无吸孔堵塞、漏气现象发生，在排除移液器因素后，如有异常发现，即认为该批吸头不符合本实验室实验要求，作退货处理。10经上述检测未发现不合格情况后，即启用该批耗材。6.本文涉及以下图表耗材进购记录表PCR普通耗材验收记录表PCR室内质量控制标准操作程序目的：随时了解并控制实验室检测的精密度变化。适用范围：核酸扩增荧光定量检测实验室。负责人： 操作人：程序：血清质量控制品制备及操作质控品制备：DNA装于的离心管中，每支11μ，编号后（如Qb0201--20℃保存。操作：每次检测过程中将此分装的室内质控品与样本同时检测，记录此标本的检测结果；计算前10次检测结果的平均值作为本批质控品的靶值。4．１．２要求执行。室内质控图的使用方法描点图中XX±2sX±3s月的实际起止日期即可。每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。画出图上的对应点，用直线将该点与前一天的点连接。月底计算当月全部质控血清检测结果的Xs和图形分析如果在X±3s线以外，则为失控，应立即报告有关负责人，迅速查找原因。必要时复测标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。如果在X±2s6通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源a）c）连续多点分布在靶值一侧：目前，一般认为质控血清的检测结果连续6天以上66d）（周期性等）通过图形的资料对比进行误差分析，消除误差来源每个月的月底将该月的全部质控血清检测结果的X和sX和sX发生了变化，说明准确度发生了变化提示有非随机误差存在。如果当月sCTX和sX逐月上升，应考虑保存不当造成的试剂效价降低或质控血清本身出现降解。如果各月份X基本一致而s逐月加大，则主要提示常规工作的精密度下降，应重点从操作、管理上找原因。CV回顾及趋势分析。本文涉及以下图表：PCR室内质控图PCR室间质量控制操作程序室间质评是实验室质量控制体系中重要部分，是保证患者检验结适用范围：卫生部或省临检中心下发的PCR负责人： 操作人：程序：质控标本的接收和验收：收到质控血清后由相关人员登记、签字，根据质控标本的有关说明对血清的数量、批号、包装进行验收并将质控标本按要求置-20℃保存于标本制备区。质控标本的检测按常规临床标本对待，若需要，检测前先根据说明对质控物进行复溶。室间质评样本必须按实验室常规工作进行，由进行常规工作的人员测试，工作人员必须使用实验室的常规检测方法和试剂，不得特殊对待。检测结果须在截止日期前上报。实验室检测EQA（1。4.5 EQA必须在截止日期前，通过E-mail室间质评的检测结果和反馈结果均记录于室间质评记录表，根据反馈结果分析室间质评的状态，如有出控应查找原因，并采取相应的措施。严禁与其它实验室交流室间质评的检测结果。室间质评记录表温度校准标准操作程序1、目的：保证实验时温度的准确2、范围：基因扩增实验室所有温控的仪器3．负责人： 操作人：4、程序温度计校准程序：由设备科人员送质检局对温度计进行校准。每年进行1水浴箱温度校准程序：将水浴箱调至所设置的温度，等水温稳定以后，进行测量。取出一只已经技术监督局校准后的温度计进行测量。计下读数，重复在不同温度下测量。经测量的温度和水浴箱显示温度进行比较，计算出误差。将水浴箱调至校准后的温度。每次试验前都必须进行此项工作。（4℃冰箱和—20℃冰箱）每次实验前都需对冰箱温度进行记录，绘置冰箱温度的质控图。读数。扩增仪温度的校准将扩增仪打开并设至一温度。持术监督局校准过和温度计插入反应管中进行测量温度并记录。在不同温度点进行重复测量，取均值，并与扩增仪的显示温度进行比较。由于仪器较精密，温度相差太大则需请厂家前来校准并调试。经调试后贴上绿色标签，标明时间仪器的性能状态。5.本文涉及以下图表PCR冰箱温度质控图PE5700型核酸扩增荧光仪操作维护程序目的：使PE5700结果分析的标准化、规范化。适用范围：PE5700负责人： 操作人：性能参数:见说明书。操作程序：PE5700SDS进行设置。每次实验除了待检标本，还要包括一个阴性对照、一个阳性对照、一个阳性室内质控品、一组阳性标准品4个梯度10410、106、10。