时间分辨荧光法与LC-MS-MS法在毛发毒品分析中的比较

时间分辨荧光法与LC-MS/MS法在毛发毒品分析中的比较

摘要：通过对实际工作中收集的涉毒人员头发进行分析，从灵敏度、准确度、假阳性及抗体干扰等方面比较时间分辨荧光法和LC-MS/MS法在实际工作中的应用及结果讨论。综合结果表明，液相色谱串联质谱法具有更高的灵敏度，可以满足公安部规定的阈值要求，快检设备灵敏度高但准确性不好，抗体干扰，结构类似物质会导致假阳性存在。Keys：毛发检测；灵敏度；准确度；假阳性；抗体干扰：Q503，D919.2：AComparisonofTime-ResolvedFluorescenceMethodandLC-MS/MSMethodinHairDrugAnalysisYUANJun-ning(ShanghaikelingInspectionTechnologyCo.,LtdJudicialIdentificationInstitution,Shanghai200123,China)Abstract:Byanalyzingthehairofdrug-relatedpersonnelcollectedinactualwork,theapplicationoftime-resolvedfluorescencemethodandLC-MS/MSmethodinactualworkandthediscussionofresultsarecomparedintermsofsensitivity,accuracy,falsepositiveandantibodyinterference.ThecomprehensiveresultsshowthatliquidchromatographytandemmassspectrometryhashighersensitivityandcanmeetthethresholdrequirementssetbytheMinistryofPublicSecurity.Therapiddetectionequipmenthashighsensitivitybutpooraccuracy,antibodyinterference,andstructurallysimilarsubstanceswillcausefalsepositives.Keywords:Hairdetection;Sensitivity;Accuracy;Falsepositive;Antibodyinterference毒品是我国管制的能够使人形成瘾癖的精神以及麻醉药品，对个人身心健康、家庭以及社会具有严重的危害。根据《中华人民共和国刑法》第357条规定，毒品是指鸦片、海洛因、甲基苯丙胺(冰毒)、吗啡、大麻、可卡因以及国家规定管制的其他能够使人形成瘾癖的麻醉药品和精神药品。一旦滥用，不但给个人生理和心里造成影响，吸毒会上瘾，会损害身体健康。还会对家庭和社会造成严重影响，吸毒需要资金，需要渠道。都会使自己走上一天不归路。所以涉毒管控工作迫在眉睫。通过更加先进科学的检测手段判定是否吸毒已经成为警察办案的必不可少的工具。毒品一经吸食将在尿液、血液、唾液、毛发等留下痕迹，但不同生物检材吸毒追溯期不同。其中血液，尿液，在人体内的代谢时间短，只能追溯近几天的涉毒情况。与血、尿等其他生物样品比，毛发具有易获取、易保存、目标物稳定、检出时限长、能反映较长时间（几个月或几年）的药物使用情况等优点被广泛应用。近几年来，由于毛发分析在禁毒过程中有更长的追溯期，在进入人体后，会随着血液循环进入毛囊，毒品原体及其代谢物会被毛发中的角质蛋白固定，并稳定的保留在毛发中。记录吸毒信息的头发长出头皮后，毒品及其代谢物会随着头发的生长从发根一端往发梢一端迁移，由此，通过分段检验，可以挖掘更长时间内的吸毒信息，被检测人员的吸毒史[1]。在不断的实践过程中，逐步形成了完善的“尿液+唾液+血液+毛发”四位一体的检测体系，同时也在评价戒毒效果方面发挥重大作用[2]。目前传统的检测方法还是以专业实验室设备检测（液相色谱串联质谱法或高分辨色谱）为主，在实际处理中，高分辨率质谱获得的数据能够对近似质量数产生的干扰近似能够降低，从而降低假阳性，在实际应用中具有定量准确，分析快速以及抗干扰能力强的特点，能够对毒品分析领域的确证要求较好地满足[3]。但是实验室检测时间周期比较长，专业性要求高，所以人体毒品样本的现场快检设备应运而生，其中时间分辨免疫荧光技术是近两年来来一项新型免疫检测技术，既保留了传统胶体金试纸条的现场快速检测优点，又加入了荧光检测技术的高灵敏度特点，提高免疫层析方法检测性能[4]。这种快检设备时间短，普通人员经过简单培训也能操作。本文从灵敏度、准确度、假阳性及抗体干扰等方面比较两种方法在实际工作中的运用。1方法1.1司法鉴定技术规范SF/ZJD0107025-2018《毛发中15种毒品及其代谢物的液相色谱-串联质谱检验方法》[5]。1.2时间分辨免疫荧光法2原理2.1毛发样品经清洗、冷冻研磨后，以甲醇超声法提取，用液相色谱-串联质谱的多反应监测（MRM）模式检测。经与平行操作的空白样品和添加样品对照，以保留时间、质谱特征碎片离子峰和离子对相对丰度比进行定性分析。2.2时间分辨免疫荧光技术是以镧系元素标记抗原或抗体，并与时间分辨测定技术结合而建立起来的一种新型非放射性微量免疫分析技术。