病原微生物实验室生物安全管理手册

微生物实验室生物安全管理手册***疾病预防控制中心PAGEPAGE17备注序号备注序号名称1实验室人员和项目准入制度2人员培训考核制度3人员健康监护制度4生物安全检查制度5实验室人员生物安全行为规范6事件、伤害、事故和职业性疾病报告制度7实验室生物危险标识使用规定8实验室内务管理制度9实验室菌（毒）种和生物样本安全保管和档案管理制度10实验室废弃物管理制度11实验室消毒隔离制度12实验室应急处置预案13实验活动生物安全标准操作规程一、实验室人员和项目准入制度目的果准确可靠。适用范围适用于生物安全二级实验室安全运转及在此环境下的所有检测工作。职责进入生物安全二级实验室从事检测工作的所有人员严格按照本规定执行。具体要求：概述下列规定：具备操作资质的人员可在生物安全二级实验室内工作实验室。在实验室内的一切活动，必须遵照生物安全手册的规定进行。实验室内污染的空气需通过高效过滤器后方能排出室外。实验室内产生的污水，必须经过消毒后方可进入公共污水系统。室。实验室内准备二级全排式生物安全柜实验操作，置其内进行，以保证实验室内空间的安全。实验室运行的安全性要求确可靠。实验室工作的质量要求数据，必须准确可靠：实验室出具的检验报告，必须明确完整。实验室操作规程启动实验室开始工作前半小时。开启实验室主电源，使实验室及生物安全柜投入运行。开启顺序：①开启屋顶风机②开启全排风③开启空调④开启安全柜⑤打开房间紫外线灯。个人防护工作人员按照下列要求进行个人防护，才能进入实验室区域：在更衣室中换穿工作服和工作鞋。在清洁区内，根据实验要求做好防护。污染材料飞溅的操作时，需加戴防护面罩。进入实验室工作人员进入实验室时，每进入一道门，应将此门关好，再开启下一道门。进入实验室后，关闭房间紫外线灯。检查实验室运转是否正常。做好开始实验的各项准备。启用标本、试剂位，使其在冰箱外停留的时间尽可能短。操作吸管插入试管底部，用吸球缓慢吸取，避免产生汽泡或汽溶胶。离心时，应使用双盖封闭式离心机和全封闭试管，每管离心液总量低于最高容量1个刻度单位：平衡时不得有液体渗陋到管套中，离心机使用后立即用消毒液擦洗消毒。观察结果不打开容器的观察允许在生物安全柜外进行，否则，必须在生物安全柜内观察结果。准予携出实验室的材料确保不含感染性的实验材料，才可以从实验室携出。容器表面应用75%乙醇消毒。实验室清洁2075%污染物品处理毒。更换工作服。工作完毕的更衣顺序是，先用消毒液浸泡手套5放入高压消毒袋内，再次浸泡手套后除去手套，用75%酒精棉球擦面部裸露部位。实验室消毒每次工作完毕，生物安全柜内用75%酒精擦拭台面，消毒液消毒地面，开启紫外线灯照射1小时后，逐一关闭实验室送风和通风设备{关闭顺序与开启顺序相反}。实验记录与实验报告实验记录实验记录带出实验室将上述记录在纸张上的实验记录应用80福尔马林，密闭熏蒸消毒6小时后方可带出实验室。或阁着实验室玻璃窗由清洁区工作人员抄录一份。实验记录录入计算机24小时内录入计算机。记录准确的实验报告和录入时间。再按1周，以备实验室记录备份定期检查实验记录，核对备份与原始的实验记录，对记录中的缺陷提出修改意见。实验记录的保存年限实验记录保存一年。已使用的实验记录(出具报告，发表论文，或以其他方式引用)，在使用后再保存一年。如无特殊必要，备份的实验记录一般永久保存。出具实验报告在需要出具正式实验报告的场合再由单位签发人签字并加盖公章发出。标本保管规则标本进入实验室目的等相关信息。实验目的等相关信息。标本的保管根据标本的性质、目的进行保存，每分标本分两份，一份检测时使用，另一份备用。标本因各种原因损失时，启用后备标本，并重新备份。