常用缓冲液及培养基配方

常用缓冲液及培养基配方常用缓冲液及培养基配方LB液体培养基：Bacto-蛋白胨10g酵母抽提物5g氯化钠10g加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。LB固体培养基：每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。SOB液体培养基Bacto-蛋白胨20g酵母抽提物5gNaCl0.5g加950ml水溶解，加入250mmol/LKCl溶液10ml，用5NNaOH调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。SOC液体培养基SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。麦康凯固体培养基每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。NA固体培养基牛肉浸膏3g酵母浸膏1g蛋白胨5g蔗糖10g琼脂粉15g加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。TB培养基：将下列组分溶解在0.9L水中：Bacto-蛋白胨12g酵母抽提物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH24PO/0.72mol/LKHPO4的溶液。高压灭菌或用20.22um的滤膜过滤除菌。溶液Ⅰ葡萄糖2.25g50mmol/L1mol/LTris·Cl(pH8.0)6.25ml20mmol/L0.5mol/LEDTA(pH8.0)5ml10mmol/L调pH至8.0后，用水定容至250ml，高压灭菌后保存。溶液Ⅱ10mol/LNaOH2ml10%SDS10ml用水定容至100ml，现配现用。溶液Ⅲ5mol/L醋酸钾60ml冰醋酸11.5ml水28.5ml高压灭菌后保存。高盐TE缓冲液10mmol/LTris.Cl,pH8.0*0.1mmol/LEDTA,pH8.0*1mol/LNaCl于室温保存（可在几年内保持稳定）CTAB抽提液2%（w/v）CTAB(古立烷基三乙基溴化铵 )100mmol/LTris.Cl,pH8.0*1.4mol/LNaCl于室温保存（可在几年内保持稳定）CTAB/NaCl 溶液（10%CTAB/0.7mol/LNaCl）在80mlH2O中溶解4.1gNaCl,缓慢加入10CTAB（十六烷基三乙基溴化铵），同时加热并搅拌。如果需要，可加热至65℃溶解。定容终体积至100ml.CTAB沉淀液1%（w/v）CTAB50mmol/LTris.Cl,pH8.010mmol/LEDTA,pH8.0PBS缓冲液：十二水磷酸氢二钠15g磷酸二氢钾1g氯化钠40g氯化钾1g定容至5000ml,调pH至7.2。ELISA包被液：碳酸钠1.59g碳酸氢钠2.93g定容至1000ml，调pH至9.6。ELISA洗涤液(0.01MPBST)：5000mlPBS中加2.5ml吐温-20显色液（底物溶液-邻苯二胺溶液）：pH5.0磷酸盐-柠檬酸缓冲液：0.1M柠檬酸（19.2g/L）24.3ml、0.2MNa2HPO4(28.4g/L)25.7ml、临用时取上述溶液10ml,加邻苯二胺OPD）4mg，溶解后加入30％H2O215lμ；终止液：2MH2SO4TE缓冲液(pH8.0)：Tris·HCl(pH8.0)

10mmol/LEDTA(pH8.0)