依次打开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入WindowsNT接着打开光源检测器和PCR5点击PE5700SDS在NewplateApplication5700/SYBRGreen，然后单击打开一空白设置面板。在Setup在TypeUNKN－未知样品，NTC－阴性对照，Notinuse－未使用再在NamePPR1SYBRQ准品的标准量。点击Instrument选定任务栏FileSaveFileName输入一组数字和（或）字母组成的文件名，选Save。检查设置正确与否，运行程序在设置完程序文件的InstrumentRUN反应结束后，选任务栏FileSave关闭PE5700结果分析标准程序：5700观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染线在同一Ct观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。阴性对照的分析阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标本。作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。阳性对照的分析阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阳性标本。作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。阳性室内质控品的分析阳性室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知或未知浓度的阳性室内质控血清。作用：用以监控日常实验的精密度。阳性标准品的分析各梯度曲线的分布是否均匀，若各梯度曲线均未分开，则表明阳性标准品稀释可能存在问题，提示实验中存在较大人为误差。b)观察各曲线的Ct值是否在平日的正常位置：1：若出现低拷贝标准品做不出，而各曲线Ct试剂扩增效率下降（如试剂过期或保存条件不合格。2：出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝曲线Ct存在低拷贝阳性标准品的降解情况。c)102标准品，用作以下三方面监控：102二是否存在稀释后的梯度放置过久，低拷贝标准品降解的情况；CtAB灵敏度下降。单个曲线的判断逐个分析每条曲线，判断曲线的阴阳性或属可疑曲线（可疑标本是指曲线在27个Ct）2～8Rn（是否有三期特征0～0时观察Rn得出定量结果调节基线和阈值以得到一较好的标准曲线。电脑据此曲线给出阳性结果值。此时应排除某些阴性标本因荧光曲线假性上扬而得出的假阳性结果和某些弱阳性标本因终末荧光值过低而显示的假阴性。发放报告及时登记检测结果记录，发放临床报告。.维护和校准程序：微软WindowsNT29NortonUtilities类似软件。具体步骤：放入NortonUtilities从MyComputer打开NortonUtilities软件光盘。c）启动清理碎片/优化程序。d）运行完成后，检查以确信无严重错误记录，退出NortonUtilitiese）取出NortonUtilitiesPCR样品槽的清洁样品槽每月进行一次清洁，如出现样品槽污染情况则随时清洁。操作方法：a）25℃HOLD10b）从样品槽移去样品架。c）在样品槽中加入少量浓度≥95%乙醇，用尼龙棉签或塑料杆擦洗反应孔。d）用干棉签吸干乙醇。e）PE5700PCR50℃10热盖的清洁热盖每月进行一次清洁，如有需要随时进行。a）25℃HOLD10PE5700PE5700滑轨距离的大约1/3处。PE5700PE5700测器，小心侧放于仪器顶盖上。不要从仪器取走热盖。将PE5700PE5700调准ROI调准ROI得由一般实验人员进行该项操作。PCR将PE5700c）从StartPE5700SDSd）512msROIe）逐渐增加积分时间，直到可以看到至少四个块（约4096m。f）调整最左侧位置调整点。g）1024ms，调整上方与底部的位置调整点。h）减少积分时间以便最右侧块可见但未饱和（约512m置调整点。