标本的销毁确定不用的标本，采用高压灭菌后焚烧的方式销毁。实验室装备保养实验室定期保养实验室的定期保养按照提供实验室设备厂商的规定进行，主要是对机械和电器部分进行维护。实验室仪器设备的保养和维护器必须按说明书规定的时间定期由专业人员更换，其它仪器设备也应根据实际需要清洁保养。实验室仪器设备的维修更换毒，方可处理或重新投入使用。意外情况处理实验室意外事件的处理原则造成或可能造成实验室污染30分钟后，对污染的物品进行清理。清理后的2小时再进行与处理记录表。重新使用。实验室人员的隔离观察发生可疑的实验室感染事故时，应对被感染的人员进行隔离观察。如果判定为法定的传染病感染，应按[传染病防治法]的规定报告，同时给予有效的隔离治疗二、人员培训考核制度目的规范实验室相关人员的培训考核适用范围适用于生物安全涉及的所有工作人员3、人员培训考核制度实验室工作人员的培训人组织进行，并指定熟悉实验室工作的人员担任辅导。培训内容包括：相关检验的国家诊断标准、处理原则以及本手册内容。实验室所有设备的使用方法。个人防护方法。实验室基本技术。实验室消毒净化的方法。实验室工作人员的资格考试3个月，才能获得独立进行实验室操作的正式资格。三、人员健康监护制度目的规范实验室相关人员的健康监护适用范围适用于生物安全涉及的所有工作人员3、人员健康监护制度工作人员从事工作前必须进行HIV每半年进行一次HIV抗体复检，并保留血样一年以上。生物安全危害是否发生。以便对从事涉及生物安全危害人员的健康状况进行跟踪。实验室工作人员的适合工作状态抗力下降的状况：妊♘、在实验室内连续工作4小时以上或其他原因造成的疲劳状态。四、生物安全检查制度目的规范实验室生物安全，保证设备正常运行。适用范围适用于生物安全涉及的仪器设备（比如生物安全柜等）3、生物安全检查制度实验室内，每2个月以细菌培养的方式进行安全性检测。生物安全柜内放置平板培养基24125分钟，然后盖上，每平板菌落数平均不得超过2五、实验室人员生物安全行为规范目的规范实验室人员的生物安全行为规范适用范围适用于生物安全涉及的所有工作人员生物安全组织管理与行为规范组织框架图单位法人{或授权}负责人↓实验室负责人↓生物安全员↓实验室工作人员各类人员相应行为规范}负责人负责组织生物安全实验室的立项、选址，施工队的资质验证。执行情况。负责组织对造成外环境污染、实验室污染、人身伤害事故的调查与处理。实验室负责人组织制定安全手册、操作规程等文件。的准确可靠。生物安全员有关安全与卫生政策与标准。一旦发现不安全因素，立即停止工作并上报实验室负责人。与有关人员讨论研究安全政策的问题。确认所有工作人员都具有进入实验室工作的资格。为所有人员提供连续性的安全要教育与指导。员提供最新的安全文献和信息资料。定期检查实验室的各项技术参数，组织对实验室装备的常规保养。露，也要予以调查，并向实验室负责人员和安全委员会报告调查结果和提出建议。染时，协助随访调查其疾病或缺勤情况。意外事件和事故进行详细的书面记录。确保任何需要修理和维护的仪器设备在消毒与净化之后方可运出实验室。作的微生物有全面、完整的了解；具有组织实验室工作的能力；对工作有高度的责任心。实验室工作人员进行。必须按规定进行个人防护，方得进入实验室。保持实验室环境的整洁，每项工作完成之后，必须清理和清洁台面，离开实验室注意个人的健康状况，出现身体不适情况，应及时向实验室负责人报告。实验室工作人员的技术要求可靠的实验结果。必须熟悉相关实验的国家标准，能够完成标准所规定的任务。一旦发生意外，立即向生物安全员汇报。4、个人防护程序个人防护用品的使用要求N95121631860型如有4手套更换。的防飞溅功能，重复使用前应进行彻底消毒。无过滤作用。