第六章药物含量测定技术

第六章药物含量测定技术第一节定量分析方法的分类与特点

（一）容量分析法的特点与适用范围方法简便易行，仪器价廉易得、操作简便、快速方法耐用性高结果准确、相对误差％专属性差适用于化学原料药的含量测定一、容量分析法(二)计算

1.滴定度（T）每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量（mg）2.T的计算

aA＋bB→cC+dDM：滴定液的摩尔浓度

a：被测药物的摩尔数

b：滴定液的摩尔数

m：被测药物的毫摩尔质量例碘量法测定维生素C（）的含量，碘滴定液的摩尔浓度为，化学反应式如下：

C6H8O6+I2→C6H6O6+2HI3.含量的计算

取本品，加乙醇30ml，微温使溶解，放冷，加甲酚红指示液4滴与麝香草酚蓝指示液1滴，用氢氧化钠滴定液（）滴定至溶液显紫红色，消耗氢氧化钠滴定液（）；并将滴定的结果用空白试验校正，消耗氢氧化钠滴定液（）。每1ml氢氧化钠滴定液（）相当于的呋塞米。按干燥品计算，含C12H11CIN2O5S不得少于99.0%。例1呋塞米含量测定

取本品，置250ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液（）25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1分钟，在暗处静置15分钟后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液（）相当于的C12H17N2NaO3。按干燥品计算，含C12H17N2NaO3不得少于98.5%。已知样品消耗硫代硫酸钠滴定液（），空白实验消耗硫代硫酸钠滴定液（）。例2.司可巴比妥钠原料药含量测定

二、光谱分析法

（一）紫外-可见分光光度法（200nm～760nm)

灵敏度高，可达10-7g/ml～

10-4g/ml1.特点准确度高，RSD（%）为2%～5%

仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用范围广。

2.朗伯-比耳定律A=ECL

3.仪器校正和检定波长校正用汞灯中较强谱线与

或用仪器中氘灯的与进行校正。

吸收度的检定：用K2CrO72SO4液至1000ml

波长(nm)235(最小)257(最大)313(最小)350(最大)

杂散光检查：试剂浓度(g/ml)测定波长透光率(%)

NaI1.00220nm＜NaNO25.00340nm＜4.对溶剂的要求:220～240nm241～250nm251～300nm300nm以上

溶剂+吸收池A

5.含量测定

a.对照法D稀释体积b.吸收系数法c.标准曲线法

A=a+bCAC（浓度）d.计算分光光度法e.比色法

精密称定，置200ml容量瓶中，加乙醇150ml，于温水浴中加热，振摇使奥沙西泮溶解，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，在229nm的波长处测定吸光度为0,480；另精密称取奥沙西泮对照品，同法操作，测得229nm的波长处测定吸光度为；药典规定本品按干燥品计算，含C15H11CIN2O2应为98.0%~102.0%。该供试品含量是否合格？例1.奥沙西泮原料药含量测定

精密称取对乙酰氨基酚，置250ml容量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml容量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀。依照分光光度法，在257nm波长处测得吸收度为。按C8H9NO2的百分吸收系数为719。计算对乙酰氨基酚的百分含量。例2.对乙酰氨基酚原料药含量测定

（二）荧光分光光度法灵敏度高，可达10-12g/ml～

10-10g/ml

在低浓度进行测定，防止F与C不成正比及自熄灭作用1.特点用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性。

干扰因素的排除溶剂、溶液、玻璃仪器、温度含量测定常用的方法对照品比较法

Ci=(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)×Cr

三、色谱分析法1.特点高灵敏度，可达10-15g/ml～

10-12g/ml

高专属性高效能与高速度分离分析同时进行三、色谱分析法2.色谱法分类分离原理吸附色谱法分配色谱法离子交换色谱法分子排阻色潽法分离方式纸色谱法TLCGCHPLC柱色谱法3.系统适用性试验①理论板数（n）（tR/Wh/2）2=16（tR/W）2②分离度（R）三、色谱法分析法

