食品营养学实验

1营养调查定义：运用各种手段准确了解某一人群(以至个体)各种营养指标的水平，用来判定其当前营养状况，这称为营养调查(nutritionalsurvey)。2营养监测定义：搜集分析对居民营养状况有制约作用的因素和条件，预测居民营养状况在可预见的将来可能发生的动态变化，并及时采取补充措施，引导这种变化向人们期望的方向发展，这称为营养监测(nutritionalsurveillance)。实验一居民营养调查一、营养调查的概念营养调查是了解人群的膳食摄取情况及其营养供给量之间的情况；了解与营养状况有密切关系的居民体质与健康状态，发现营养不平衡的人群，为进一步营养监测和营养政策的制定提供基础数据；作某些综合性专题性科学研究，如某些地方病、营养相关性疾病与营养的关系，研究某些生理常数、营养水平判定指标等。二、营养调查目的三、营养调查内容（1）膳食调查（2）人体营养水平的生化检验（3）营养不足或缺乏的临床检查（4）人体测量资料分析营养调查内容1膳食调查的方法一般膳食调查方法有:(1)称重法(2)查账法(3)询问法(4)化学分析（1）膳食调查称重法步骤①准确记录每餐各种食物及调味品的名称；②准确称取每餐各种食物的烹调前毛重、舍去废弃部分后的净重、烹调后的熟重以及吃剩饭菜的重量；③计算生熟比，生熟比=生食物重量/熟食物重量；④将调查期间所消耗的食物按品种分类、综合，求得每人每日的食物消耗量；⑤按食物成分表计算每人每日的营养素摄入量。2膳食调查目的膳食调查的目的是要了解不同地区、不同生活条件下某人群或某个人的饮食习惯、日构成的优缺点，了解存在的主要问题，研究其对于人民健康以及常所吃的食物种类和数量，再根据食物成分表计算出每人每日各种营养素的平均摄入量，根据目前营养学知识和体格测量、临床体征检查和营养状况的实验室检验等结果，评定其膳食儿童的生长发育有什么影响，从而改善饮食的调配，并为国家食物的计划生产和改进人民营养状况提供科学依据。膳食调查主要包括：①调查期间每人每日所吃的食物品种、数量，这是膳食调查最基本的资料；②了解烹调加工方法对维生素保存的影响等；③注意饮食制度、餐次分配是否合理；④过去膳食情况、饮食习惯等，以及调查对象生理状况，是否有慢性病影响等。3膳食调查主要内容

3膳食调查方法根据具体情况可采用记帐法，称重法、询问法、膳食史法及熟食采样分析法等方法。营养工作者必须选择一个能正确反映个体或人群当时食物摄入量的方法，必要时可并用两种方法。

调查日数一般为5～7日，其中不包括节日。若居民有星期日吃得较好的习惯则应包括星期日在内的7天调查。调查的日数也随膳食管理方法及调查方法而定。如在包伙制的机构（托幼机构）可用记帐法进行调查，调查日数可长达一个月到半年，应用询问观察法可以对儿童一个月内的膳食情况作出比较准确的估计，为研究癌症患者不同膳食组分（如脂肪、膳食纤维等）作为不同部位的癌肿的危险因子时则常用膳食史的方法，调查期可长达数年。4膳食调查的计算和步骤

第一步膳食资料的收集与整理①记帐法记录被调查单位各种食物消耗量为期一个月，并仔细统计每日吃饭人数，以求出平均每人每日各种食物消耗量。②称量法系将伙食单位（或个人）每日每餐各种食物食部消耗的数量都另以称衡记录。一般烹调以前的生重、烹调后的熟重和剩余的熟食量须称量记录并求出生熟比例，然后将一天各餐的结果相加取得一日的各咱食物消耗量。各种食物须经分类综合，然后求得每人每日食物的平均消耗量（参用表42-1及42-2）。

第二步资料的计算以上方法取得的原始资料按食物成分表计算出每种食物所供给的能量和各种营养素。记帐法可按每公斤食品计算，称重法按100g食物计算，所求得的总量即为调查期间该人群（或个人）平均每人每日热能和各种营养素摄入量（参用表42-3）。