如有需要用右上角拖动点调整图像的倾斜度（心旋转。i）调节后的参照条宽度必须在ROI参照块间有小空隙。校正ROIROIa）在PCRb）将PE5700c）从StartPE5700SDSd）点选ShowROI复选框。每个样品孔周围出现一蓝色椭圆圈。e）点选ShowSaturation复选框。1024ms；打开卤素灯和光闸。LIVE饱和图像（无红色图像。EditCalibrateROIsROI968ROI96ROI89检查PCR检查PCRa）开启PE5700b）从StartPE5700SDSc）从样品槽中移去反应板。d）将PE5700e）256ms；打开卤素灯和光闸。点击LIVE96h）按照样品槽的清洁程序清洗样品槽。更换卤素灯仪器使用大约2000小时后应更换卤素灯,但具体要视卤素灯实际情况而定。a）关闭PE570015b）移去PE5700光源检测器顶盖。c）移去卤素灯顶盖。动灯泡时要轻轻抬起灯以避开装配螺丝钉。重新装上灯顶盖和PE5700开启PE5700PE5700SDSg）通过软件控制卤素灯开关，确认灯随开关开闭。h）开启光闸，确认光闸可打开。i）设定积分时间为1024ms，点击LIVE。保证可以采集一幅数据图像。j）若新卤素灯不工作，PE5700电源保险管可能有问题。校准PE5700进行。实验室应与仪器厂家达成协议，定期（一般每年一次）校准仪器。平时通过对室内质控图的分析，发现实验结果出现系统误差后，又经过分析排除了试剂和人员误差，应怀疑是否仪器出现了检测偏差从而需要校准。实验室人员根据上述“光路系统的维护”部分的内容调节光路，可初步确定仪器是否光路原因引起的检测偏差，通过光路调节解决问题。若问题不出在光路系统，则应联系仪器厂家派技术人员来进行校准。注意事项：好的接地线。2360％c）仪器应每月底清洁维护。d）仪器使用时应严格遵守上述使用步骤。期间核查PE-5700PE-5700因扩增仪执行卫生部临床检验中心的指定校准。ICSH值。7.相关记录仪器使用登记表仪器设备维护和校准记录表仪器设备检定周期表仪器设备维修申请表仪器报废（停用）单仪器设备使用授权表仪器设备档案卡仪器设备领（借）用登记表仪器设备总表干式恒温器操作维护规程目的：正确使用、维护和校准干式恒温器。适用范围：干式恒温器。负责人： 操作人：技术参数:5．程序：干式恒温器应置于坚固的水平台上，电源电压须匹配。打开电源开关，设定温度时间至所需温度。设定恒温时间至所需时间。度时，指示灯亮，开始加热，如此反复，温度可保持稳定。每年校正温度一次。/–1℃以内。温度误差校准存在偏差，可按以下方法修正温度误差；40℃两点温度同步线性校准法。经两点温度线性校准后，系统保证其它温度点的温度准确度≤±℃。校准温度时环境温度和模块的温度必须低于30℃。具体操作方法如下：35℃35℃，35℃后，按以下方法操作。（要求温度计精度为℃，温度计感温包必须完全浸入于锥形孔内部用隔热材料于环境隔离。见下图a.同时按下▲和键，进入温度校准界面，此时，时间显示窗显示为ADL窗显示为即时温度，并自动开始升温至℃40℃20注意！为保证温度校准精度，建议用户于恒温20分钟后读取实测温度！若温度计读取的数值为39.6℃,则按“TEMP”和▲或键于温度显示窗内输入，按“R/S”键确认输入值。10010020注意！为保证温度校准精度，建议用户于恒温20分钟后读取实测温度！若温度计读取的数值为101.5℃，则按“TEMP”和▲或键于温度显示窗内输入，按“R/S”键确认输入值。等待界面。的温度值无效！干式恒温器内外应保持清洁，外壳忌用腐蚀性溶液擦拭。仪器长期不用时，需防潮防尘保存。仪器维护要求。严格按照仪器的开关机程序关机。期间核查干式恒温器的定标不需要特别的周期间隔。每年必须校正温度一次。相关记录：仪器设备维护和校准记录表仪器设备检定周期表仪器设备维修申请表仪器报废（停用）单仪器设备使用授权表仪器设备档案卡仪器设备领（借）用登记表仪器设备总表离心机操作维护程序目的：保证离心机的正常使用。适用范围：适用于本室使用的普通离心机。负责人： 操作人：性能参数:5．程序：离心时造成仪器振荡。求。离心完毕后，将转速调节旋钮调回零位，关闭电源开关。室进行清洁处理。