③拖尾因子（T）

T=W/2d1

～④重复性取对照溶液，连续进样5次其峰面积的相对标准偏差应≯2.0%三、色谱法分析法

（一）HPLC采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。三、色谱法分析法

（一）HPLC1.对仪器的一般要求色谱柱检测器流动相三、色谱法分析法（一）HPLC2.测定法内标法外标法如：氨酚待因片的含量测定三、色谱法分析法

（二）气相色谱法

1.原理样品中各组分在固定相与载气间分配因分配系数不同而分离三、色谱法分析法2.一般要求载气：氮气色谱柱：填充柱；毛细管柱进样口温度：高于柱温30～35℃

进样量：≯数微升检测器：FID三、色谱法分析法（一）HPLC3.测定法内标法外标法标准溶液加入法三、色谱法分析法第二节样品分析的前处理方法

样品前处理

前处理：分析前采用一定方法使待测药物或元素转化为适宜状态满足分析方法对试样的要求

样品前处理

含卤素元素1卤素与脂肪链的碳原子相连结合不牢固2卤素与芳环相连结合牢固1含金属有机药物:

金属离子不直接与碳原子相连.

为有机酸及酚的金属盐或配位化合物,金属原子结合不牢固,

在溶液中可直接离解出金属离子.2有机金属药物:

金属离子直接与碳原子以共价键相连.结合状态比较牢固,在溶液中不能直接离解出金属离子.含金属元素第二节定量分析样品的前处理方法卡巴胂金属有机药物富马酸亚铁

样品前处理

根据卤素或金属在分子中结合牢固程度不同而异.不经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法直接测定法经水解后测定法经还原分解后测定法湿法破坏法干法破坏法第二节定量分析样品的前处理方法

一不经有机破坏的方法

（1）C-M不直接相连配位滴定法例如：乳酸钙

0.3g+水100ml放冷+NaOH15mlEDTA滴定钙紫红素指示剂1.直接测定法第二节定量分析样品的前处理方法

不经有机破坏的方法

（2）适用于C-M(金属原子直接与碳原子相连）键结合不牢固的有机金属药物,在水溶液中可以电离。氧化还原滴定法例如：富马酸亚铁溶于热硫酸，同时分解释放出亚铁离子，可选用铈量法进行测定。

第二节定量分析样品的前处理方法

不经有机破坏的方法

（3）利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量含锑药物游离Sb5+具有氧化性，在酸性下氧化KI析出I2，可用Na2S2O3

滴定例如：葡萄糖锑钠

Sb5++2KISb3++I2

I2+2Na2S2O32NaI+2Na2S4O6

第二节定量分析样品的前处理方法2.经水解后测定法（1）碱水解后测定法适用卤素原子与碳原子结合不牢固药物。如卤素与脂肪碳链相连。

不经有机破坏的方法

第二节定量分析样品的前处理方法

不经有机破坏的方法

（1）碱水解后测定法

将含卤素的有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）中,加氢氧化钠溶液回流使其水解,将有机结合的卤素转变为无机的卤素离子,然后选用间接银量法进行测定。第二节定量分析样品的前处理方法

不经有机破坏的方法

第二节定量分析样品的前处理方法CCl3—C(CH3)2—OH

+4NaOH(CH3)2CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl+AgNO3（定、过）AgCl↓+NaNO3

AgNO3（过）+NH4SCNAgSCN+NH4NO3回流三氯叔丁醇

不经有机破坏的方法

（2）酸水解后测定法

含金属的有机药物与适当的矿酸共热，将不溶性金属盐类水解置换为可溶性盐，然后选用配位滴定或剩余酸碱滴定法测定。

Mg(C17H35COO)2+H2SO4MgSO4+2C17HCOOH

H2SO4+NaOHNa2SO4+H2O

第二节定量分析样品的前处理方法

（2）酸水解后测定法

第二节定量分析样品的前处理方法共沸十一烯酸锌+盐酸十一烯酸＋氯化锌氯化锌+EDTA-2Na滴定

不经有机破坏的方法

3.经还原分解后测定法第二节定量分析样品的前处理方法

苯环-I→碱性下＋还原剂（如锌粉）→加热回流→无机碘→银量法如：泛影酸测定(1)碱性还原后测定泛影酸（卤素原子与芳环相连，化学键牢固）+3NaI+2CH3COONa+3Na2ZnO2+3H2O

