色谱检测技术

第8讲色谱检测技术施用于作物上的农药，其中一部分附着于作物上，一部分散落在土壤、大气和水等环境中，环境残存的农药中的一部分又会被植物吸收。残留农药直接通过植物果实或水、大气到达人、畜体内，或通过环境、食物链最终传递给人、畜，严重危害人们的健康。

开展全面、系统的农药残留监测工作能够及时掌握农产品中农药残留的状况和规律，查找农药残留形成的原因，从根本上消除安全隐患。农药残留基本内容一、色谱法概述二、色谱分离过程三、色谱图四、色谱分类五、色谱图存在问题、原因及解决方法六、色谱检测技术的应用七、课堂小结八、作业一、色谱法概述色谱法是一种以吸附或分配平衡为基础的分离方法，由于混合物中各组分之间的理、化性质的差异导致吸附性能或分配系数的差异，它们以不同的组分分配到互不相溶的两相中，当两相相对运动时，各组分在两相中反复多次重新分配，结果会使混合物得到分离。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。

色谱分离过程主要是利用试样中各组分在固定相和流动相间具有不同的溶解和解析能力；或不同的吸附和脱附能力；或其它亲和性能的差异。

二、色谱分离过程

试样中各组分经色谱柱分离后，按先后次序经过检测器时，检测器就将流动相中各组分浓度变化转变为相应的电信号，由记录仪所记录下的信号——时间曲线或信号——流动相体积曲线，称为色谱流出曲线，或色谱图。三、色谱图一张色谱图双黄连黄芩苷：保留时间12.048min四、色谱分类

1、按两相状态分为液相色谱和气相色谱：

液相色谱被分离的物质处于液态混合物中，固定相可以是液体、固体、带有化学键和基团的固体等。

高效液相色谱仪由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统等五大部分组成。四、色谱分类

气相色谱法被分离的物质处于气态混合物中，固定相可以是液体、固体、带有化学键合基团的固体等。

气相色谱仪的组成包括：气路系统、进样系统、分离系统---填充柱和毛细管柱、温度控制系统（色谱炉与湿控电路）、检测与数据处理系统。四、色谱分类

四、色谱分类

纸色谱法柱色谱法薄层色谱法123四、色谱分类

2、按固定相的几何形式分类①柱色谱法是将固定相装在一金属或玻璃柱中或是将固定相附着在毛细管内壁上做成色谱柱，试样从柱头到柱尾沿一个方向移动而进行分离的色谱法。四、色谱分类

②纸色谱法是利用滤纸作固定液的载体，把试样点在滤纸上，然后用溶剂展开，各组分在滤纸的不同位置以斑点形式显现，根据滤纸上斑点位置及大小进行定性和定量分析。四、色谱分类

③薄层色谱法是将适当粒度的吸附剂作为固定相涂布在平板上形成薄层，然后用与纸色谱法类似的方法操作以达到分离目的。四、色谱分类

五、高效液相色谱图存在问题、原因及解决方法液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。1、峰拖尾原因1、流动相PH选择不当2、干扰峰3、样品与填料表面残留硅羟基发生反应解决方法调整PH值。a、使用更长的色谱柱。b、改变流动相或更换色谱柱。a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更换色谱柱1、峰拖尾2、峰前延原因1、样品过载2、样品溶剂选择不恰当3、柱温低解决方法降低样品含量。使用流动相作为样品溶剂。升高柱温2、峰前延3、峰分叉原因1、保护柱或分析柱污染2、样品溶剂不溶于流动相解决方法1、取下保护柱再进行分析。2、改变样品溶剂。3、峰分叉4、保留时间波动原因色谱柱没有平衡流动相组分变化温控不当解决方法在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱防止变化（蒸发、反应等）

调好柱温4、保留时间波动六、色谱检测技术的应用1、在中草药分析中的应用测定前先提取分离有效成分，再测定

①提取净化方法：溶剂提取、超声、固相萃取柱（加压使样品进入柱再水、甲醇洗，收集醇液进样）。②测定药物：如复方甘草冲剂中的甘草酸和绿原酸。中药规定的含量限度为多成分之和序号品名检测成分测定方法含量限度（%）1人参人参皂苷Rg1和Re、的总量；Rb1HPLC≥0.30；0.22人参叶人参皂苷Rg1、Re的总量HPLC≥2.253儿茶儿茶素和表儿茶素的总量HPLC≥21.04三七人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的总量HPLC≥5.05木香木香烃内酯、去氢木香烃内酯HPLC≥1.86木通齐墩果酸、常春藤皂苷元HPLC≥0.157瓦松槲皮素、山奈素HPLC≥0.028西红花西红花苷-I、西红花苷-II≥10.09西洋参人参皂苷Rg1、Re、Rb1的总量HPLC≥2.010大黄芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量HPLC≥1.511防己粉防己碱、防己诺林HPLC≥1.612防风升麻甙和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总量HPLC≥0.2413红参人参皂苷Rg1和Re、的总量；Rb1HPLC≥0.25；0.2014吴茱萸吴茱萸碱和吴茱萸次碱的总量HPLC≥0.1515补骨酯补骨酯素、异补骨酯素HPLC≥0.716苦参苦参碱、氧化苦参碱HPLC≥1.217金钱草槲皮素、山奈素HPLC≥0.1018胡黄连胡黄连苷-I、胡黄连苷-IIHPLC≥9.019厚朴厚朴酚与和厚朴酚的总量HPLC≥2.020厚朴花厚朴酚与和厚朴酚的总量HPLC≥0.2021牵牛子咖啡酸、咖啡酸乙酯HPLC≥0.2022香薷麝香草酚、香荆芥酚HPLC≥0.1623重楼重楼皂苷I、重楼皂苷IIHPLC≥0.8024穿心莲穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量HPLC≥0.8025蟾酥华蟾蜍次素和脂蟾毒配基的总量HPLC≥6.0中药规定的含量限度为多成分之和2、在制剂的测定和稳定性的研究①片剂的测定：复方甘草片②注射剂的测定：林可霉素③糖浆剂：泼尼松④软膏剂：氟氢松⑤其他：布洛芬缓释胶囊、栓、乳膏，以及药物制剂中的含量及杂质限量的检查六、色谱检测技术的应用3、体内药物分析血中、尿、胆汁、乳汁、脏器大量事实证明，如无临床药理学和临床药学研究给新药以确切的评价，要做到临床安全、合理、有效地用药将会遇到许多困难。因此，加强药物在生物样品内作用机理的研究，以了解和阐明药物药物结构、理化性质、剂型及生产工艺与药物疗效等关系，已成为评价药品质量的重要内容和依据。六、色谱检测技术的应用4、食品与饲料：①由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素,而普通的全氮测定法测饲料和食品中的蛋白质含量时不能排除这类伪蛋白氮的干扰,某些不法厂商添加三聚氰胺主要是利用三聚氰胺的高含氮量来增加产品的表观蛋白质含量。六、色谱检测技术的应用4、食品与饲料：②畜禽肉中土霉素、金霉素、四环素残留检查。③牛奶和饲料中抗生素残留。六、色谱检测技术的应用有机卤化物苯系物AddYourTitle一氧化碳汽车尾气中含有一氧化碳，工业锅炉和家用煤炉燃烧不完全放出一氧化碳，都污染环境。室内空气中挥发性污染物,尤其是苯系物的污染严重威胁人们的健康，新装修后苯、甲苯、二甲苯均严重超标,污染主要来源于装修用胶粘剂、涂料及油漆等化学品。自来