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文档简介

口腔生物学实验

基础医学院·病原生物学教研室

何永林

2014.11ELISA法定量检测抗原分子[实验目的]

1.熟悉ELISA法；2.

掌握ELISA定量检测抗原的操作方法和步骤；3.熟悉标准曲线制作和定量；【实验内容】ELISA法定量检测血清HBsAg；观察耐氧试验[实验材料]

酶标记抗体：辣根过氧化物酶标记的抗-HBs(HRP-抗HBs-IgG)。抗体：抗HBs-IgG、待测血清原液（1.5mlEP管中约1ml）。缓种液：包被液、稀释液、洗涤液。底物液：含有邻苯二胺底物的溶液(邻苯二胺、或二胺基联苯胺都是HRP的作用底物)。终止液：2mol/LH2SO4。酶标板、温箱、酶标分光光度计。[实验方法]

包被孔6个（标记空白；阴性；阳性；原液；1:2；1:4）1.加待检血清(洗涤液空白；阴性；阳性；原液；1:2；1:4稀释各0.1ml)2.加酶标抗体(0.05ml

，空白孔不加

)

37°C20min。

3.洗板3-5次后；加底物A、B液各0:05ml

37°C20min4.每孔终止液0.05ml

5.酶标仪检测OD值）

37°C40min

[注意事项]3.板洗要干净：每次注满静置5-10秒，孔间不交叉；每次倒完后在吸水纸扣干。4.终止液时不要沾到手上或皮肤上2.在孔中稀释时不要接触杯壁，不要有气泡。1.待测血清稀释示意图1ml待测血清原液1:11:21:40.3ml稀释液0.3ml稀释液300ul300ul5.每班做1条标准曲线（浓度梯度递减和空白）酶标仪使用说明：开电源——按1设定波长——输入待测波长450nm（如更换波长，需用专用的更换启子把滤光片旋下更换）——把空白孔放在滤光片上调零——按复位键——按“调零”（检测光重启测量OD值，如大于3示仪器良好）——按0，把此时的OD作为0——

按“换屏”——按1选择统计，开始走纸——将待测孔放入，按孔上方的测量——换孔，再按测量，…,——测量完毕，按回车打印结果（显示不全按走纸

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