其技术原理为利用具有双功能基团结构的螯合剂，将镧系元素标记到抗体(或抗原)上，经免疫反应形成复合物，由于镧系元素能发出荧光，故分离除去未结合的成分后，利用时间分辨荧光仪即可测定荧光强度，从而推测待测物含量[6-7]。3仪器3.1液相色谱-串联质谱联用仪（SHIMADZULCMS-8045）、色谱柱（SHIMADZUShim-packVP-ODS150mm×2.0mm,4.6µm）、冷冻研磨机（上海净信JXFSTPRP-CL）、超声波清洗机（小美超声）。3.2SuperTest1000全生物样本毒品分析仪4样品处理4.1取毛发样品依次用适量的水和丙酮振荡分别洗涤两次，晾干后剪成约1mm段，置冷冻研磨仪中粉碎，呈粉末状备用。称取毛发粉末20mg，加入1.0mL内标甲氧那明标准工作液（甲氧那明1ng/mL），冰浴超声30min，离心，移取上清液，于60℃水浴空气流下吹干。残留物用100L甲醇复溶，供快检设备分析。4.2取毛发样品10mg（5cm毛发20根左右）,剪碎后置于萃取液中，混匀静置萃取5min，然后取萃取液滴加到测试板上，每个孔位滴加5滴，然后静置8min后开始采用液相色谱串联质谱法用LC-MS/MS检测。通过仪器自带校正曲线，可以直接读出定量结果。5结果数据5.1灵敏度见表1表1两种方法检测结果的灵敏度比较TargetSuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）Threshold（ng/mg）MAMP0.0010.0010.2morphine0.0010.0010.2Ketamine0.0010.0010.25.2假阳性见表2表2两种方法假阳性的检测结果比较TargetSuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）SuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）SuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）MAMP0.18**1.840.501.880.45AMP****0.10*0.09MDMA0.03**0.33**0.42**MDA*********MDEA*3.05******注：*，SuperTest1000未显示具体数值；**，LC-MS/MS结果在有校数字内未显示具体数值。5.3准确性见表3表3两种方法的检测准确性结果比较TargetSuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）SuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）SuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）MAMP0.010.480.18**1.780.13AMP*0.10****0.02MDMA0.03**0.03**0.2810.26MDEA****3.05***MDA*******0.49Ketamine***1.649.530.323.93注：*，SuperTest1000未显示具体数值；**，LC-MS/MS结果在有校数字内未显示具体数值。6结果分析6.1由表1可知，对于三种常见毒物来说，时间分辨免疫荧光快速检测和液相色谱串联质谱两种设备的灵敏度都可以达到1pg，完全能够满足2018年10月31日发布的公禁毒〔2018〕938号《关于印发<涉毒人员毛发样本检测规范>的通知》的阈值要求。6.2由表2可知，对于苯丙胺类兴奋剂来说，它们之间有的是支链取代，有的是环取代衍生物[9]。快检设备对含有3、4-亚甲双氧甲基苯丙胺（MDMA）和3、4-亚甲双氧乙基苯丙胺（MDEA）的毛发样本会造成假阳性。因为抗体的相互干扰，大多数免疫法的特异性在于甲基苯丙胺衍生物的一个基团，而不是特定结构的物质，所以对于结构相似的物质及其衍生物，快检设备易造成假阳性[8]。6.3由表3可知，对于不同的毛发样本，通过两种检测设备最终得到的结果准确性还是有一定差别的，这主要是由于抗体之间有干扰影响，同类物质及其衍生物会干扰检测结果，所以会导致定量不准确。给禁毒工作人员造成干扰影响。7结果讨论时间分辨荧光快检法检测速度快，携带方便，可应用于多人次，多批次的现场初筛检测，而且灵敏度也已经满足了公安部规定的阈值要求，但是在结构相似或者衍生物的毒品成分分析时会出现假阳性情况，导致定量不准确。所以时间分辨荧光快检法暂时还不能作为吸毒人员认定的主要方法。LC-MS/MS法不管从灵敏度、准确度，还是毛发毒品代谢物的检测，都能满足检测鉴定的要求，所以此方法是目前毛发毒品检测鉴定的国际通用方法。保证检测结果更加科学，更加准确，可以作为社区戒毒、社区康复的长期监测手段，成为戒毒脱毒成功的认定依据[9]。Reference(References)：取毛发一小时内能测吸毒时间[N].东方卫报,2018-11-16.王春.浙江首创毛发检测吸毒新技术[N].法制日报,2018-01-24.沈敏,向平.滥用物质分析与应用北京:科学出版社2016.万红楠.免疫分析法在毒品检验鉴定中的应用及发展[J].辽宁警察学院学报,2018,2(108):65-69.SF/ZJD0107025-2018《毛发中15种毒品及其代谢物的液相色谱-串联质谱检验方法