Zn粉NaI+AgNO3AgI

+NaNO3曙红钠为吸附指示剂黄色玫瑰红色第二节定量分析样品的前处理方法

不经有机破坏的方法

第二节定量分析样品的前处理方法(2)酸性还原后测定

苯环-I→酸性下＋还原剂（如锌粉）→加热回流→无机碘→银量法如：碘番酸二经有机破坏的方法1.湿法破坏法 第二节定量分析样品的前处理方法1）硝酸-高氯酸法

血、尿、组织等生物样品破坏后，高价无机金属离子破坏强，反应激烈勿蒸干，以免爆炸

经有机破坏的方法1.湿法破坏法 第二节定量分析样品的前处理方法2）硫酸-硫酸盐法

硫酸盐提高硫酸沸点破坏后，低价无机金属离子常用于含砷、锑有机药物

凯氏定氮原理：消解蒸馏与吸收测定第二节定量分析样品的前处理方法消解

第二节定量分析样品的前处理方法

本法关键，为使消解迅速完全

a.加硫酸盐，提高消解液沸点

H2SO4（％）：氧化剂、炭化剂和固氨沸点323~330℃

加入K2SO4、KHSO4、无水Na2SO4第二节定量分析样品的前处理方法K2SO4（g/ml）0.51.01.55.0沸点℃329344364387404常用量：H2SO4:K2SO4=2:1(V:W)第二节定量分析样品的前处理方法b.辅助氧化剂

HClO4

缩短消解时间量多，高温易爆炸

H2O2（30％）安全，过量加热自行分解不能含氮稳定剂（乙酰苯胺）第二节定量分析样品的前处理方法C.催化剂汞：金属汞、氧化汞、硫酸汞硒：金属硒、二氧化硒铜：硫酸铜锰：二氧化锰第二节定量分析样品的前处理方法

催化能力：

Hg>Se>Cu>MnCuSO4:

价廉、不挥发、毒性小汞类：最有效，易生成[Hg(NH3)2]SO4

卤素，生成难解离的HgX第二节定量分析样品的前处理方法d.消解注意问题♣凯氏瓶放小漏斗，瓶内放玻璃珠或沸石

♣消解完全：消解液无色或绿色一般变绿色，继续加热30分钟

♣毒气橱中进行，初小火，泡沸停止加大火硫酸还原SO2、H2O，分解SO3第二节定量分析样品的前处理方法♣氮结构状态

-N=N-、-NH=NH-

产物为氮气，加锌粉还原后处理硝酸盐或亚硝酸盐产物为HNO2或HNO3，加水杨酸或苯酚→硝基或亚硝基化合物，加硫代硫酸钠还原为氨基杂环中的氮氢碘酸还原成氢化杂环第二节定量分析样品的前处理方法蒸馏与吸收第二节定量分析样品的前处理方法♣水蒸气中水加H2SO4使甲基红呈显著红色♣40％NaOH过量，溶液为黑色♣初速度不能过快♣蒸馏终点：时间＞1小时；馏出液体积2/3

甲红试液检查（不变黄）第二节定量分析样品的前处理方法滴定

a.直接滴定法 滴定液：H2SO4滴定液(0.005mol/L)

指示剂：甲基红-溴甲酚绿 终点颜色：蓝绿色→灰紫色

2NH3.H3BO3+H2SO4(NH4)2SO4+2H3BO3第二节定量分析样品的前处理方法b.剩余滴定法吸收液：定过量HCl或H2SO4

滴定液：标准碱溶液指示剂：甲红第二节定量分析样品的前处理方法第二节定量分析样品的前处理方法3）硝酸-硫酸法

适用大多数有机物质的破坏破坏后，高价无机金属离子

不适用碱土金属与硫酸形成不溶性硫酸盐经有机破坏的方法

第二节定量分析样品的前处理方法2.干法破坏

1）高温炽灼法待测元素的有机药物→高温炽灼→无机元素→检查、测定