第三步计算膳食中各类食物的重量及百分比4膳食调查问卷（1）老年人（2）考研学子（3）中高端收入都（4）大学生（5）保洁人员（6）医护人员（7）教师4膳食调查问卷膳食调查问卷对象膳食调查除开展现场咨询的形式外，还可以开展广泛的问卷形式，从而来搜集大量的信息。针对不同的调查对象进行可以对学生实行分组来开展调查。人体营养水平的生化检验定义：是借助生化、生理实验手段，发现人体临床营养不足症、营养储备水平低下或过营养状况(overnutrition)，以便较早掌握营养失调征兆和变化动态，及时采取必要的预防措施。有时为了研究某些有关因素对人体营养状态的影响，也对营养水平进行研究测定。（2）人体营养水平的生化检验人体营养水平鉴定生化检验参考指标及临界值（3）营养不足或缺乏的临床检查营养缺乏的体征目的：是根据症状和体征检查营养不足症和缺乏症，是一种营养失调的临床检查。

（4）人体测量资料分析

人体体格检查项目目的：人体体格测量资料可以作为营养状况的综合观察指标。

1.体重和身高理想体重(idealweight)

理想体重(kg)=身高(cm)-100(Broca公式)

理想体重(kg)=身高(cm)-105(Broca改良公式)

理想体重(kg)=[身高(cm)-100]×0.9(平田公式)

理想体重±10%为正常，±10%～20%为超重或瘦弱，±20%为超重或极瘦弱。2体质指数(BMI)BMI=体重(kg)/(身高m)2BMI正常值为18.5～24.99。BMI<16为重度消瘦，16～16.9为中度消瘦，17～18.4为轻度消瘦，25～29.99为超重，>30为肥胖。

身高别体重(weightforheight)：用于儿童，反映当前营养状况。

年龄别身高(weightforage)：用于儿童，反映较长时期的营养状况。

体重身高营养正常I度营养不良Ⅱ度营养不良Ⅲ度营养不良90%～100%75%～89%60%～74%＜60%95%～100%90%～94%85%～89%＜85%评价方法(1)离差法(2)百分位数评价法(3)Gomez分类法体重和身高>100%者认为是营养良好。

3上臂围与皮褶厚度

1～5岁儿童上臂围>13.5cm营养良好

12.5～13.5cm营养中等

<12.5cm营养不良皮褶厚度男性＜10mm瘦女性＜20mm瘦

10～40mm中等20～50mm中等＞40mm肥胖＞50mm肥胖4其他测量指标：胸围、头围、骨盆径、小腿围、背高、坐高、肩峰距和腕骨X线。5人体测量资料的各种评价指数

Kaup指数：Kaup指数＝[体重(kg)/身高(cm)2]ｘ104。用于衡量婴幼儿的体格营养状况。判断标准此指数15～18为正常，＞18为肥胖，＜15为消瘦。

Rohrer指数：Rohrer指数=[体重(kg)/身高(cm)3]ｘ107。评价学龄期儿童和青少年的体格发育状况。判断标准：Rohrer指数＞156为过度肥胖，156～140为肥胖，140～109为中等，109～92为瘦弱，＜92为过度瘦弱。

Vervaeck指数：Vervaeck指数={[体重(kg)+胸围(cm)]/身长(cm)}×100。用于衡量青年的体格发育情况。Vervaeck指数营养评价标准

6人体脂肪含量测定Brozek公式F(%)=(4.570/D-4.142)×100F为人体脂肪含量%，

D为人体密度D=M/(Vt-RV)M为被测者体重

Vt为人体总容积(人体在尽量吐气下,在水中测定的排水容积)RV为肺残气容积(人体在水平齐颈状态下所测肺残气容积)

