非洲猪瘟荧光定量PCR试题附答案

非洲猪瘟荧光定量PCR试题1.非洲猪瘟属于()病毒。DNA(正确答案)RNA蛋白质答案解析：非洲猪瘟属于DNA病毒。2.荧光定量PCR试剂盒的长期保存温度为()。常温4-8℃-15--25℃(正确答案)-80℃答案解析：按照说明书进行保存。3.试剂盒反复冻融的次数不能超过()。4次6次(正确答案)8次10次答案解析：试剂盒从冷冻冰箱拿出开启后，如长期不用，需要放在冷冻，放置冷藏冰箱不能超过一周。反复冻融不能超过6次。4.吸取15ul的试剂时，应选用()规格的单道移液器。0.1-10ul(正确答案)20-200ul100-1000ul答案解析：取量程接近的移液器进行调节。5.质控合格，检测样本中出现可疑结果，应当()。立即向王总或实验室人员汇报，请求下一步指示。(正确答案)直接判定为阳性。直接判定为阴性。重新检测。答案解析：实验结果为可疑，应当第一时间反馈给王总，由王总判定或者安排下一步指示。6.配置PCR体系过程中，加试剂的正确顺序()。ASFV-反应液、DNA酶混合液、ASFV-内置参照(正确答案)ASFV-反应液、ASFV-内置参照、DNA酶混合液DNA酶混合液、ASFV-内置参照、ASFV-反应液ASFV-内置参照、ASFV-反应液、DNA酶混合液答案解析：ASFV-反应液38ul/样、DNA酶混合液2ul/样、ASFV-内置参照0.5ul/样。7.核酸裂解时，液体()存在气泡；PCR反应时，液体()存在气泡。可以；不可以(正确答案)可以；可以不可以；不可以不可以；可以答案解析：裂解时允许有少量的气泡，跑PCR时不可以存在气泡，避免光线出现折射导致读数偏差。8.做完检测后移液器应当调到()量程。最大(正确答案)最小中间都可以答案解析：移液器使用完毕后需要调节到最大量程，保证量程的准确性。9.每天实验结束后应对以下哪些部位进行消毒和清理()。移液器、桌面、离心机镊子、剪刀、地面管架、门把手、鼠标所有选项均可(正确答案)答案解析：每天实验结束后都需要对所接触的地方进行清理打扫，消毒。10.每天检测产生的废弃物和原始样本应当()处理。统一焚烧(正确答案)统一掩埋作为生活垃圾扔掉交给当地生物试剂回收公司答案解析：避免污染实验室以及周边环境，需要对废弃物等做焚烧处理。11.试剂盒使用前应室温放置5-10分钟，使其充分溶解后使用。对(正确答案)错答案解析：试剂盒内试剂需要回温解冻、混匀、离心后使用。12.同一批次的试剂可以混合使用，不同批次的试剂不能混合使用。对(正确答案)错答案解析：不同批次的试剂成分可能不一样，为了实验结果准确性，不能混批次使用。13.所有试剂和样本使用前都需要混匀后，再瞬时离心。对(正确答案)错答案解析：试剂盒试剂均需要混匀后离心使用。14.样本核酸和阴性对照用同一把移液器，阳性对照需要单独一把移液器。对(正确答案)错答案解析：防止交叉污染。15.样本前处理和PCR检测可以在一个房间内进行。对错(正确答案)答案解析：前处理与PCR室需要单独房间，防止交叉污染16.做完样本前处理可以直接做PCR检测，不需要更换手套和实验服。对错(正确答案)答案解析：不同房间需要有对应的衣服与拖鞋，进出更换。17.PCR产物可以直接丢进垃圾桶，不需要做其他处理。对错(正确答案)答案解析：需要用PE手套包裹打结后丢入垃圾桶。18.加样品和试剂时尽量加样管底或者液面以下。对(正确答案)错答案解析：放置液面以下为了更好的混匀。19.当天用的手套只要干净，明天检测时可以继续用。对错(正确答案)答案解析：每做一次实验更换一次手套20.手套不慎碰到阳性对照管口或管盖内侧，用酒精擦拭手套即可，无需更换手套。对错(正确答案)答案解析：凡触碰到阳性样本或阳性对照，一律更换手套。21.仪器运行时，突然断电或者电脑卡死超过15分钟，应当重新检测。对(正确答案)错答案解析：电脑卡死、断电在15分钟内，可以点击继续实验，超过15分钟，需要重新检测。22.新开的试剂盒若能在一周内使用完，可将其至于4-8℃保存。对(正确答案)错答案解析：试剂盒从冷冻冰箱拿出开启后，如长期不用，需要放在冷冻，放置冷藏冰箱不能超过一周。反复冻融不能超过6次。23.检测结果显示两个阴性对照BTG-Ag都有数值，显示质控失败。请分析可能导致这种情况的原因以及应当如何处理？()答案解析：原因分析：⑴误把阳性对照或者样本当阴性对照使用；

⑵阴性对照或者其他试剂、耗材被污染；

⑶整个房间中存在气溶胶污染。

处理措施：⑴将移液器、桌面、镊子、剪刀、离心机、管架等所有可重复使用的用品用卫可、酒精棉球消毒；

⑵所有一次性耗材和试剂均用新的；

⑶打开门窗通风2小时以上。24.请简述非洲猪瘟荧光定量PCR检测的全过程。()答案解析：⑴在样品处理室完成样品的离心、混样、编号，若当天检测则置于4℃，否则置于-20℃保存；

⑵更换实验服、实验鞋，用酒精擦拭剪刀、镊子、移液器、桌面等；

⑶样品和试剂盒回温，填写相关表格；

⑷取出八联管，加入100ul核酸裂解液和20ul样本、生理盐水，盖紧管盖，做好标记，充分混合，瞬时离心后放入猪警2000，开始“核酸裂解”；

⑸吸取多于样品数3个的反应液、酶、内参于新的1.5mL离心管中，混匀后，分装40ul/孔至八联管中；

⑹裂解后的样品离心5-10min，然后将其上清液以及阴性对照、阳性对照（各10ul）分别加入⑤中含有PCR体系的八联管，盖紧管盖，瞬时离心，确保八联管中没有气泡；

⑺将离心后的八联管放入猪警2000，更改实验名称，选择反应孔，选择“BTG-Ag常规程序”，标识阴阳性对照，开始实验后编写样品信息；

⑻收拾台面，用酒精棉擦拭移液器、离心机、桌面等，移液器调至最大量程；

⑼PCR结束后取出PCR产物，用自封