对离心室清洁，应先打开离心机盖，拨掉电源线，用专用设备将离心机转子旋下，再用中性去污剂（70%的异丙醇/水混合物或乙醇去污染）清洁离心室；离心室内的橡胶密封圈经去污剂处理后，用水冲洗，再用甘油润滑。此应对转子每月进行清洁维护。每月用中性的清洁剂清洁转子一次，并在仪器维护记录本上作好记录，以延长转子的寿命。仪器维护更换.n:n=nmax*6mm要求。严格按照仪器的开关机程序关机。期间核查本仪器不需要特别的周期间隔。校准物均为与ICSH值。相关记录仪器设备维护和校准记录表仪器设备检定周期表仪器设备维修申请表仪器报废（停用）单仪器设备使用授权表仪器设备档案卡仪器设备领（借）用登记表仪器设备总表冰箱操作维护规程目的：对冰箱进行适当的维护，以确保冰箱的正常使用。适用范围：本实验室使用的各种品牌、型号的冰箱。负责人： 操作人：性能参数:5．程序：冷冻室温度开关置于并要求有良好的接地线。冰箱内禁止存放与本实验室无关的物品。放入冰箱内的所有试剂、样品、质控品等必须密封保存。洁时切断电源，用软布蘸水擦拭冰箱内外，必要时可用中性洗涤剂。每日观察冰箱内温度并记录于冰箱的质控图上。若温度超出规定范围，调节温控使其回到正常范围，并进行记录。用。仪器维护注意事项”要求废液瓶是否漏气，防止低真空出现。当出现堵孔时，按自动冲洗键冲洗管道。严格按照仪器的关机程序关机。期间核查(1冰箱不需要特别的周期间隔。(2)ICSH值。.相关记录仪器设备维护和校准记录表仪器设备检定周期表仪器设备维修申请表仪器报废（停用）单仪器设备使用授权表仪器设备档案卡仪器设备领（借）用登记表仪器设备总表生物安全柜操作维护规程目的：正确使用生物安全柜。适用范围：本SOP负责人： 操作人：性能参数:5．程序：5．215～30机、照明均由指示灯指示其工作状态。工作台面上禁止存放不必要的物品，以保持工作区的洁净气流不受干扰。在预过滤进风口部位放置物品，以免挡住进风口造成进风量减少，降低净化能力。使用结束后，用消毒液清理工作台面后打开紫外灯，15～30分钟后关闭紫外灯，关闭生物安全柜电源。每次使用生物安全柜后，均需对其进行清洁。个月。定期（1）计测工作区风速，如发现不符合技术参数要求，则可调大风机供电电压。当风机组电压调到最大时，工作区风速仍达不到0.3m/s，则必须更换高效空气过滤器（由厂家或院仪器维修人员进行长期不使用的生物安全柜拨下电源插头。仪器维护注意事项”要求废液瓶满要及时倒掉废液，切勿强行扯动红黄两根管来打开瓶盖，检查废液瓶是否漏气，防止低真空出现。当出现堵孔时，按自动冲洗键冲洗管道。严格按照仪器的关机程序关机。期间核查PE-5700PE-5700因扩增仪执行卫生部临床检验中心的指定校准。ICSH值。相关记录仪器设备维护和校准记录表仪器设备检定周期表仪器设备维修申请表仪器报废（停用）单仪器设备使用授权表仪器设备档案卡仪器设备领（借）用登记表仪器设备总表移液器操作维护规程目的：确保移液的精确性，正确使用移液器。适用范围：本实验室使用的可调式移液器。负责人： 操作人：程序：移液器的使用转动旋钮设定移液量，设定的移液量不可超出该移液器规定的范围。装上配套的Tip。前进移液法a）将按钮压至第一停点位置；b）将移液管管嘴浸入液面下2~3mm深处，然后慢慢松开按钮吸入液体。待移入管嘴吸满液体后，将管嘴撤出液面，擦掉管嘴外侧的所有液滴。1钮向下压至第二停点位置。待管嘴液体放干净后，将管嘴贴在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中，撤出管嘴。松开按钮使之回到起点位置。需要时，可更换管嘴继续移液操作。/a）b）2~3mm移入管嘴吸满液体后，将管嘴撤出液面，擦掉管嘴外侧的所有液滴。c）轻轻压下操作按钮至第一停点位置，放出液体。d）液体。将操作按钮向下压至第二停点位置。2~3mm管嘴吸满液体后，将管嘴贴在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中。按钮停在第一停点位置，不包括在移液量之内的少量液体仍留在管嘴内，管嘴外的液滴则需包括在移液量之内。d）e）重复步序c）和d）继续移液操作，就可重复转移相同体积液体。移液器的维护7517515移液器的校准为确保移液器加样的精确性和准确性，正确使用移液器，需定期（一年）对移液器进行校准校准环境和用具要求室温：20～25℃，测定中波动范围不大于±℃。