袖口、脚踝口应为弹性收口，面部、腰部应有弹性收口或拉绳收口。套应根据需要及时更换。个人防护用品的穿戴顺序进入清洁区前穿上普通白大衣和实验室专用鞋。鞋套。注意将手套和鞋套分别套在袖口和裤口外。戴N95口罩及防护面罩、穿防水隔离服、防水鞋套、再戴外层手套。个人防护用品脱卸顺序完成实验后，在半污染区先用75%}。N95}。将脱掉的物品放入专用消毒袋中就地高压消毒。防护面罩等重复使用的物品立即放入消毒液内，按有关规定消毒处理。75%乙醇溶液消毒内层手套。消毒袋高压消毒。六、事件、伤害、事故和职业性疾病报告制度1、目的2、范围3、职责事故责任部门负责人填写事故报告单，报告事故发生的原因及采取的措施。4、工作程序事故分类凡违反各项规定所造成的事故均为责任事故，按其经济损失和人身伤害和大小分为以下几种：大小事故界限表损失情况损失情况小事故一般事故大事故重大事故经济损失≤100100~10001000~10000≥10000一人受伤，休工≤33日以上两人受伤或一人受伤，三人以上受伤，休工人身伤亡1-6残或死亡。事故的处理上级领导。事故发生3科室填写事故报告单，报业务质量管理科和行政管理科。事故发生后5重大事故发生后一周内，由中心负责人向上级主管部门送交事故处理专题报告。事故报告处理单等记录材料由业务质量管理科归档保存责任人技术档案。七、实验室生物危险标识使用规定目的规范生物安全二级实验室的使用和管理。适用范围适用于生物安全二级实验室。具体要求：关区域，造成感染的危险。险标本带入安全区域对人员造成威胁。八、实验室内务管理制度目的确保生物安全二级实验室的正常运行、实验人员、物品和环境的安全适应范围适应于生物安全二级实验室。职责进入生物安全二级实验室工作的所有工作人员严格遵照本管理制度执行。基本制度在主实验室设置清洁区、半污染区和污染区。入口处贴有醒目的生物危险标志。非实验室有关人员和物品不得进入。实验室内不得进食和饮水，或者进行其他与实验无关的活动。验室负责人的批准。实验过程中，严格按有关操作程序操作，降低剪除和气溶胶的产生。用移液器吸取液体，严禁口吸。实验室技术人员指导下进行上岗培训，达到合格标准，方可开始工作。实验室工作。实验室的工作人员必须遵守实验室的所有制度、规定和操作规程。疫苗必须进行免疫注射。所有培养物、废弃物在运出实验室前必须经可行的消毒方法进行消毒。工作前应消毒，活性物质溅出后要随时消毒。实验室特殊管理制度免疫耐受或正在使用免疫抑制剂的人员不许进入实验室，或必须经实验室负责同意方可入内。毒处理程序。实验室人员应接受必要的免疫接种和相应的抗体水品测定。实验室事故处理：工作人员在操作过程中发生意外，如针刺和切伤、皮肤污染、感染性立即进行紧急处理。具体措施按《实验室应急处置预案》执行。填写意外情况登记与处理记录表，并按规定报告给有关部门。处特殊情况外，禁止在实验室内使用锐器。剩余的标本应密封后置于适当条件下保存。实验过程中应使用鉴定合格的二级生物安全柜。九、实验室菌（毒）种和生物样本安全保管和档案管理制度1.目的规范实验室菌（毒）种和生物样本的保管和档案管理2.适用范围实验室菌（毒）3、实验室菌（毒）和生物样本的保管按国家规定可以保存的菌（毒）种，由指定的专人负责登记、保存和管理。按期传代、鉴定，必须在无菌室或接种罩内进行，并做好有关记录。在保存过程中发现菌（毒）种变异或死亡，应及时上报科长和中心主任。本区检出的地方菌（毒）株应及时上报，因工作需要暂时保留的菌（毒）株也应按上级规定的时间进行销毁处理。新发现的菌（毒）认。菌（毒）种必须每种设一记录卡，其内容包括：名称、编号、来源、分离日期、引进日用转移及销毁情况、保存者、部门负责人等。