常见微生物菌种衰退原因分析及预防措施送您

第第页常见微生物菌种衰退原因分析及预防措施，送您！微生物长期受到外界的影响，遗传性状必定发生某些变异。正是由于变异的存在才使得生物向前进化。然而由于突变的存在，菌种在培育或保藏过程中，可能会消失某些优良生产性状的劣化、遗传标记丢失、典型特征转变等现象，称为菌种衰退。比如苏云金芽孢杆菌由于菌种衰退，导致其新生的菌体芽孢和伴孢晶体都比较小；保藏的沙门氏菌鞭毛抗原丢失，导致H多价血清不凝固等。一.

菌种衰退缘由

1、表型延迟造成菌种衰退

表型延迟现象也会造成菌种衰退。如，在诱变育种过程中，常常会发觉某菌株初筛时产量较高，进行复筛时产量却下降了。

2、质粒脱落导致菌种衰退

质粒脱落导致菌种衰退的状况在抗生素生产中较多，不少抗生素的合成是受质粒掌握的。当菌株细胞由于自发突变或外界条件影响(如高温)，致使掌握产量的质粒脱落或者核内DNA和质粒复制不全都，即DNA复制速度超过质粒，经多次传代后，某些细胞中就不具有对产量起打算作用的质粒，这类细胞数量不断提高达到优势，则菌种表现为衰退。

3、连续传代

连续传代是加速菌种衰退的一个重要缘由。一方面，传代次数越多，发生自发突变(尤其是负突变)的几率越高；另一方面，传代次数越多，群体中个别的衰退型细胞数量增加并占据优势越快，致使群体表型消失衰退。

4、不相宜的培育和保藏条件

不相宜的培育和保藏条件是加速菌种衰退的另一个重要缘由。不良的培育条件如养分成分、温度、湿度、pH值、通气量等和保藏条件如养分、含水量、温度、氧气等，不仅会诱发衰退型细胞的消失，还会促进衰退细胞快速繁殖，在数量上大大超过正常细胞，造成菌种衰退。

二.

防止菌种衰退措施

1、掌握传代次数

尽量避开不必要的移种和传代，把必要的传代削减到最低的水平以削减突变几率。传代次数越多，产生突变的几率就越大，菌种发生衰退的机会就越高。在试验室检验或者是生产实际中，应严格掌握传代次数。中国药典当中规定，培育基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代，以防止菌株因传代次数过多引起衰退影响检验。

2、利用不同类型细胞进行接种传代

放线菌，霉菌用菌丝进行移种比分生孢子简单衰退，因菌丝是对核且有异核存在，所以移种霉菌相宜采纳孢子。

3、良好的培育条件

不良的培育条件会衰退细胞的消失，因此采纳相宜的培育基进行菌种培育，以削减衰退几率

4、采纳有效的菌种保藏方法

依据保存时间的长短，选择相宜的保存方法。

传代培育法：复苏后的第一代放于4℃冰箱或室温保存，定期传代培育。保藏时间依微生物种类而定。如，芽孢、霉菌、酵母菌保存6个月转一次，一般细菌1个月转一次，假单胞菌2周转一次。

甘油冻存法：将复活后经过性能确认的菌株新奇培育物（一般是其次代菌株），用0.85%的灭菌生理盐水（约1-2mL）洗斜面菌苔成菌悬液；将上述菌悬液吸取适量于灭菌管（冻存管）中（如，灭菌管容量为5ml，则取1.5mL菌液），加入等体积的40%灭菌甘油，混匀，密封。保藏温度为20℃，一般可保存1-2年。

瓷珠保存管保存：菌株保藏管内含特制的小珠（20-25颗）和特别溶液，只需将培育好的菌株接入溶液中，摇匀成菌悬液，细胞即吸附于小珠上，然后吸出溶液，将保藏管置-70℃可保存5年，置-20℃可保存2-3年。

小贴士

瓷珠保存管保存详细操作：

第一步：对需要保存的菌株进行必要的纯化，挑取生长旺盛时期的菌落，接入菌株。

保藏管中，通常需要接入4-7环，对于苛养菌应多接一些。

其次步：拧上盖子，充分猛烈震荡。

第三步：用无菌吸管将溶液吸走，尽可