保证天平内的湿度（相对湿度6090%，天平内应放置一装有10mL蒸馏水的小烧杯。小烧杯：5～10mL体积。20～25℃选定校准体积：a）拟校准体积；b）移液器标定体积的中间体积。c）最小可调体积（不小于拟定体积的10。如为固定体校准步骤a）b）调节好天平；c）来回吸吹蒸馏水3次，以使吸头湿润，用纱布拭干吸头；d）2～3mm，缓慢（1～3）馏水e）f）30℃1～3记录称量值；h）擦干吸头外面；i）10取101水Z按校准结果调节移液器。比较校准法用电子天平称量结果与已校准移液器称量结果进行比较，完成校准。备注：连续可调移液器校准由本市标准计量局统一校准。（1蒸馏水ZhPa(mbar)）温温度80085390796010131067（℃）202122222323．52425相关记录仪器使用登记表仪器设备维护和校准记录表仪器设备检定周期表仪器设备维修申请表仪器报废（停用）单仪器设备使用授权表仪器设备档案卡仪器设备领（借）用登记表仪器设备总表沙眼衣原体核酸扩增荧光检测目的：保证CTDNA适用范围：CTDNATaqMan负责人： 操作人：原理：本试剂盒用一对沙眼衣原体特异引物和一条沙眼衣原体特异性荧光PCR反应液，耐热DNA聚合酶Taq酶，四种核苷酸单体dNTP）分，再用PCRDNA。性能参数/ml。标本要求：标本类型：分泌物。标本采集：见标本采集手册。标本储存和运输872保存期6个月，应避免反复冻融。室温运输。标本拒收状态：细菌污染标本不能作测定。容器和添加剂类型：无菌离心管和无菌试管。ABIGeneAmp5700（4-2℃、生物安全柜、紫外灯管（未贴标签管（×108/m50μl管1250μl/管）1校准程序（计量学溯源性：送XXX市计量检测所校准。程序步骤:：2~4cm，略捻拭子取出分泌（应略带黏膜密闭送检。女性：阴道—用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用无菌棉拭子插入宫颈内，停5秒钟后旋动棉拭采取宫颈分泌物，将棉拭子置入无菌玻璃管，用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。2cm，略捻拭子取出分泌物（应略带黏膜管塞紧后，密闭送检。-2060℃冰壶。标本及对照标准品的处理标本试管中加入1ml无菌生理盐水，充分震荡摇匀，吸取液体转至离心管中（如分泌物较多，只取）12000rpm离心5分钟.沉淀加无菌生理盐水1ml打匀,12000rpm550ulDNA(提取液内含不溶于水的物质,取样时需用加样器充分混匀后吸取。如出现因吸头10（146-812，000rpm22ulPCR50ulDNA10操作取单管单人份PCR反应管若干管，直接加入处理后样品（或阴阳性质控标准品）2ul，6000rpm离心数秒。将各反应管放入PCR仪，按下列条件扩增：ABIGeneAmp570093℃293℃45秒55℃601093℃3055℃4530部完成后保存文件，最后运行程序。结果分析条件的设定ABIGeneAmp5700图像调节baselinestart(2~4),stop(7~9)以及ThresholdCt30Ct22~24,CtCt质量控制程序：阴性质控品：全部阴性阳性定量标准品：全部阳性︱r︱≧(correlation~-1);108104/ml。干扰：标本污染。生物参考区间：0/ml。患者检验结果的可报告区间：Ct<40CTDNA（贝数/ml）=M；Ct=40CTDNA<25/ml。/危急值（当适用时：实验室解释：参考依据。《沙眼衣原体核酸扩增荧光检测试剂盒说明书》见试剂盒乙肝病毒核酸扩增荧光检测目的：保证HBVDNA适用范围：HBVDNATaqMan负责人： 操作人：原理：本试剂盒用一对乙型肝炎病毒特异引物和一条乙型肝炎病毒特异性PCR反应液，耐热DNA聚合酶Taq酶，四种核苷酸单体等成分，再用PCRcDNA。性能参数：检出低值＜1×103/ml。标本要求：标本类型：血清。标本采集：见标本采集手册。标本储存和运输872保存期6个月，应避免反复冻融。室温运输。标本拒收状态：细菌污染、严重溶血或脂血标本不能作测定。