向上级主管部门申请索取菌（毒）种和向下级有关部门发放菌（毒）2人参加办理，严格执行国家有关规定，手续要完备，并认真做好记录备查。一、二类菌（毒）种，应派专人向提供单位领取，不得邮寄；三类菌（毒）须持有邮寄单位证明，并按照菌（毒）种邮寄与包装的有关规定办理。未经上级批准，任何单位及个人不得以工作之便，进行国际间各类菌（毒）好菌（毒）种安全防范工作。4、档案管理制度、非实验室人员不得随意查看实验室记录和销毁、专人负责保管感染者档案、未经领导批准不得向无关人员或单位提供任何实验室及感染者信息、HIV阳性报告及告知受检者本人或有关单位十、实验室废弃物管理制度目的规范废弃物处理适用范围尖锐器具和其他废弃物的处理。具体方法：尖锐器具的处理代替玻璃器材。尽可能使用带针头套的的注射器、无针头的系统和其他安全装置。打碎的玻璃器具，禁止用手直接清理，必须使用其他工具，如扫把、簸箕、夹子或镊子等。盛污染针、锐器及碎玻璃的容器在丢弃前必须彻底消毒。废弃物的处理严格按照规定执行。应放入适当的容器和严格防漏的高压袋内，待实验结束后立即就地高压消毒。的专用容器中，并及时加盖。专用的坚壁容器内，加盖密封。以上所有盛装废弃物的容器，在每次实验结束后，就地高压消毒。12130到消毒要求。中焚烧处理。十一、实验室消毒隔离制度目的规范微生物实验室和生物安全二级实验室的消毒隔离工作。适用范围微生物实验室和生物安全二级实验室。职责所有工作人员都必须遵从本规程。具体步骤实验室基本要求污染区，并有明显标识。2000的含氯消毒剂溶液浸湿的脚垫。实验室内所有物品应专用，须带出时必须严格消毒。套等。实验过程中注意自身防护，并防止操纵过程中的交叉污染。培养基、组织、体液等必须放在防漏密闭的容器中储运。血清学试验、样品的处理和分装应在BSL-2安全柜内进行。样品离心使用密封的离心杯，以防溅出。实验过程中使用的器材、实验废弃物均应按废弃物处理程序进行消毒处理。当传染性标本溢出或溅出后，应有专业人员立即消毒和清理。消毒，并进行空气消毒。离开实验室前，必须按有关规定消毒双手。消毒方法仪器等表面消毒：工作结束后，用含有效氯1000的消毒液或75%20分钟以上。121302000mg/L1小时以上。处理时应避免皮肤损伤。2000mg/L的消毒液或7520分钟以上。121℃高压消毒301000mg/L30-60751-3分钟。空气消毒：每次实验前后用紫外灯照射消毒，每次不少于11㎡。80ml/m36小时后方可带出。地面消毒：工作结束，应用含有有效2000mg/L的消毒液喷洒拖地。废弃物的处理：实验的废弃物应放入适当的容器内，就地121℃高压消毒30毒后的废弃物集中收集、焚烧处理。实验室高压消毒安全操作使用前应了解并掌握高压锅的原理及操作规则，以及不正确使用而导致的灾难性后果。按照操作规程使用高压锅接通电源，合上高压灭菌器左侧总电源开关。注入加热用水，注水至加热器罩的水位水准器配件尖端浸入水中为止。键，把所设温度存进程序。键，把所设时间存进程序。按“实行”键执行灭菌程序，此时“灭菌”灯闪烁。当灭菌程序执行完成，灭菌程序自动停止运行。0刻度时，打开高压灭菌器顶盖，取出灭菌样品。规程执行，并按照规定进行设备的维护。每1年保养一次，每月检测一次消毒效果。盖子或门必须拧紧。定期检查高压锅，以确保其正常工作，防止意外事故发生，保证消毒灭局效果。高压灭菌安全操作步骤在灭菌前将双层的高压灭菌带包好，废物在灭菌袋中的体积不能超过袋子体积的灭菌袋用橡皮带捆好，但不能扎得太死，否则蒸汽不能进入所料袋内影响灭菌效果。实验产生的所有废物应该及时就地灭菌处理。如果灭菌器正在使用或优于其它原因不当高压锅消毒灭菌盗时间后，取出物品放在废物收集处。当开始灭菌时必须确信灭菌国内水量合适，高压温度和时间设置正确。