Siri公式体脂(%)=(4.95/D-4.50)100D为身体密度17(女16)～19岁20～29岁30～39岁40～49岁

50岁以上

男女1.066土0.0161.040土0.0171.064土0.0161.034土0.0211.046土0.0121.025土0.0201.043±0.0151.020土0.0161.036土0.0181.013土0.01身体密度(D值)参考值1.调查对象应包括调查范围内的全体居民，按居民的工种、性别、年龄、膳食标准、就餐方式等按比例分层抽样调查。2.调查的时间应在调查年份的每个季节各调查1次，至少要在夏秋和冬春进行2次，以反映季节特点；每次膳食调查不应少于13d，其中不应包含节假日，至少有一个休息日。3.结果的评价调查工作的质量取决于工作计划的科学性、严密性和可行性，以及取得各级领导与调查对象的合作支持程度，另外取决于执行调查计划的工作人员的认真负责态度和专业理论技能水平。四、营养调查的组织◆居民膳食营养摄取量，食物组成结构与来源，食物资源生产加工，供应分配，就餐方式习惯；人均动物性食品增长率或销售额；谷类食品能量与膳食能量之比值；居民蛋白质能量的摄取状况。◆居民营养状况与发育状况，营养缺乏与营养过剩的种类、发病率、原因和发展趋势，控制措施等。◆营养方面一些值得重视的问题◆第二代发育趋势及原因分析◆各种人群中有倾向性的营养失调趋势◆全国或地区特有的营养问题解决程度五、营养调查结果的分析评价

1.营养食谱可将各类人群的膳食营养素参考摄入量具体落实到用膳者的每日膳食中，使他们能按需要摄入足够的能量和各种营养素，同时又防止营养素或能量的过高摄入。

2.可根据群体对各种营养素的需要，结合当地食物的品种、生产季节、经济条件和厨房烹调水平，合理选择各类食物，达到平衡膳食。

3.通过编制营养食谱，可指导食堂管理人员有计划的管理食堂膳食，也有助于家庭有计划地管理家庭膳食，并且有利于成本核算。实验二营养食谱的设计一、营养食谱设计的目的和意义1.膳食食谱设计的原则

1.能满足进餐者对能量、营养素的全面需要；

2.按照RNI计算设计每日主要食物组成；

3.合理分配三餐进食量和能量；编制简明科学的膳食计划；

4.针对不同膳食人群的饮食习惯列出具体的加工烹调实施方法；

5.考虑季节、市场供应，兼顾经济条件等，科学设计食谱。

二、营养食谱设计的理论依据2.中国居民膳食营养素参考摄入量（DRIs,DietaryReferenceIntakes））中国居民膳食营养素参考摄入量（DRIs）是每日平均膳食营养素摄入量的一组参考值。包括：（1）平均需要量（EAR,EstimatedAverageRequirement）（2）推荐摄入量（RNI,RecommendedNutrientIntake）（3）适宜摄入量（AI,AdequateIntakes）（4）可耐受最高摄入量（UL,TolerableUpperIntakeLevel）二、营养食谱设计的理论依据二、营养食谱设计的理论依据

3.中国居民膳食指南和平衡膳食宝塔膳食指南本身就是合理膳食的基本规范，为了便于宣传普及，它将营养理论转化为一个通俗易懂、简明扼要可操作性指南，其目的就是合理营养、平衡膳食、促进健康。因此，膳食指南的原则就是食谱设计的原则，营养食谱的制定需要根据膳食指南考虑食物种类、数量的合理搭配。平衡膳食宝塔则是膳食指南量化和形象化的表达，是人们在日常生活中贯彻膳食指南的工具。宝塔建议的各类食物的数量既以人群的膳食实践为基础，又兼顾食物生产和供给的发展，具有实际指导意义。同时平衡膳食宝塔还提出了实际应用时的具体建议，如同类食物互换的方法，对制定营养食谱具有实际指导作用。根据平衡膳食宝塔，我们可以很方便的制定出营养合理、搭配适宜的食谱。

4.食物成分表食物成分表是营养配餐工作必不可少的工具。要开展好营养配餐工作，必须了解和掌握食物的营养成分。中国疾病预防控制中心营养与食品安全所于2002年出版了新的食物成分表，所列食物仍以原料为主，各项食物都列出了产地和食部，包括了1506条食物的31项营养成分。“食部”是指按照当地的烹调和饮食习惯，把从市场上购买的样品去掉不可食的部分之后，所剩余的可食部分所占的比例。列出食部的比例是为了便于计算市品每千克（或其他零售单位）的营养素含量。市晶的食部不是固定不变的，它会因食物的运输、储藏和加工处理不同而有改变。因此当认为食部的实际情况和表中食部栏内所列数字有较大出入时，可以自己实际测量食部的量。通过食物成分表，我们在编制食谱时才能将营养素的需要量转换为食物的需要量，从而确定食物的品种和数量。在评价食谱所含营养素摄入量是否满足需要时，同样需要参考食物成分表中各种食物的营养成分数据。

