开展原位杂交技术可行性报告(FISH)

PAGEPAGE3荧光原位杂交技术-可行性报告******医院FISH的发展前景 1FISH的原理 1FISH的技术特点 1开展FISH的重大意义 2FISH在临床中的应用及操作程序 8FISH项目给社会及医院带来的效益 11公司简介 14售后服务 15开展荧光原位杂交（FISH）检测项目一．FISH的发展前景随着医疗水平的整体提高，“个体化诊断”、“分子诊断”和“靶向治疗”受到愈来愈多的重视。以荧光原位杂交医学检测领域。由于技术本身操作简单，重复性好、具有较高的灵敏性及特异性，因此很适应于临床医学在美国，FISHFDAFISH已成FISH的样本种类较多，可以是羊水、绒毛、流产组织，也可以是外周血、骨髓、体液及各种肿瘤组织等。在中国，近几年FISH已经得到了越来越广泛的应用，尤其在血液病诊断、产前诊断和实体肿瘤检测方面。二．FISH的原理原理：以核酸碱基互补配对原则为基础所发展出来的检测技术,主要是利用DNA序列的互补性,通过荧光标记的DNA探针与预处理的待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下,对荧光信号进行辨别和计数，即可对细胞、组织样本中的染色体或基因异常进行检测和诊断三.FISH的技术特点FISH技术具有以下几个方面的优势：操作简单－拥有离心机、水浴锅等常规仪器即可完成实验所需人工少－整个流程中人工操作时间在2-4结果报告快－常规FISH24结果直观－结果观察只需在荧光显微镜下判断信号的数目即可，无需人员特殊培训四．开展FISH的重大意义1.4FISH结果判定是在荧光显微镜下观察荧光信号数目，不存在主观原因，FISH1717目前比较公认的HER-2IHCOHerceptin

1+ 2+ 3+Herceptinnotindicated FISH indicatedFISH- FISH+Herceptinindicated下图是标准结果图，红色信号代表HER-2基因，绿色信号用于检测17号染色体数目，当红色和绿色信号数目比值大于2.2时即可判定为HER-2基因异常扩增。TOP2ATOP2A基因异常的乳腺癌患者对于含蒽环类药物的治疗方案更为敏感：TOP2ACMFCEF方案的病人拥有更长的无复发生存期及总生存期TOP2A基因异常的病人可以明显受益于含有拓扑异构TOP2ACEF51TOP2ACEF10%的死亡风险。存在TOP2A基因异常的乳腺癌患者预后更差：对于乳腺癌的研究表明，TOP2A在乳腺癌组织的表达水平与其预后指标存在一定的联系，TOP2A基因5PAGEPAGE15异常的病人预示着更短的无复发生存期（recurrence-freesurvival，RFS）但总生存期（OS）并无改变；并且TOP2A缺失的病人预后更差2：FISH在宫颈癌中的应用检测项目：TERC基因宫颈癌是全球35岁以下妇女第2位最常见的肿瘤，也是妇女生殖系统最常见的肿瘤，严重地危害妇女身体健康。在我国，每年约有新发宫颈癌病人10万，死亡人数3-5万。早期诊断是治疗宫颈癌及提高患者预后的有效手段。国际上通用的筛查宫颈癌的方法一般为宫颈细胞涂片形态检查及HPV病毒检测。细胞涂片检查敏感性一般在55％－80%左右，但一旦观察到异常细胞，特异性可达到90%以上。HPV检测虽敏感性高，在84%－100%之间，但特异性一般只在64%－95%之间，因为许多HPV阳性的病人在一年之内可转阴，并不会导致宫颈癌的发生。使筛查更准确、可靠及更有预见性。由美国NIH直接领导的针对宫颈癌的研究表明，宫颈细胞由非典型性发育异常向宫颈癌转变的过程中几乎都伴有3号染色体长臂扩增。其中，涉及到的最重要的基因可能是人类染色体末端酶（hTERC）基因。该基因的扩增可阻止细胞凋亡，因而可导致肿瘤产生。TERC基因检测意义：准确区分宫颈细胞高度癌前病变与低度癌前发育异常，即区分CIN2和CIN3及CIN190%预测CIN1/CIN2CIN3100%，特异性是70%对hTERCFISH3：FISH检测项目：p16基因、3、7、17号染色体数目膀胱肿瘤是泌尿系统中发病率最高的肿瘤，约占中国所有恶性肿瘤发病的20%左右。膀胱癌多发于男3∶15065岁以上的老人。膀胱癌在初被诊断时大多局限于膀胱，但约有6%病人已有远处转病治疗中关键的一个部分。FDAFISH3179号染色体部分(如p163717可以确诊膀胱癌；如一个指标出现了复杂的异常，也可判断为膀胱癌患者。心理和生理的刺激。更容易被患者接受。FISH检测主要特点是：无创性早期诊断1｝结合膀胱镜检查监视膀胱癌复发2｝检测与膀胱癌进展与分级相关的染色体异常3｝不受BCG免疫治疗影响与现有的诊断方法相比，能在分子水平最先发现复发。4：FISH在产前检测中的应用检测项目：13、18、21、X、Y染色体数目遗传病中，很大的一部份是由于染色体异常而引起的，目前，发现的种类已经超过1000多种。例如Down综合症，绝大部份就是由于21号染色体异常，呈现出三倍体的深色体组型而引起的，患者常具有严重的病症，如发育迟缓、智力低下等，此外13号染色体的三倍体的患者也出现严重的病症，如智力严重缺陷且伴有兔唇的表征。据统计，各种染色体疾病在人群中的爆发率相当高，在新生儿中，发病率就高达7.3‰，其中某些染色体异常，如18号染色体三倍体所引发的Edward综合症在人群中的爆发率甚至高达1/2000。