灭菌应保持在121℃30分钟，时间和温度不得超过设定值，否则灭菌袋会融化，清理困难。十二、实验室应急处置预案目的规范紧急情况的处理工作。适用范围微生物实验室和微生物安全二级实验室。职责遇有紧急情况所有工作人员严格按此规程处理。具体要求：30分钟后，对污染的物品进行处理。清理后在没有强毒微生物时，再实验室内受到意外伤害，例如割伤、烧伤、烫伤等，由实验室伤害事故可能导致被强毒微生物感染，例如针头刺破、锐器割伤、粘膜暴露等途径接触实验室事故可能造成气溶胶污染，如压力容器或管道破裂等，立即关闭实验室，疏散现1培养物等传染性物质的破碎30分钟。其后即可清除掉，玻璃碎片应当用镊子清理。污染区域应当用消毒剂清洗。破碎物品清理时如果使用了簸箕，应将其进行高压灭菌或用有效的消毒剂浸泡24小时将其弃入污染废弃物容器。试管破碎于密闭式安全离心杯中拧松；尔后，将整个离心杯高压灭菌。蓄意破坏十三、实验活动生物安全标准操作规程（一）艾滋病初筛检测实验操作规程目的保证艾滋病病毒抗体ELISA实验的准确性。适用范围艾滋病病毒抗体ELISA实验。具体要求样品采集-20℃同时做好记录。样品运送容器的材料要易于消毒处理，在所放试管周围上下垫有软性物质，以免碰碎，容器外标有HIV4℃以下运送。这样同时附送检单。样品登记和处理记初检结果和实验方法及所用试剂情况。1-2300015上清液备用，如在几天内检测可放在2-8-20℃冰箱。实验准备将试剂从冰箱中取出，按试剂盒要求时间恢复室温。检查并记录冰箱、温箱温度。期：整个实验过程中每一步操作都要在原始记录表上详细登记。按照试剂盒的要求配置洗液及其他所需要的试剂。加样和稀释必样温育贴好封板膜，按照试剂盒要求的温度和时间进行温育，最好选择湿育方法。洗板加酶结合物对于二步法ELISA实验需加酶结合物，按试剂盒要求完成。加底物洗好板后应立即加底物，需加自配的底物应现配现用。终止反应在规定的时间内用试剂盒中的或根据要求自行配置的终止液终止反应。酶标仪读物按照试剂盒的要求选择滤光片，确定空白孔位置，选择合适达的打印报告格式，读数并打印结果。所用仪器在使用后及时填写使用记录。结果判断计算根据试剂盒说明书要求的阴阳对照OD值范围判断实验的准确性，阴阳性对照OD在范围之内，试验方可成立，超出范围，试验失败，整个实验重做。在指控图上标出外部指控血清的S/CO值，判断实验结果是否被接受。以上两个条件俊被接受后，根据试剂盒要求计算cutoff值。小于cutoff值的标本为阴性，大于或等于cutoff值得标本为阳性，在cutoff±10%反应区标本，用原有的试剂盒另一种试剂重复试验。结果登记和报告ODHIV填写HIV抗体筛查阳性送检单。标本留存转送阴性标本收集血清冷冻保存一年。并填写阴性血清保存记录表，阳性标本收集血清封口包好，冷藏运送送确认实验室。支持性文件全国艾滋病监测工作规范艾滋病实验室安全操作及防护措施（二、结核杆菌实验室生物安全规程实验室管理制度和相关负责人姓名和电话。实验室应有明显的区域划分，清洁区，办污染区和污染区。无论进入实验室时间长短，必须填写工作日志。要严格遵守实验室的一切操作规程。进行结核菌操作时，需有两名工作人员同时进入实验室，尽量避免单独工作。任讨论，必要时加强预防措施。批准方可进入实验室。标本采集人员安全要求穿防护服，戴一次性口罩，帽子，戴医用手术手套。采集标本污染器材的处理：采集标本的痰盒，试管等污染器材军需高压处理。标本运送安全要求痰标本需留置在特制的痰盒内（直径4c，高2cm的光口盖密闭的塑料盒标本送达后痰标本运送箱及时用乙醇或是碳酸等化学消毒剂或高压的办法彻底消毒。实验操作安全要求结核病细菌学实验室要求