5.营养平衡理论

1膳食中三种宏量营养素需要保持一定的比例平衡膳食中蛋白质、脂肪和碳水化合物除了各具特殊的生理功能外，其共同特点是提供人体所必需的能量。

2膳食中优质蛋白质与一般蛋白质保持一定的比例食物蛋白质中所含的氨基酸有20多种，其中有9种是人体需要，不能在体内合成或合成速度不能满足机体需要，必须由食物供给的必需氨基酸，人体对这9种必需氨基酸的需要量需要保持一定的比例。3饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸之间的平衡不同食物来源的脂肪，脂肪酸组成不同，有饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸及多不饱和脂肪酸。6．营养素摄入不足或过多的危险性

人体每天都需要从膳食中获得一定量的各种必须营养成分。当一个人群的平均摄入量达到EAR水平时,人群中有半数个体的需要量可以得到满足:当摄入量达到RNI水平时，几乎所有个体都没有发生缺乏症的危险。摄入量在RNI和UL之间是一个安全摄入范围，一般不会发生缺乏也不会中毒。摄入量超过UL水平再继续增加，则产生毒副作用的可能性随之增加（见图1-1）。缺

乏图1-1营养素摄入不足和过多的危险性图解

营养素摄入不足和过多的危险性图解毒付作用缺乏1.符合平衡膳食原则2.讲究美食3.食物丰富多样4.定量适宜三、科学配餐的要求1.确定食谱类型2.合理选择原料3.确定全日、每餐能量摄取量和三大热能营养素供给量4.主食品种和数量的确定5.副食品种和数量的确定6.平衡调配制定出营养食谱四、营养食谱的设计步骤1.核定与矫正营养素供给量（营养分析）2.核定和矫正饭菜用量3.确定营养食谱五、食谱的调整与确定六、食谱设计表格及图表根据中国居民膳食营养素参考摄入量的标准，通过开展膳食调查，针对不同的人群的不同营养需求进行不同的食谱设计，在设计食谱时，可采取图表的形式进行数据统计，进而得出结论，设计出相应的食谱。常用的统计图有：折线图，柱状图，饼图等。餐次食物名称可食部用量市品早餐加餐午餐加餐晚餐加餐特定人群一日带量食谱六大营养素计算食物种类食用量(g)能量(KJ)提供量(KJ)蛋白质(g)提供量(g)脂肪(g)提供量(g)碳水化合物(g)提供量(g)膳食纤维(g)提供量(g)大米小米富强粉芝麻饼绿豆饼干豆腐芹菜维生素计算食物种类A(ug)提供量(ug)B1(mg)提供量(mg)B2(mg)提供量(mg)PP(mg)提供量(mg)C(mg)提供量(mg)E(mg)大米小米富强粉芝麻饼绿豆饼干豆腐芹菜白菜维生素计算特定人群基本信息：性别、年龄、身高、体重营养实际与推荐的关系营养实际与推荐的关系实验三食品中营养成分的综合分析本实验属开放性实验,学生可在规定的实验周内开展实验,学生自己提供实验样品,自己设计实验方案。通过测定食品样品中的七大营养素，要求同学掌握测定食品中营养素的原理和操作方法，并且能够了解被测样品的品质以及评定该食品的营养价值，更能够培养学生根据机体在不同的生理、病理情况下新陈代谢的需要而科学地开展食谱设计,从而提高学生综合分析问题和解决问题的能力。序号营养成分测定指标测定方法1水份的测定直接干燥法2灰份的测定灼烧法3蛋白质的测定凯氏定氮法4脂肪的测定索氏提取法5纤维素的测定消煮法6还原糖的测定费林显色法7还原型维生素C的含量比色法实验内容食品样品营养分成的综合分析，主要是针对食品中的水分、灰分、蛋白质、脂肪、粗纤维素、糖类及Vc的成分分析，从而评定该食品的营养价值。食品样品营养成分综合分析主要评定指标如下表所示：实验目的

