月季的花药培养

课题2月季的花药培养知识回顾单倍体育种的过程？花药离体培养（N）单倍体植株（N）秋水仙素处理，使染色体翻倍植株（2N）特点：1明显缩短育种年限2后代植株都为纯合子。正常植株（2N）花丝花药：囊状结构，内有很多花粉雄蕊一、被子植物的花粉发育

花粉母细胞（小孢子母细胞）4个小孢子减数分裂小孢子四分体1个小孢子（单细胞花粉粒）花粉粒（双核）有丝分裂单核双核

花粉母细胞（小孢子母细胞）4个小孢子减数分裂小孢子四分体1个小孢子花粉粒（双核）有丝分裂单核双核花粉管细胞核营养细胞生殖细胞核2个精子花粉是单倍体的生殖细胞小孢子母细胞（

）时期单核（

）期双核期（

）细胞核（

）细胞核（

）细胞（

）细胞（

）个精子（

）分裂（

）分裂单核（

）期（

）分裂减数小孢子四分体中边有丝生殖生殖花粉管营养有丝22NNNNNNNNN小孢子母细胞小孢子花粉囊花药花粉粒（双核期）成熟花粉8个精子控制花粉萌发并提供营养取决：培养基中的激素种类及浓度配比二、产生花粉植株的两条途径胚状体

——在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似；神奇的人工种子:通过胚状体途径形成小植株烟草花药培养胚状体发育途径愈伤组织转接种到再生培养基愈伤组织分化形成再生植株水稻花药培养愈伤组织发育途径部分花药产生愈伤组织接种在平板上的水稻花药1、材料的选择

花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的初花期。选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。三、影响花药培养的因素【思考6】选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎；选择单核期之后的花药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难，【思考7】为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。2、培养基的组成月季花的培养基配方在1000mlMS培养基配方中添加

2，4—D0.4mgKT0.2mgIAA4mg调节PH为5.83、植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等（一）材料选取

2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色)

焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。1、从花药看：月季的初花期从花粉看：单核期

从花蕾看：完全未开放的

花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）四、实验操作（二）材料的消毒5、无菌水冲洗3～5次

花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒2、无菌水清洗3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟（质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）【思考8】月季花蕾的消毒与菊外植体的消毒相比较，二者有何不同在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗。在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。1、剥取花药①勿损伤花药，否则接种后容易从受伤部位产生愈伤组织。2、接种【思考9】（三）接种和培养①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

3、培养②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。③注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化。4、鉴定和筛选〖思考10〗植物组织培养技术与花药培养技术