1mmol/L高压灭菌。10%SDS：10g十二烷基硫酸钠溶于

90ml水中，加热至68℃溶解，加几滴浓盐酸调pH至7.2，定容至100ml，过滤除菌。50×TAE缓冲液Tris242g冰醋酸57.1ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)100ml用水定容至1000ml，用时稀释50倍。5×TBE缓冲液：Tris碱*54g硼酸27.5ml0.5mol/L20mlEDTA(pH8.0)加水定容至1000ml，0.5×使用。6×DNA上样缓冲液：0.25%溴酚蓝*0.25%二甲苯青FF*30%甘油甲醛凝胶加样缓冲液(DEPC处理水配制)：50%甘油1mmol/LEDTA(pH8.0)0.25溴酚蓝*0.25二甲苯青FF*适量溴化乙锭*20×SSC：氯化钠175.3g柠檬酸钠88.2g蒸馏水900ml溶解后用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌保存。预杂交液：6×SSC5×Denhardt试剂0.5%SDS100ug/ml经变性并断裂成片段的鲑精DNA5×甲醛凝胶电泳缓冲液：0.1mol/LMOPS(pH7.0)*40mmol/L乙酸钠5mmol/LEDTA(pH8.0)*甲醛变性凝胶配方：加入0.7g琼脂糖到49.7mlDEPC-H2O中，用煮沸法溶解琼脂糖，待溶液冷却至55℃同时加入7ml10×MOPS（0.2mol/LMOPSpH7.0,20mmol/L乙酸钠，10mmol/LEDTApH8.0）电泳缓冲液和13.3ml甲醛，摇匀，制板待用。0.5mol/L磷酸缓冲液（PH7.2）134gNa2HPO4,4ml85%H3PO4, 用水定容至1L。探针标记中的逆转录终止液 1×TEN40mmol/LTris-Cl(PH7.5),1mmol/LEDTA(PH8.0),150mmol/LNaCl。洗膜液Ⅰ2×SSC，0.1％（m/V）SDS洗膜液Ⅱ0.1×SSC，0.1％（m/V）SDSSDS电泳分析所用的试剂：30%丙烯酰胺：29g丙烯酰胺和1gN，N’亚甲基双丙烯酰胺，加入60mlddH2O，完全溶解后定容至100ml，过滤，置棕色瓶中备用。Tris-甘氨酸电泳缓冲液：Tris3.00g，甘氨酸14.4g，SDS1g，调pH至8.3，用水定容至1L。12%分离胶：ddH2O3.3ml，30%丙烯酰胺4ml，Tris-HCl（pH8.8）2.5ml，10%SDS0.1ml，10%过硫酸铵0.1ml，TEMED0.006ml。5%浓缩胶：ddH2O1.4ml，30%丙烯酰胺0.33ml，Tris-HCl（pH6.6）0.25ml，10%SDS0.02ml，10%过硫酸铵0.02ml，TEMED0.002ml。考马斯亮蓝染色液：乙醇450ml，冰醋酸100ml，ddH2O450ml，考马斯亮蓝R-2502.5g。脱色液（1L）：乙醇450ml，冰醋酸100ml，ddH2O450ml。2×上样缓冲液： 100mmol/LTris-HClpH6.8），200mmol/L二硫苏糖醇（DTT），4%SDS，0.2%溴酚蓝，20%甘油。蛋白纯化所需的缓冲液：Buffer B(pH 8.0)：8M urea、100mMNaH2PO4、10mMTris-ClBuffer C(pH 6.3)：8M urea、100mMNaH2PO4、10mMTris-ClBufferD(pH5.9)：8Murea、100mM24、10mMTris-ClNaHPOBufferE(pH4.5)：8Murea、100mMNaH2PO4、10mMTris-Cl电洗脱缓冲液：SDS0.1-0.5gTris-Base3g甘氨酸18.8g定容至1000ml蛋白提取缓冲液：Tris-HCl，pH6.850mmol/LSDS4.5%-疏基乙醇7.5%尿素9mol/L电转移缓冲液：Tris-Base3.00g，甘氨酸14.4g，SDS1g，甲醇200ml，调pH至8.3，用水定容至1L。Westernblot所用试剂：1×PBS(pH7.4)：NaCl8g，KCl0.2g，KH2PO40.24g，Na2HPO41.44g，用蒸馏水溶解至1L1×PBST：5L1×PBS中加入2.5mlTween-20封闭液：100mlPBS缓冲液中加入5克脱脂奶粉植物基本培养基溶液大量元素（1L）七水硫酸镁370mg磷酸二氢钾170mg硝酸钾1900mg硝酸氨1650mg二水氯化钙440mg微量元素（1L)硼酸6.2mg一水硫酸锰15.6mg七水硫酸锌8.6mg二水钼酸钠0.25mg五水硫酸铜0.025mg六水氯化钴0.025mg碘化钾0.83mg七水硫酸亚铁27.8mg乙二铵二乙酸二钠37.3mg有机(1L)盐酸硫胺素0.5mg盐酸吡哆辛0.5mg烟酸0.05mg肌醇100mgMSs培养基10×大量100ml100×微量10ml100×铁盐10ml500×B5有机2ml6-BA1mg蔗糖30g琼脂0.8%调PH5.8并加水定容至1LMsr（1L）10×大量元素100ml100×微量元素10ml100×Fe盐10ml500×B5有机2ml蔗糖3g葡萄糖7g琼脂0.8%PH5.8加水定容至1L水稻转化用培养基培养基成分NB(基本培N6大量元素营养液、EDTA-Fe营养基)养液、B5微量元素营养液、B5维(刘巧泉生素营养液等,1998)Nbi(愈伤NB、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯诱导和继氨酸、0.3g/L水解酪蛋白、30g/L代培养基)蔗糖、2mg/L2,4-D、2.6g/L植物胶，pH5.8高渗培养Nbi、47g/L山梨醇、47g/L甘露醇，基pH5.8NBs(筛选NB、0.5g/L谷氨酰胺、0.5g/L脯培养基)氨酸、0.3g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、2mg/L2,4-D、40mg/LHyg(第二次筛选用量为50mg/L)、2.6g/L植物胶，pH5.8MS(再生培MS大量元素营养液、EDTA-Fe养基)营养液、MS微量元素营养液、B5维生素营养液、2g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、30g/L山梨醇、2.0mg/L6-BA、0.5mg/LNAA、30mg/LHyg、3.0g/L植物胶，pH5.8NBr(再生NB、2g/L水解酪蛋白、30g/L蔗培养基)糖、30g/L山梨醇、2.0mg/L6-BA、0.5mg/LNAA、30mg/LHyg、3.0g/L植物胶，pH5.81/2MS(生1/2(MS大量元素营养液根培养基)+EDTA-Fe营养液+MS微量元素营养液)、B5维生素营养液、3g/L蔗糖、7g/L葡萄糖、40mg/LHyg、2.6g/L植物胶，pH5.8水稻转化用激素和化合物的配制2,