1.明确对食品样品综合分析的意义，通过对食品样品中七大营养素的测定，了解被检测食品样品的品质。2.掌握测定食品样品相关的方法原理和操作技术。3.通过对食品样品中七大营养素的综合分析，评定该食品的营养价值。实验原理食品样品营养分成的综合分析，主要是针对食品中的水分、灰分、脂肪、蛋白质、糖类、粗纤维素的成分分析，采用的实验方法为国标（GB）中的标准方法。其中：（1）水分的含量测定是采用的常压干燥法，是指在100℃左右直接干燥的情况下，所失去物质的总量；（2）灰分的含量测定采用的是恒重法，是指食品经高温灼烧后遗留下来的无机物，主要是无机氧化物或盐类，称取其重量即可求得灰分含量；（3）脂肪的含量测定采用的是索氏萃取法，是指食品中的样品经无水乙醚或石油醚等有机溶剂提取后，蒸后溶剂所得到的物质；（4）蛋白质的含量测定采用的是经典的凯氏定氮法，是根据食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氮与硫酸结合生成硫酸铵，然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量计算总氮含量，再换算为蛋白质含量；（5）粗纤维的含量测定是指样品在硫酸作用下，样品中的糖、淀粉、果胶质和半纤维素经水解除去后，再用碱处理，除去蛋白质及脂肪酸，遗留的残渣为粗纤维，如其中含有不溶于酸碱的杂质，可灰化后除去；（6）还原糖的含量测定采用的是斐林显色法，原理为，样品经除去蛋自质后，在加热的条件下，直接滴定已标定过的碱性酒石酸铜液（费林试剂），以次甲基蓝为指示剂，根据样品消耗的体积，计算还原糖量；（7）总抗坏血酸还原型维生素C的含量测定采用的是2，4－二硝基苯肼比色法，食品中总抗坏血酸包括还原型和脱氢型两种形式，包括还原型和脱氢型两种形式，脱氢型的抗坏血酸仍有85%左右的维生素C活性，用活性炭将还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，在一定条件下，脱氢型抗坏血酸与2，4二硝基苯肼作用生成红色的脎，脎的生成量与总抗坏血酸含量成正比，将脎溶解在硫酸中进行比色定量。实验原理实验材料（1）实验原料学生自己准备的实验原料，如水果、蔬菜、粮食等。（2）试剂石油醚；硫酸铜；硫酸钾；甲基红；溴甲酚绿；浓硫酸；氢氧化钠；浓盐酸；次甲基兰；酒石酸钾钠；冰醋酸；亚铁氰化钾；乙酸锌；葡萄糖等。仪器设备电炉，分析天平，干燥箱，真空干燥箱，高温炉，瓷坩埚，坩埚钳，凯氏定氮仪，碱式滴定管，粗纤维测定仪，粗脂肪测定仪、马弗炉等。（1）水分的含量测定是采用的常压干燥法：样品放于干燥箱内，在105℃左右直接干燥，所失去物质的总量。（2）灰分的含量测定采用的是恒重法：样品放于马弗炉中，经高温灼烧后遗留下来的无机物。（3）脂肪的含量测定采用的是索氏提取法：样品放于脂肪提取仪中，经无水乙醚或石油醚等有机溶剂提取后，蒸后溶剂所得到的物质。（4）蛋白质的含量测定采用的是经典的凯氏定氮法：样品首先经过消化炉消化，生成硫酸铵；然后放于凯氏定氮仪上蒸馏，再以盐酸标准溶液进行滴定操作，根据盐酸的消耗量计算蛋白质含量。（5）粗纤维的含量测定采用的是消煮法：样品放于粗纤维测定仪上，在硫酸作用，碱处理，除去蛋白质及脂肪酸，遗留的残渣为粗纤维。（6）还原糖的含量测定采用的是斐林显色法（7）总抗坏血酸还原型维生素C的含量测定采用的是2，4－二硝基苯肼比色法。实验步骤水份的测定实验步骤用天平平行称量原料三份，放入洁净铝制或玻璃制的扁形称量瓶，称完后置于95～105℃干燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，加热0.5～1h后，取出盖好，置干燥器内冷却0.5h，称量，并重复干燥至恒重。