研究表明131821X和Y染色体上的异常从而引起的疾病占新生儿染色体疾病的85%-90即只需通过对上述五条染色体进行分析，就可以对目前胎儿常见的唐氏综合症三体18号染色体三体13综合症、三X(47，XXX)XYY(47，XYY)综合症等进行检测。7天左右方可进行样品化验，此种检测方法耗时长、操作烦琐5Mb荧光原位杂交技术作为准确而快捷的分子诊断工具，在产前诊断领域的优势非常明显：1｝对被测细胞并无特殊的要求，分裂期或间期细胞均可进行检测2｝无需细胞培养，可以做到即取即测3｝24小时即可出诊断报告，可及时为医生、受检者提供参考数据4｝操作简便，利用不同颜色的荧光探针可在同一样本中同时检测多种染色体的异常5：FISH在血液肿瘤中的应用慢性淋巴细胞性白血病（慢淋）检测项目：RB1、P53、ATM、D13S25、CSP12存活几个月，而有的病人则能生存超过20年。长期以来，人们对慢淋的认识一直停留在临床观察上。近细胞遗传学技术，人们对慢淋病人的预后判断也变得更为科学及准确。基因丢失（平均生存32个月ATM基因缺失（平均生存79个月12号染色体三体（平均生存114个月）及13q14缺失（平均生存133个月）等，而检测这些指标的标准方法即是FISH研究的发现对临床个体化治疗提供了极有意义的理论依据及指导。多发性骨髓瘤检测项目：RB1、P53、1q21、D13S319、IGH相应的方案治疗病人。因而，探索准确的预后风险评估指标至关重要。目前，公认的较可靠的指标有C—反应蛋白、骨髓浆细胞形态，浆细胞增殖率，及分子细胞遗传学改变等，而其中以分子24.7［若有14)和或t(1；16)易位或p53基因缺失42.3个月（若有13q14缺失）或50.5个月［仅有t(1；14)易位或没有任何以上遗传学改变。而检测这些遗传学改变的标准方法为FISH慢性粒细胞性白血病检测项目：费城染色体检测（BCR/ABL）慢性髓性白血病（慢粒）为白细胞增加和脾肿大，其发病率为0.5人/10万，30~40岁的人居多，男性发病率较女性稍高。性粒细胞性白血病（CML）患者90%以上具有典型的Ph染色体，即染色体t(9;22)BCR/ABL10PhBCR/ABLPh染色体或BCR/ABL阳性已经成为CML的主要诊断标准。针对BCR/ABL融合蛋白已经发展出有特效的治疗药物STI571（格列卫。多数患者可在半年内达到细胞遗传学缓解。应用常规核型分析检测方法可以检测该异常，但核型分析存在以下几个问题，分辩率有限，一般检测5MB大小片断的异常可以记数的染色体分裂相有限，对于异常细胞含量少的样本检测比较困难需要细胞培养，耗时长对于临床中应用的PCR后期治疗用药指导性存在误差FISH在这一领域有着完美的表现：FISH100kb左右的异常，远远高于核型分析的分辩率耗时短（24小时出结果，操作简单目前FISH检测费城染色可以应用于以下几个方面，疾病确诊指导临床用药治疗效果监测移植效果监测微小残留检测6：性染色体错配骨髓移植检测项目：X、Y染色体个环节。由于FISH方法需要样本量少、检测快速，在这一领域有着重要的应用。目前很多骨髓移植医院采用FISH7：在非小细胞肺癌当中的应用非小细胞肺癌检测（EGFR）EGFR拷贝数的增加约占非小细胞肺癌的30％～40％EGFRgefitinib的有效率为35%,疾病控制率高达70%；9.8％EGFR（易瑞沙）的使用。实验操作应用荧光原位杂交技术对不同样本进行检测时，主要的操作流程是一致的，包括以下几个步骤：外周血、骨髓、羊水、尿液、外周血、骨髓、羊水、尿液、宫颈脱落细胞、石蜡样本，耗样本预处理2-4变性玻片样本变性探针变性5杂交过夜杂交耗时30-40分钟洗涤荧光显微镜下计数观察六：社会效益.医院效益.价格体系FISH检测项目主要成本在于探针，以下为每人份检测探针价格列表，检测项目检测项目探针名称GLP13/GLP21CSP18/CSPX/CSPY每人份单价（元）产前染色体数目异常检测试剂盒DiGeorge/VCFSGLPTUPLE1/GLPGLPRB1GLPP53多发性骨髓瘤检测试剂盒慢性淋巴细胞性白血病检测试剂盒GLPD13S319GLPIGHGLP1q21CSP12GLPGLPATMGLPRB1GLPP53乳腺癌检测试剂盒GLPHER-2/CSP17子宫颈细胞检测试剂盒GLPTERC/CSP3膀胱癌检测试剂盒CSP3/CSP7GLPp16/CSP性染色体检测试剂盒CSPX/CSPY费城染色体检测试剂GLPBCR/GLPABL注：以上单价按照20人份探针报价计算多发性骨髓瘤单个探针*多发性骨髓瘤单个探针*427.5372.5－1072.5慢200761801项中明确了“荧光原位杂交”可以应用于临床检测，网址：/newshtml/19264.htm。各级医院可以根据实际情况开展FISH1200次，多色FISH/FISH800-1500FISH2000-3000元。院方效益FISH｛乳腺癌检测试剂盒为例元/每人。计算以下内容检测项目探针成本/例（元）利润空间（元）手术数量/去年/最低预盈利(元)估检测数量GLP13/GLP21843.51156.5-2156.5DiGeorge/VCFS综合症检测试剂盒309491－1191性淋巴细胞性白血病单个探针 422* 378