鼠疫病原学检验的实验室质量控制

鼠疫病原学检验的实验室质量控制宁夏疾病预防控制中心人畜共患病实验室2014年4月1日鼠疫病原学检验的实验室质量控制质量控制的定义鼠疫病原学检验的质量控制方法鼠疫病原学检验方法动物间鼠疫疫情的实验室复判实验室质量控制的定义实验室质量控制的定义质量控制(QualityContro,lQ.C)是监视全过程,排除误差,防止变化,维持标准化现状的一个管理过程。

鉴于鼠疫细菌学检验的重要性,有必要对其进行规范化管理。鼠疫细菌学检验质控(QualityControloftestYersiniaPestis)是鼠疫微生物学实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系。鼠疫病原学检验的质量控制方法室内质控(InternalQualityControlIQC)是指一个实验室内部对所有影响质量的各个环节进行系统控制，是由实验室内部制定并实施的，是质量保证的核心和基础。目的是控制本实验室常规工作的精密度，提高常规工作前后的一致性。室间质控(ExternalQualityAssessment简称EQA)简称室间质评。室间质控由上级业务单位采用一系列的办法连续地、客观地评价各实验室的试验结果，并发现室内质控不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差异，并帮助校正，使具有可比性，这种评价是一种回顾性评价。室内质控主要监测试验结果的精密度，而室间质控主要控制实验结果的准确度，不互相替代，参与室间质控的试验室应先做好室内质控。鼠疫病原学检验的质量控制方法鼠疫病原学检验的质量控制方法人员与组织管理仪器设备的质控疑似鼠疫材料的采取、保存和运输培养基、染色液、试剂盒等的质量控制鼠疫细菌检验程序及结果判定报告卡的书写、疫情上报及交换室内质控室内质控扎实的基础教育和专业知识职业道德和高度的责任心质量管理体系各实验室制定SOP专业化的技能培训继续教育人员与组织管理室内质控性能试验正确贮存无菌试验诊断试剂盒(噬菌体等)培养基量pH值试剂的质量控制室内质控生物安全柜显微镜高压锅离心机培养箱冰箱仪器设备鼠疫病病原学学检验验的质质量控控制方方法设立参比实验室发质控物进行检查评价定期举办各级培训班派观察员到实验室进行检查指导室间质控方法室间质质控的的一般般检查查项目目实验室室的布布局SOP制订订及执执行情情况实验室室安全全防护护和污污染物物处理理室内质质控执执行情情况及及各种种纪录录发放模模拟标标本(菌种种)，，规定定时间间内反反馈至至上级级业务务单位位以pH值、、软硬硬度、、鼠疫疫菌生生长数数量(活菌菌数)等为为综合合指标标对培培养基基进行行质控控和用用已知知菌对对噬菌菌体进进行质质控盲点试试验，，模拟拟标本本混入入监测测标本本常规规测定定对结果果进行行评价价，分分析错错误原原因鼠疫病病原学学检验验方法法鼠疫病病原学学检验验方法法染色镜镜检培养特特性噬菌体体裂解解动物实实验基因检检测鼠疫病病原学学检验验方法法鼠疫病病原体体发现：：1894年，，在香香港，，日本本学者者北里里柴三三郎和和法国国学者者亚力力山大大耶尔尔森二二氏。。分类位位置：：肠杆杆菌科科耶尔尔森菌菌属。。生物学学特性性分子生生物学学特性性：6MD、45MD、、65MD三种种质粒粒；目目前已已知IS100、IS285、IS1541、、IS1661四种种插入入序列列，分分布于于鼠疫疫菌质质粒的的染色色体基基因组组中。。毒力决决定因因子:F1抗原原，VWa抗原原，Pstl，Pgm分型:古典典、中中世纪纪、东东方、、田鼠鼠变种种四个个生物物变种种；5个个群（（A、、B、、C、、D、、E群群），，21个生生态型型。染色镜镜检革兰氏氏染色色美兰染染色典型的的鼠疫疫菌是是短而而粗、、两端端钝圆圆、两两极浓浓染的的椭圆圆形小小杆菌菌，革革兰氏氏染色色阴性性。细菌培培养病原学学在普通通培养养基上上28－30℃℃经24h，肉眼眼可见见形成成薄薄薄一层层淡灰灰色小小菌落落,圆圆形，，有光光泽，，中心心稍突突起。。透过过光线线呈灰灰白色色或淡淡青色色，菌菌落较较干燥燥，镜镜下：：中央央隆起起中心心发暗暗，有有粗糙糙颗粒粒（黄黄褐色色）周周围有有薄而而透明明的花花边，，呈锯锯齿状状。培养特特性Y.PEVY.E耶尔森菌属三个致病菌形态比较噬菌体体裂解解实验验28－－30℃24h噬菌带带明显显观察1-9天，，可以以从感感染动动物体体内检检出鼠鼠疫菌菌为阳阳性。。动物实实验鼠疫菌菌的基基因检检测病原学的检测DNA提取取水煮法法提取取可疑疑鼠疫疫菌DNA对于脏脏器标标本，，在强强毒实实验室室以无无菌手手续取取动物物的各各种脏脏器(心、、肝、、脾、、肺)约1g，，加入入到等等量生生理盐盐水中中，研研碎，，100℃℃水浴浴中煮煮沸10min，离离心，，取上上清直直接用用作PCR模板板对于培培养可可疑鼠鼠疫菌菌，在在平板板上刮刮取可可疑鼠鼠疫菌菌于装装有500ul蒸馏馏水（（生理理盐水水）的的1.5ml离离心管管中，，于沸沸水浴浴中煮煮10min，，离心心上清清液中中含有有可疑疑鼠疫疫菌DNA作为为PCR模模板。。细菌基基因组组DNA提提取试试剂盒盒提取取鼠疫疫菌基基因组组DNA操作方方法可可根据据试剂剂盒说说明书书进行行操作作。鼠疫菌菌的基基因检检测体系配制PCR-bufferdNTP引物（2对各1ul）TaqDNA聚合酶模板纯水总体积25ul2.5ul2ul4ul1ul（2.5U)1ul14.5ul鼠疫菌菌的基基因检检测PCR扩增93℃5min90℃1min60℃1min72℃1min30cycle72℃10min4℃保存鼠疫菌菌的基基因检检测琼脂糖糖凝胶胶鼠疫菌菌的基基因检检测拍照鼠疫菌菌的基基因检检测脏器悬悬液基基因检检测：：FI特特异性性片249bp，Pla特异异性片片456bp菌悬液液基因因检测测：FI特特异性性片249bp，Pla特异异性片片456bpPCR操作作鼠疫菌菌株的的复苏苏、培培养、、传代代、核核酸提提取均均在BSL-2实验验室操操作其余PCR过程程在普普通实实验室室操作作动物间间鼠疫疫疫情情的实实验室室复判判动物间间鼠疫疫疫情情的实实验室室复判判复判流流程日常监测胶体金抗体阳性间接血凝（抑制）阳性自毙鼠培养鉴定为阳性胶体金抗原阳性反向血凝（抑制）阳性培养鉴定为阳性报自治区疾控中心复判谢谢大大家！