注意事项：半固体或液体样品前处理：拌入一定量的海砂后再放入扁形称量瓶。（2）恒量定义：重复灼烧至前后两次称量相差不超过0.5mg为恒量。讲解内容：第一步：瓷坩埚的灼烧：取大小适宜的瓷坩埚置高温炉中，在600℃下灼烧0.5h，冷至200℃以下后，取出，放入干燥器中冷至室温，精密称量，并重复灼烧至恒量。第二步：称量：称量2～3g固体样品或5～10g液体样品放入瓷坩埚中，然后置于马弗炉中，在550～600℃灼烧至无炭粒，冷却至200℃以下后取出坩埚，并放入干燥器中冷却并称量。注意事项：（1）半固体或液体样品须先在沸水浴上蒸干，先以小火加热使样品充分炭化至无烟，再放入马弗炉中。灰分的测定蛋白质的测定

蛋白质的测定步骤1-----实验材料试剂1．硫酸铜。2．硫酸钾。3．硫酸。4．混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。5．蒸馏水，放于蒸馏水桶中。6．配制2%硼酸溶液，放于酸桶中。7．配制10mol/L氢氧化钠溶液，放于碱桶中。8．配制0.05mol/L盐酸标准溶液，备用。所有试剂均用不含氮的蒸馏水或乙醇配制蛋白质的测定步骤2----样品消化过程蛋白质的测定1．消化过程样品处理：称量0.2~2.0g样品→移入消化管→加入1.5g硫酸铜→4.5g硫酸钾→10mL浓硫酸。按下图把消化管接到消化炉上→打开冷凝水→加热消化→观察消化管现象→澄清变绿后再继续消化半小时→结束消化。实验开始时，冷凝水必须打开。2.蒸馏过程冷却消化管→加入10mL蒸馏水→连结凯氏定氮仪→锥形瓶加硼酸→消化管加碱→蒸馏→硼酸接收生成氨气蛋白质的测定蛋白质的测定步骤3-----消化液的蒸馏过程

本实验是在强酸、强碱、高温、高压环境下进行的，操作时要格外小心。3．滴定过程硼酸液→0.05moL/L盐酸标准溶液滴定→至溶液由蓝变棕红色为止→记录消耗的盐酸体积。蛋白质的测定蛋白质的测定步骤4-----酸碱滴定过程

蛋白质含量（克/%）=蛋白氮×FA――为滴定样品用去的盐酸平均毫升数；B――为滴定空白用去的盐酸平均毫升数；C――为称量样品的克数：0.01――为盐酸的当量浓度；14――为氮的原子量；

F——氮换算为蛋白质的系数。一般取平均值为6.25.计算公式脂肪的测定脂肪的测定步骤1-----脂肪的提取过程

称量一定量的样品，放入将折好的滤纸筒中，再将滤纸筒放入索氏提取蕊中，向抽提瓶中倒入50mL石油醚，将索氏提取蕊与抽提瓶连结好，再将抽提瓶安装到脂肪测定仪，提取过程约4~6h。脂肪的测定步骤2-----抽提瓶的干燥过程将提取过程结束后，将索氏提取蕊取下，回收石油醚或乙醚后，将提取瓶放入干燥箱内，待干燥恒重后，称量。脂肪的测定干燥箱干燥器纤维素的测定纤维素的测定步骤1------样品的消煮过程将待测的样品粉碎过筛后，称量一定量的样品放于坩埚中，再将域名依次放入粗纤维测定仪上，打开加酸开关，加入一定量的酸液，设定酸消煮时间为30min，待酸反应结束后，再打开加碱开关，加入一定量的碱液，时间同样设定30min，待消煮结束后，再取出坩锅进行干燥。将取出的坩锅进行干燥，干燥结束后称重，再将坩埚放入马弗炉中，进行灼烧，灼烧完，再次称重，从而根据公式计算出纤维素的含量。纤维素的测定纤维素的测定步骤1------样品的灰化过程

马弗炉瓷坩锅还原糖的测定还原糖的测定步骤1蛋白质的去除：精密称取样品1克于小烧杯中，用少量水溶解后，移入200mL容量瓶中，再加入3mL乙酸锌溶液和3mL亚铁氰化钾溶液，混匀，使蛋白质沉淀，再加水稀释至刻度，摇匀，用真空泵进行过滤，收集滤液备用。所需溶剂：（1）费林甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O），及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1L。

（2）费林乙液：称取50g酒石