容器和添加剂类型：无菌离心管和无菌真空管ABIGeneAmp5700（4-2℃、生物安全柜、紫外灯试剂：DNA（500μl/管）2HBV-PCR（未贴标签管管；阳性定量质控标准品（1×108基因拷贝/ml50l/管）1品（250μl/管）1校准程序（计量学溯源性：送深圳市计量检测所校准。程序步骤:：标本处理：40μlDNA（物质，取样时需用加样器充分混匀后吸取。如出现因吸头嘴部太细不能吸取或取10（误差不超过1分钟为保证病毒颗粒充分裂解可转至4℃静置8~12小时10000rpm52μlPCR标准品稀释和处理：将阳性定量质控标准品/ml）6000rpm108445μl107~1041085μl1075μl106104-20℃保存；分别吸取稀释好的阳性标准品梯度和阴40μl，加等量DNAHBV-PCR2μl，6000rpm1PCR序设置阴性质控品，阳性定量质控标准品梯度以及未知标本，并设置样品名称，GeneAmp570093℃→293℃4555℃601093℃3055℃4530结果分析条件的设定：ABIGeneAmp5700文件。根据分析后图象调节baseline的start值2~，stop值7~）以及ThresholdStdcurve（correlation~-1correlation|r|，最后到Reporter分析计算出的未知标本数值Qt。质量控制程序：阴性质控品：全部阴性阳性定量标准品：全部阳性︱r︱≧(correlation~-1);108104/ml。干扰（如乳糜血、溶血、胆红素血）血基本不影响本实验的测定。生物参考区间：0/ml。<40，实验样本的HBVDNA（贝数/ml）=M；Ct=40HBVDNA<1×103/ml。/危急值（当适用时：实验室解释：考依据。《乙型肝炎病毒核酸扩增荧光检测试剂盒说明书》见试剂盒丙肝病毒核酸扩增荧光检测目的：保证HCVDNA适用范围：HCVDNATaqMan负责人： 操作人：原理：本试剂盒用一对丙型肝炎病毒特异引物和一条丙型肝炎病毒特异性PCR反应液，耐热DNA聚合酶Taq酶四种核苷酸单体（dNTPs）RNAcDNAPCRcDNA。性能参数：检出低值＜1×103/ml。标本要求：标本类型：血清。标本采集：见标本采集手册。标本储存和运输272保存期6个月，应避免反复冻融，室温运输。标本拒收状态：细菌污染、严重溶血或脂血标本不能作测定。容器和添加剂类型：无菌离心管和无菌真空管。ABIGeneAmp5700（4-2℃、生物安全柜、紫外灯。试剂：DNA（500μl/管）2HCV-PCR（未贴标签管管；阳性定量质控标准品（1×108基因拷贝/ml50l/管）1品（250μl/管）1校准程序（计量学溯源性：标本采集和运送用无菌注射器抽取受检者静脉血1ml，注入无菌离心管,于室温静置2小时,418000rpm5200ul48小时以内-2060℃冰壶。标本及对照标准品的处理向一新的经高压灭菌处理过的离心管中加入10ul充分混匀的RNA提取液(RNAA50ul200ul的RNA提取液B。室温放置56000rpm175%的预冷乙醇）洗沉淀（75400ul，离心175400ul重复同上处理65℃干燥沉淀10注：75%DEPC逆转录

O。2向沉淀管加入18ulHCV反应液I以及逆转录酶系2ul，震荡均匀，瞬间（3秒）37℃45953）逆转录产物做PCR扩增及DA-620仪器荧光检测操作取单管单人份PCR（品）2ul，6000rpmPCRABIGeneAmp570093℃293℃451093℃3055℃4530置全部完成后保存文件，最后运行程序。结果分析条件的设定ABIGeneAmp5700的条件设置：反应结束后保存检测数据文件。根据分析后图像调节baselinestart(2~4),stop(7~9)以及ThresholdCt30Ct22~24,CtCt质量控制程序：干扰（如乳糜血、溶血、胆红素血）基本不影响本实验的测定。生物参考区间：0/ml。<40，实验样本的HCVDNA（数/ml）=M；Ct=40，样品HCVDNA<1×103/ml。/危急值（当适用时：实验室解释：依据。《丙型肝炎病毒核酸扩增荧光检测试剂盒说明书》见试剂盒结核杆菌核酸扩增荧光检测目的：保证TBDNA适用范围：TBDNATaqMan负责人： 操作人：本试剂盒用一对结核杆菌特异引物和一条结核杆菌特异性荧光探针，PCR反应液，耐热DNA聚合酶Taq酶，四种核苷酸单体dNTP）用PCRDNA。性能参数：检出低值＜1×103/ml。标本要求：标本类型：血清。标本采集：见标本采集手册。标本储存和运输872保存期6个月，应避免反复冻融。室温运输。标本拒收状态：细菌污染、严重溶血或脂血标本不能作测定。容器和添加剂类型：无菌离心管和无菌真空管。ABIGeneAmp5700（4-2℃、生物安全柜、紫外灯管（未贴标签管（×108/m50μl管1250μl/管）1校准程序（计量学溯源性：送深圳市计量检测所校准。程序步骤:：标本处理：标本采集、保存和运送5ml抗凝-200标本及质控标准品的处理44%NaOH1015000rpm51ml15000rpm5（知液标本直用淋巴细胞分离液分离沉淀）沉淀直接加50ulDNA提取液充分混)沸水浴10分钟1，转至℃静置6-8小时以10，000rpm52ulPCR40ulDNA10扩增及DA-620仪器荧光检测操作取单管人份PCR离心数秒。将各反应管放入PCR93℃2分钟预变性,然后按93℃45秒55℃120秒,反应10个循环后置33℃保温,迅速逐个将反应管放入荧光检测仪,读取并记录读当数A

。荧光激发波长为0487nm，检测波长为525nm。最后按93℃45秒55℃120秒，共做30个循环后置33℃使用PE9600，9700，240093℃30秒55℃6093℃45秒55℃120PCR反应后荧光检测，待各PCR管充分冷却至33℃后，迅速逐个将扩增后的525nm。ABIGeneAmp5700操作

。荧光激发波长为487nm，检测波长为1将各后应管放入PCR及未知标本，并设置样品名称、标记荧光基团类和循环条件：ABIGeneAmp5700293℃4555℃601093℃3055℃4530结果分析条件的设定ABIGeneAmp5700像调节baselinestart(2~4),stop(7~9)以及Threshold30,临界阳性质控标准品Ct22~24,强阳性质控标准品Ct18~20,最后记录仪器自动分析计算出的Ct质量控制程序：阴性质控品：全部阴性阳性定量标准品：全部阳性︱r︱≧(correlation~-1);108104/ml。干扰（如乳糜血、溶血、胆红素血）血基本不影响本实验的测定。生物参考区间：0/ml。患者检验结果的可报告区间：Ct<40TBDNA（贝数/ml）=M；Ct=40TBDNA<1×103/ml。/危急值（当适用时：实验室解释：考依据。《结核分支杆菌核酸扩增荧光检测试剂盒说明书》见试剂盒高速冷冻离心机使用、维护标准操作程序目的：保证高速冷冻离心机的正常使用。适用范围：适用于本室使用的高速冷冻离心机。负责人： 操作人：性能参数:5．程序：离心时造成仪器振荡。求。离心完毕后，将转速调节旋钮调回零位，关闭电源开关。室进行清洁处理。对离心室清洁，应先打开离心机盖，拨掉电源线，用专用设备将离心机转子旋下，再用中性去污剂（70%的异丙醇/水混合物或乙醇去污染）清洁离心室；离心室内的橡胶密封圈经去污剂处理后，用水冲洗，再用甘油润滑。此应对转子每月进行清洁维护。每月用中性的清洁剂清洁转子一次，并在仪器维护记录本上作好记录，以延长转子的寿命。仪器维护更换.n:n=nmax*6mm要求。严格按照仪器的开关机程序关机。期间核查本仪器不需要特别的周期间隔。校准物均为与ICSH值。相关记录仪器设备维护和校准记录表仪器设备检定周期表仪器设备维修申请表仪器报废（停用）单仪器设备使用授权表仪器设备档案卡仪器设备领（借）用登记表仪器设备总表ABCD人民医院分子诊断实验室平面图265cm 350cm 300cm传分子诊断室平面布局示意图水水水扩增仪传分子诊断室平面布局示意图水水水扩增仪扩传冰标增电脑打印检本超净台传工 工作 作台 台缓冲区缓冲区缓冲90cm内76cm走廊走廊

水：水池；：排风路线； ：墙柱； ：门；水实验室主要负责人简历表姓 名 性别 出生年月 年龄文化程度 学位 职位 职称所学专业 毕业院校 毕业时间从事学历(学位)从事学历(学位)职务职称所学专业毕业时间专业间序号姓名性别年龄123PCR扩增接收标本记录表编 接收号 本日1

时间 患者姓

性 年 科住院（门诊号别